高提取率成年牛皮酸溶胶原制备及其性能表征

以成年牛皮为原料提取胶原,在保证胶原纯度的同时提高了胶原提取率。成年牛皮经蛋白酶、硼氢化钠溶液预处理,然后在酸膨胀状态下被捣碎。胶原捣碎液经盐析纯化2次,得到酸溶牛皮胶原液,其提取率可达20%左右。对所得酸溶胶原液进行了纯度、形貌以及天然性的表征。氨基酸组成分析及凝胶电泳结果显示:该酸溶胶原液具有良好的纯度;原子力显微镜观察与粒径测试的结果共同揭示,所提取胶原液中的胶原具有多分散性,存在着从胶原分子到胶原纤维的多种形态;红外光谱及酶切结果显示所提取胶原没有变性,可作为进一步提纯胶原的原料。

罗非鱼鳞胶原蛋白的提取及其酶解产物的抗氧化性

以罗非鱼鳞为原料,提取酸溶胶原蛋白(acid-soluble collagen,ASC)和酶促酸溶胶原蛋白(pepsin-soluble collagen,PSC),并对PSC的理化性质及其酶解产物抗氧化性进行探讨。实验结果表明:0.1 mol/L HCl提取ASC和PSC的得率分别为3.52%和14.88%;PSC氨基酸组成中,每1000个氨基酸残基甘氨酸为351个,亚氨基酸——脯氨酸和羟脯氨酸为180;PSC强吸收峰在205 nm处,磷酸盐缓冲液检测PSC的性质,与I型胶原蛋白相符。PSC经胃蛋白酶水解3 h,过氧化抑制率达到82.8%,抗氧化效果略优于等量的Vc。

胶原中不同构象组份的水解性能研究

用ＳＤＳＰＡＧＥ法研究了酸溶胶原中的α１，α２，β１１，β１２组份在中性水溶液以及加入盐（ＡｕＣｌ３等）后的水解能力．实验表明：在水溶液中，α１与α２的水解能力相近，β１１与β１２的水解能力也相差不多．但在加入与乳剂成熟条件一致的金属盐［ＡｕＣｌ３（０．１６７‰，ＮＨ４ＣＮＳ（２‰）和Ｎａ２Ｓ２０３（１‰）］之后，由于金属离子（尤其是Ａｕ３＋）的影响，α１的水解能力明显大于α２，β１１的水解能力明显大于β１２．本文还讨论了影响胶原中不同组份水解能力的各种因素．

间质性肺疾病血清和支气管肺泡灌洗液中Ⅲ型前胶原含量及其临床意义

检测了２６例间质性肺疾病（ＩＬＤ）患者和１１例正常对照组的血清和支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）含量，结果表明，ＩＬＤ病人血清和ＢＡＬＦ中ＰＣ－Ⅲ水平显著高于对照组； 且疾病组ＢＡＬＦ中ＰＣⅢ水平与其中巨噬细胞总数相关；ＢＡＬＦ中ＰＣⅢ含量用白蛋白标记表示，两组均分别显著高于其血清中的含量，这提示ＢＡＬＦ中高水平ＰＣⅢ是肺局部产生所致，认为ＰＣⅢ水平的改变可做为评估肺内胶原代谢的有用指标。

赖氨酸羟化酶2在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其对食管鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的通过观察赖氨酸羟化酶2(PLOD2)在食管鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织中的表达水平并分析其与临床病理参数间的相关性,探讨PLOD2调控食管鳞癌细胞侵袭转移的作用机制。方法应用免疫组织化学法检测60例食管鳞癌患者(收集于2016年1月至2017年12月新乡医学院第一附属医院)肿瘤组织和配对癌旁组织中PLOD2的表达水平并分析其与临床病理参数的关系;应用天狼猩红染色检测胶原纤维蛋白沉积;LV-vector、LV-over/PLOD2慢病毒载体转染食管鳞癌细胞系EC-109细胞,应用即时荧光定量PCR法检测PLOD2表达情况;细胞迁移和侵袭实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测PLOD2/AKT上皮-间质转化信号通路相关蛋白的表达。结果在食管鳞癌患者肿瘤组织中PLOD2的表达水平(81.7%,49/60)显著高于配对癌旁组织(8.3%,5/60;P<0.01);且与肿瘤浸润深度和淋巴结转移显著相关(P<0.01);天狼猩红染色显示,PLOD2高表达的食管鳞癌组织中胶原纤维沉积显著高于PLOD2低表达的组织(P<0.01);细胞迁移和侵袭实验结果显示,过表达PLOD2可提高EC-109细胞的迁移和侵袭能力,与LV载体组相比,差异有统计学意义(P<0.01);Western blot结果显示,过表达PLOD2可上调黏着斑激酶(FAK)/AKT信号通路相关蛋白p-FAK、p-AKT、波形蛋白等的表达。结论PLOD2在食管鳞癌组织中高表达,并与肿瘤迁移和侵袭密切相关;PLOD2促进食管鳞癌迁移和侵袭的机制可能与激活FAK/AKT信号通路、促进上皮-间质转化进程有关。