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高赖氨酸蛋白基因在转基因生菜中的表达和遗传转化 被引量:9
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作者 李兴涛 李霞 +4 位作者 张金文 牛俊义 郭蓉 杨慧 刘玲 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期472-475,共4页
以生菜(LactucasativaL.)为受体材料,将含有高赖氨酸蛋白基因的植物表达载体pLBI用农杆菌介导法进行遗传转化,获得47株转基因生菜植株.PCR和Southern-blotting检测证实目的片段在T0代的整合,RT-PCR检测表明目的基因的转录.T0代植株赖氨... 以生菜(LactucasativaL.)为受体材料,将含有高赖氨酸蛋白基因的植物表达载体pLBI用农杆菌介导法进行遗传转化,获得47株转基因生菜植株.PCR和Southern-blotting检测证实目的片段在T0代的整合,RT-PCR检测表明目的基因的转录.T0代植株赖氨酸(Lys)含量的测定分析表明,赖氨酸有不同程度的提高,比对照提高最高的可达9.46%.T1代植株PCR检测证明,目的基因能够遗传. 展开更多
关键词 高赖氨酸蛋白基因 基因生菜 赖氨含量 遗传
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辣椒高赖氨酸蛋白基因Cflr全长cDNA的克隆及其组织表达特征 被引量:7
2
作者 孙晓波 房瑞 +2 位作者 余桂红 刘全兵 马鸿翔 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1310-1316,共7页
为了在茄科植物中寻找新的高赖氨酸蛋白基因,以辣椒栽培种‘江蔬7号’的成熟花粉为材料,根据马铃薯和番茄中高赖氨酸蛋白基因的保守序列设计引物,通过RT-PCR技术扩增到一条长390bp的cDNA片段,继而应用RACE技术克隆了一个辣椒高赖氨酸蛋... 为了在茄科植物中寻找新的高赖氨酸蛋白基因,以辣椒栽培种‘江蔬7号’的成熟花粉为材料,根据马铃薯和番茄中高赖氨酸蛋白基因的保守序列设计引物,通过RT-PCR技术扩增到一条长390bp的cDNA片段,继而应用RACE技术克隆了一个辣椒高赖氨酸蛋白基因的全长cDNA,命名为Cflr(Gen-Bank登录号:EU367999)。Cflr基因cDNA全长920bp,5′端有84bp的非翻译区,3′端具有完整的polyA尾,包含一个编码223个氨基酸的完整开放阅读框。Cflr基因与马铃薯和番茄高赖氨酸蛋白基因cDNA序列的同源性为50%-60%,氨基酸序列的同源性为40%-50%。该基因所编码的蛋白质中赖氨酸含量为21.2%,苏氨酸含量为10.3%,是目前已知赖氨酸含量最高的天然蛋白。半定量RT-PCR结果表明,Cflr基因在辣椒未成熟花药、成熟花粉、花瓣、茎、叶片和根中均有表达,在成熟花粉和花瓣中的表达丰度最高,在叶片中表达量明显减少,而在未成熟花药、茎和根中的表达量极少。 展开更多
关键词 辣椒 高赖氨酸蛋白基因 RACE 组织表达特征
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高赖氨酸蛋白基因遗传转化水稻的研究 被引量:8
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作者 蒋家焕 刘峰 +3 位作者 许明 黄志伟 谢丽雪 郑金贵 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第6期615-618,共4页
采用农杆菌介导的方法将高赖氨酸蛋白基因导入台粳9号幼胚诱导的胚性愈伤组织中,经潮霉素筛选,抗性愈伤分化成苗,共获得2株转基因植株.对这些植株及后代植株进行GUS染色和PCR及PCR Southern b lot检测分析,确定高赖氨酸蛋白基因已整合... 采用农杆菌介导的方法将高赖氨酸蛋白基因导入台粳9号幼胚诱导的胚性愈伤组织中,经潮霉素筛选,抗性愈伤分化成苗,共获得2株转基因植株.对这些植株及后代植株进行GUS染色和PCR及PCR Southern b lot检测分析,确定高赖氨酸蛋白基因已整合到台粳9号基因组中,并能稳定遗传表达.经检测,转基因水稻糙米赖氨酸含量为0.349%,比对照提高29.3%;转基因水稻秸秆赖氨酸含量为0.341%,比对照提高8.3%. 展开更多
关键词 台粳9号 高赖氨酸蛋白基因 遗传转化 农杆菌
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农杆菌介导的转高赖氨酸蛋白基因(sb401)水稻T4代分析 被引量:9
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作者 李科 王世全 +5 位作者 吴发强 李双成 邓其明 王玲霞 梁越洋 李平 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期131-136,共6页
