血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原N端肽和Ⅳ型胶原辅助诊断原发性肝癌的临床意义分析

目的 分析血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)和Ⅳ型胶原(CⅣ)辅助诊断原发性肝癌的可行性和临床价值。方法 选取82例原发性肝癌患者、33例肝硬化患者及127例健康对照者作为研究对象,分别作为原发性肝癌组、肝硬化组及健康对照组。检测并比较三组血清HA、LN、PⅢNP、CⅣ水平;分析血清HA、LN、PⅢNP、CⅣ的受试者工作特征曲线(ROC曲线)及曲线下面积(AUC);分析血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ的诊断界值及诊断效能。结果 原发性肝癌组血清HA 80.32(42.18, 165.50)ng/ml、LN 42.91(31.47, 74.91)ng/ml、PⅢNP 16.15(10.93, 31.33)ng/ml和CⅣ126.00(73.16, 236.60)ng/ml均显著高于健康对照组的26.83(17.25, 40.02)、30.46(25.02, 40.95)、6.38(4.93, 7.86)、48.49(40.24, 57.57)ng/ml(P<0.05);原发性肝癌组血清HA、LN、PⅢNP水平显著低于肝硬化组(P<0.05),原发性肝癌组血清CⅣ水平与肝硬化组比较无统计学差异(P>0.05);肝硬化组血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ水平均显著高于健康对照组(P<0.05)。ROC曲线及AUC分析血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ的诊断效能显示:血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ诊断原发性肝癌的AUC分别为0.8453、0.7195、0.9310和0.8842;血清HA、LN和PⅢNP鉴别原发性肝癌和肝硬化的AUC分别为0.7749、0.6208和0.6384。根据ROC曲线计算原发性肝癌和肝硬化的诊断界值,血清HA+LN+PⅢNP+CⅣ诊断原发性肝癌的灵敏度为92.7%。结论 血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ可用于原发性肝癌的辅助诊断,具有重要的临床价值。

不同部位鲽鱼皮酸溶性胶原蛋白的提取及其特性

以新鲜的鲽鱼黑皮和白皮为研究对象,从其中提取酸溶性胶原蛋白(acid-soluble collagens,ASC),并对其理化性质和乳化活性及乳化稳定性进行比较研究,为鲽鱼皮的开发利用提供一定的理论依据。通过傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)技术和扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)初步研究了黑皮和白皮ASC的结构特征;同时对其溶解性、流变学特性、等电点、乳化活性指数(emulsifying activity index,EAI)及乳化稳定性指数(emulsifying stability index,ESI)进行了研究。FTIR扫描结果表明,黑皮和白皮ASC都存在酰胺A、酰胺B、酰胺Ⅰ、酰胺Ⅱ、酰胺Ⅲ,均保持了胶原蛋白三维螺旋结构的完整性;SEM观察结果表明,黑皮和白皮ASC均呈现多空的网络结构,且分布比较均匀,说明酸法提取胶原蛋白的过程基本上保留了胶原纤维原有的空间网状结构。EAI及ESI结果表明,黑皮ASC的EAI明显低于白皮ASC(P<0.05),分别为(2.60±0.53)、(7.30±0.41)m^2/g,而黑皮ASC的ESI明显高于白皮ASC(P<0.05),分别为(49.12±5.18)、(27.56±4.91)min。以上结果显示,从黑皮和白皮中提取的ASC的理化性质和功能特性存在一定的差异。

绿鳍马面鲀(Navodon septentrionalis)鱼头酸溶性与酶溶性胶原蛋白的分离纯化及理化性质研究

利用酸溶法和酶溶法制备马面鲀鱼头酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC),并对所制备的ASC和PSC的氨基酸组成、SDS-PAGE、红外光谱、黏度和热变性温度,以及溶解度等性质进行分析。结果表明:马面鲀鱼头中ASC和PSC的提取率分别为0.94%±0.07%和3.91%±0.14%。Gly(265.0和251.8残基/1000残基)、Ala(111.0和107.6残基/1000残基)和Pro(87.0和83.1残基/1000残基)含量较高,而His和Tyr的含量较少,且未检测到Cys。ASC和PSC中亚氨基酸(Pro和Hyp)含量为169.3和160.6残基/1000残基。氨基酸组成分析、SDS-PAGE和红外光谱(FTIR)证实ASC和PSC均属于I型胶原蛋白,热变性温度分别为17.6°C和16.5°C。在酸性p H值范围内,ASC和PSC的溶解度较高;当Na Cl溶液浓度高于2%,ASC和PSC的溶解度会显著降低。综上,相对于哺乳动物类胶原蛋白,马面鲀鱼头ASC和PSC的亚氨基酸含量和热变性温度较低,结构稳定性差,易于降解,可作为胶原蛋白肽的制备原料进行开发。

鲤鱼鳞酸溶性胶原蛋白提取的研究

研究了以酸法提取鲤鱼鳞胶原蛋白过程中温度、时间、乙酸浓度的影响,并以SAS对影响因素进行了回归分析,得到了鲤鱼鳞胶原蛋白提取的最佳条件,温度18℃、提取时间38 h、乙酸浓度为1.3 m ol/L,在提取之前,采用Na2CO3处理对胶原蛋白提取有较大的提高。为淡水鱼综合加工利用提供理论依据。

草鱼鱼鳞、鱼皮和鱼骨酸溶性胶原蛋白特性对比研究

从草鱼鱼鳞、鱼皮和鱼骨中提取酸溶性胶原蛋白(ASC),对其特性进行对比分析。紫外光谱和电泳图谱结果显示,3种ASC紫外特征吸收峰出现位置与I型胶原蛋白紫外特征吸收峰出现的位置基本一致,分子结构都至少含有两条α链;傅里叶红外光谱显示,草鱼鱼鳞、鱼皮和鱼骨ASC在酰胺A带的N-H伸缩均以氢键形成缔合体,酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅲ带的特征吸收峰表明鱼鳞和鱼骨ASC的α-螺旋结构保存较完整,鱼皮ASC的α-螺旋结构已经被破坏;3种ASC在热稳定性方面存在一定差异,热变性温度鱼骨ASC(34.5℃)>鱼皮ASC(32℃)>鱼鳞ASC(31℃),可能与胶原存在的组织和所处的环境有关。

响应面法优化鲫鱼鱼鳞酸溶性胶原蛋白提取工艺

在单因素实验基础上,采用响应面法对影响酸溶性胶原蛋白(acid-soluble collagen,ASC)提取效果的3个因素即乙酸浓度、液料比和提取时间进行了优化,建立并分析了各因素与ASC得率关系的数学模型。结果表明:ASC最佳提取工艺条件为:乙酸浓度0.41mol/L,液料比12mL/g,提取时间54.81h,在此工艺条件下,ASC最高得率(以干基计)理论值为20.97%,而实测值可达20.68%,与理论预测值相比,相对误差为1.38%。ASC的相对溶解度在pH4时最大,当NaCl浓度低于3%(mg/mL)时,ASC的相对溶解度基本不变,当NaCl浓度大于3%(mg/mL)时,相对溶解度迅速降低,但都在40%以上。

有机酸种类对罗非鱼皮酸溶性胶原提取和性质的影响

本文比较了醋酸(AA)、酒石酸(TA)、柠檬酸(CA)提取的罗非鱼皮酸溶性胶原(ASC)的结构和性质。利用圆二色光谱(CD)仪和傅里叶变换红外光谱(FTIR)仪分析胶原的二级结构,利用差式扫描量热(DSC)仪测定胶原的热稳定性,并比较分析ASC的成纤维能力。结果表明,AA-ASC、TA-ASC、CA-ASC的提取率分别为15.87%、17.69%和28.63%。CD结果表明AA-ASC和CA-ASC的三螺旋构象含量接近,高于TAASC。FTIR数据表明AA-ASC的氢键含量最多,其次是CA-ASC和TA-ASC。根据DSC结果,发现三种胶原热转变温度(T_(m))没有明显的差异,但AA-ASC、TA-ASC和CA-ASC的焓值分别为1.18、0.73和0.35 J/g。根据成纤维实验结果,发现AA-ASC的成纤维速率和吸光度值最大,其次是CA-ASC和TA-ASC。研究结果表明,有机酸种类对胶原的提取和性质影响可能与羧酸数目和解离常数密切相关。

鲢鱼鱼皮中酸溶性胶原蛋白提取工艺研究

以鲢鱼鱼皮为原料,通过单因素试验和正交试验对鲢鱼鱼皮中酸溶性胶原蛋白的提取工艺参数进行分析,并用AR-500动态流变仪对鲢鱼鱼皮中酸溶性胶原蛋白的热变性温度进行分析。结果表明:鲢鱼鱼皮原料中酸溶性胶原蛋白提取的最佳工艺条件为:以乙酸作为提取剂,乙酸浓度0.3 mol/L,料液比1∶60(g/m L),提取时间96 h;此胶原蛋白的热变性起始温度为32.31℃,峰值温度为34.82℃。

秘鲁鱿鱼皮酸溶性胶原蛋白提取工艺优化及其特性

以秘鲁鱿鱼皮为原料,通过单因素试验及响应面优化法得到秘鲁鱿鱼皮酸溶性胶原蛋白(acid soluble collagen,ASC)最佳提取工艺,并对ASC的理化特性进行研究。结果表明:最佳提取工艺为在4℃条件下,冰醋酸浓度0.47 mol/L、液料比24.5 mL/g,浸泡43 h后,ASC提取率为31.76%;紫外全波长扫描结果表明,所得ASC在231 nm波长处有最大吸收峰,符合Ⅰ型胶原蛋白特征;凝胶电泳分析表明,提取的ASC含有α1、α2和β链;拉曼光谱分析表明,所得ASC结构完整,三螺旋结构未受到破坏;ASC的相变温度为50.07℃。

酸溶性三文鱼皮胶原蛋白超滤脱盐的研究

本研究采用了超滤膜分离技术,对三文鱼皮酸溶性胶原蛋白(ASC)进行了脱盐提纯的研究。研究了聚偏氟乙烯(PVDF)超滤膜对不同浓度胶原蛋白溶液的截留效果,当胶原溶液质量分数为1.2%时,截留率为90%;还讨论了胶原溶液质量分数、超滤操作压强、料液初始温度和超滤次数对脱盐效果的影响。结果表明,随着料液浓度降低、压力增大、料液初始温度升高(≤30℃)、超滤次数增多,脱盐率越高。当料液初始浓度为1.2%,温度为30℃,压力为0.3MPa,超滤7次时,氯离子脱除率可达到74.4%。

鲅鱼皮酸溶性胶原蛋白提取及分子特性的初步研究

【目的】在分子水平上初步探究酸溶性鲅鱼鱼皮胶原蛋白的特征性。【方法】在提取方法中用L9(34)正交试验寻求最佳提取条件。在分子特征性研究中检测了胶原蛋白紫外吸收图谱,并使用SDS-PAGE电泳测定分子量。【结果】酸溶性鲅鱼皮胶原蛋白的最佳提取条件是提取液浓度为0.2 mol/L柠檬酸溶液、固液比1∶30、提取48 h;所提取出的胶原蛋白在230 nm处有显著吸收峰而在260 nm处无吸收峰是酸溶性鲅鱼鱼皮胶原蛋白的特征性之一。【结论】SDS-PAGE电泳图表明酸溶性鲅鱼鱼皮胶原蛋白含有2条α链(a1和a2)、β、γ链,分子量约为127、115、278、343 kDa,根据文献可知该胶原为典型的Ι型胶原蛋白。

草鱼鱼鳞酶溶性胶原蛋白粘度特性及变性温度研究

采用旋转流变仪系统考察了浓度、pH、剪切速率、NaCl、CaCl2、丙三醇、乙醇和保温时间对草鱼鱼鳞酶溶性胶原蛋白（PSC）粘度的影响。结果显示，PSC溶液粘度随浓度增大呈指数增加；pH3时粘度最大，pH4和pH6～9时粘度下降，pH10时粘度又陡然回升；粘度随剪切速率的增大呈对数下降；NaCl和CaCl2的添加都会使PSC溶液粘度下降；丙三醇和乙醇添加量在10％以内，其添加浓度与粘度成正相关；保温时间长短对PSC溶液的粘度影响不大。通过粘度变化考察了不同处理下的变性温度，结果表明，随温度升高，PSC乙酸溶液粘度降低，在28.0℃左右粘度急剧下降，胶原蛋白变性，这与乌氏粘度计测定结果（胶原蛋白乙酸溶液的变性温度为32．0℃）存在较大差异。添加4％丙三醇或4％乙醇对PSC溶液的变性温度基本没有影响，而添加1．5％NaCl或2％CaCl2时。都使变性温度下降到22.0℃左右；PSC水溶液粘度明显大于其柠檬酸和乙酸溶液，且变性温度（32.0℃）高于其柠檬酸（26.0℃）和乙酸（28.0℃）溶液。

响应面法优化狭鳕鱼鱼皮酸溶性胶原蛋白质的提取工艺

【目的】优化狭鳕鱼(Theragra chalcogramma)鱼皮中酸溶性胶原蛋白质的提取工艺,为实际生产提供工艺数据和理论依据。【方法】在乙酸浓度、提取时间和料液比的单因素实验基础上,以酸溶性胶原蛋白质提取率为响应值,采用Box-Behnken设计实验,建立提取率的二次多项式回归模型,考察3个因素对提取率的影响。【结果】对酸溶性胶原蛋白质提取率的影响为料液比>提取时间>乙酸浓度;交互项中"料液比-提取时间"项对提取率影响极其显著,"料液比-乙酸浓度"项对提取率影响显著,其他交互项对提取率影响不显著;通过实验数据结合回归模型进行数学分析,得到提取狭鳕鱼鱼皮酸溶性胶原蛋白质的最佳工艺参数:乙酸浓度0.5mol/L、提取时间40min、料液比1∶9。在优化参数条件下,酸溶性胶原蛋白质提取率的理论预测值为20.53%,实测值为20.10%;试验提取得到的胶原蛋白电泳图谱较为清晰,无杂条带出现。【结论】该回归模型合理可行,提取的产物基本保持了胶原蛋白质的原有结构。

鲤鱼鱼皮和鱼骨酶溶性胶原蛋白的性质比较

以鲤鱼鱼皮和鱼骨为原料提取得到酶溶性胶原蛋白(PSC),对鱼皮PSC和鱼骨PSC的性质进行比较。电泳结果表明,鱼皮PSC和鱼骨PSC都属于Ⅰ型胶原;2种胶原蛋白中,脯氨酸和羟脯氨酸含量均低于牛皮酸溶性胶原蛋白;粘度测定的结果显示,鱼皮PSC的变性温度为28.1℃,鱼骨PSC的变性温度为30.0℃;差热分析的结果说明,鱼骨PSC的热稳定性高于鱼皮PSC,这与氨基酸分析和粘度分析的结果相一致;傅立叶红外光谱分析结果显示,鱼皮PSC和鱼骨PSC结构具有很大的相似性。

体积排阻高效液相色谱法测定酸溶性Ⅰ型胶原蛋白含量的研究

目的建立酸溶性Ⅰ型胶原蛋白含量测定的体积排阻高效液相色谱法(size-exclusion high-performance liquid chromatography,SE-HPLC)并进行方法确认,为快速、准确测定酸溶性Ⅰ型胶原蛋白含量提供技术参考。方法通过优化流动相组成、流速及柱温等因素来改善峰形,提高柱效,确定最佳检测条件,采用含DAD检测器的Agilent 1260高效液相色谱仪进行检测,检测波长为210 nm,外标法定量并进行方法学研究。结果选择300 mmol/L磷酸钠-150 mmol/L氯化钠(pH=6.0)为流动相,设定流速为0.4 mL/min,柱温为20℃时,酸溶性Ⅰ型胶原蛋白在体积排阻色谱柱Agilent Bio SEC-5(300A,4.6 mm×300 mm,5μm)(1A=0.1 nm)上的分离能获得最佳柱效。方法学研究结果表明,酸溶性Ⅰ型胶原蛋白在1.5~120.0μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),定量限为0.6μg/mL。用建立的方法连续进样6次,检测供试品溶液的Ⅰ型胶原蛋白含量,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.1%;加标回收率为92.8%~101.3%。结论该方法简便、快速,准确度、精密度和稳定性良好,可用于制备医疗器械产品的酸溶性Ⅰ型胶原蛋白含量的测定。

海参体壁酸溶性胶原提取及氨基酸组成分析

以海参体壁为原料,采用乙酸溶剂法提取酸溶性胶原。以酸溶性胶原得率为指标,通过均匀设计试验确定了乙酸溶剂法提取酸溶性胶原的优化条件:温度为4℃,乙酸浓度为0.5 mol/L,料液比为1∶1 000,提取时间为72 h,在此条件下酸溶性胶原的得率可达到胶原纤维原料的7.35%(质量分数)。氨基酸组成分析表明,海参体壁酸溶性胶原的甘氨酸(Gly)含量为33.6%,羟脯氨酸(Hyp)含量为7.04%。

鲤鱼鱼皮和鱼骨酶溶性胶原蛋白性质异同的分析

本研究对以鲤鱼鱼皮和鱼骨为原料得到的两种酶溶性胶原蛋白(PSC)的性质进行比较分析。结果表明,两种胶原蛋白中脯氨酸和羟脯氨酸含量均低于牛皮酸溶性胶原蛋白;黏度法测定鱼皮PSC的变性温度为28.1℃,鱼骨PSC的变性温度为30.0℃;DSC分析的结果也说明鱼骨PSC的热稳定性高于鱼皮PSC;电泳结果表明,鱼皮PSC和鱼骨PSC的肽链组成和多肽链的分子量相近,二者具有很大的相似性。

草鱼鱼鳞酶溶性胶原蛋白肽脱腥脱苦工艺研究

以草鱼鱼鳞提取的酶溶性胶原蛋白肽（papain soluble collagen peptide，PSCP）为研究对象，研究不同截留分子量纳滤膜对PSCP回收率的影响；并以正交实验L9（3^4）研究了不同β-环糊精添加量、水浴时间、水浴温度对PSCP腥苦味及回收率的影响；最后分析了PSCP中氨基酸的含量和比例。结果显示，纳滤膜截留分子量为400～600u时，PSCP回收率最小（16．71％），推测PSCP分子量介于300～600u之间。β-环糊精最佳包埋条件为：添加量4％、水浴温度70℃、水浴时间40min，在此条件下鱼鳞胶原蛋白肽的回收率为92-21％，感官评分为9．30，脱腥脱苦效果最好。PSCP氨基酸分析结果显示，有16种氨基酸含量大于1％，共占总氨基酸含量的99．07％，其中羟脯氨酸含量大于8％。该方法及优化后的工艺参数为工业化生产提供了依据。

酸溶液对猪皮中胶原蛋白溶出率的影响

探讨了3种酸溶液对猪皮胶原蛋白溶出率的影响。采用单因素试验对主要影响因素进行了分析,结果表明:以猪皮胶原蛋白溶出率为指标,柠檬酸作用效果最佳,醋酸次之,盐酸作用效果较差。

几种淡水鱼鱼鳞酶溶性胶原蛋白的比较研究

利用红外光谱(FT-IR)分析比较3种不同前处理试剂对几种淡水鱼鱼鳞酶溶性胶原蛋白(PSC)结构的影响。结果表明:盐酸、碳酸钠对鱼鳞PSC结构有很强的破坏作用;采用乌氏黏度计测得草鱼、鳙鱼、鲢鱼、鲫鱼4种淡水鱼鳞PSC的变性温度分别为33.0、31.9、31.5、30.8℃;测得4种鱼鳞PSC中羟脯氨酸含量分别为47.85、44.91、40.36、39.59mg/g;通过电泳考察4种鱼鳞PSC的分子量分布,其中草鱼鱼鳞PSC由3条不同的肽链α1、α2、α3组成;鳙鱼、鲢鱼、鲫鱼由两条α链(α1和α2)组成;电泳谱带无杂带,表明所提胶原蛋白纯度高且达到电泳纯;通过红外光谱比较分析了4种鱼鳞PSC结构,结果表明,4种鱼鳞PSC红外结构基本一致。结合红外光谱和电泳分析表明,4种鱼鳞PSC均为Ⅰ型胶原蛋白。