通过农杆菌介导的方法用富赖氨酸蛋白基因(sb401)转化粳稻品种日本晴,获得了独立的10个转化株系,对转化株系进行连续自交,通过筛选得到9个纯合的T4代转化株系。Southern blotting分析发现,整合位点是随机的,并为低拷贝(1~3个)... 通过农杆菌介导的方法用富赖氨酸蛋白基因(sb401)转化粳稻品种日本晴,获得了独立的10个转化株系,对转化株系进行连续自交,通过筛选得到9个纯合的T4代转化株系。Southern blotting分析发现,整合位点是随机的,并为低拷贝(1~3个)。TAIL-PCR扩增得到8个T—DNA侧翼序列,并定位于日本晴的7条染色体上。蛋白质和氨基酸测定分析发现,sb401基因对各株系的蛋白质、赖氨酸和其他氨基酸组分的提高起到了一定的作用。将杂交结果与T-DNA插入位置结合分析发现,在低拷贝的情况下,表达量的差异不明显。 展开更多
关键词 基因水稻 位置效应 富赖氨酸蛋白基因 热不对称交错聚合酶链式反应 赖氨含量 蛋白质含量
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番茄花粉特异表达的高赖氨酸蛋白基因(tsb)的克隆与特性分析 被引量:6
5
作者 赵倩 于静娟 +1 位作者 朱登云 敖光明 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期275-279,共5页
To obtain a new lysine rich protein gene, tomato tsb cDNA was synthesized from nearly matural anther mRNA by RT PCR. Sequence analysis indicated that the isolated fragment was composed of 748 bp, encoding a glutamic a... To obtain a new lysine rich protein gene, tomato tsb cDNA was synthesized from nearly matural anther mRNA by RT PCR. Sequence analysis indicated that the isolated fragment was composed of 748 bp, encoding a glutamic acid rich (22 55%) and lysine rich (14 89%) protein which was hydrophilic throughout and contained seven imperfect repeated motifs of sequence V V E K K N/E E. It had 70 22% homology to the sequence of SB 401 cDNA reported by Liu et al. The deduced amino acid sequence shares 69 96% identity with the reported gene. Southern blot analysis indicated that tsb was one copy in the tomato genome tsb expressed only in pollen. 展开更多
关键词 番茄花粉 表达 高赖氨酸蛋白基因 tsb 克隆 品质改良 种子蛋白利用率
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根癌农杆菌介导的高赖氨酸蛋白基因转化叶用莴苣的研究 被引量:6
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作者 朱路英 刘玲 张振贤 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2004年第1期39-42,共4页
构建了植物表达载体pLBI,该载体携带 35S启动子、高赖氨酸蛋白基因 (LRP)、NPTII基因和NOS终止子 .对影响根癌农杆菌 (AgrobacteriumtumefaciensL .)转化的多种因素进行探索后 ,建立了一种农杆菌介导的稳定的叶用莴苣遗传转化系统 .选... 构建了植物表达载体pLBI,该载体携带 35S启动子、高赖氨酸蛋白基因 (LRP)、NPTII基因和NOS终止子 .对影响根癌农杆菌 (AgrobacteriumtumefaciensL .)转化的多种因素进行探索后 ,建立了一种农杆菌介导的稳定的叶用莴苣遗传转化系统 .选择目前生产上大量推广应用的叶用莴苣品种 ,以其无菌苗子叶为外植体 ,经农杆菌LBA4 4 0 4 (含质粒pLBI)感染 ,在含 ρ(Kan) /mgL-1=10 0的芽分化培养基上筛选转化芽 ,转入含相同浓度抗生素的生根培养基上进行生根筛选 ,直至得到完整的再生植株 .PCR扩增及Southernblot的检测结果均表明 ,高赖氨酸蛋白基因已整合到叶用莴苣基因组中 .图 4表 4参 展开更多
关键词 高赖氨酸蛋白基因 叶用莴苣 根癌农杆菌 遗传转化
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高赖氨酸蛋白基因在大肠埃希菌中的表达 被引量:1
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作者 李学琳 高学军 +3 位作者 卢志勇 骆超超 刘晓飞 敖金霞 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期78-81,共4页
从四棱豆中克隆高赖氨酸蛋白基因wblys,通过PCR扩增wblys片段,转入原核表达载体pGEX-4T-1,构建pGEX-4T-1/wblys大肠埃希菌工程菌,表达重组蛋白,IPTG诱导后,发现细菌全蛋白在44 ku(含GST标签)处多出1条明显条带。HPLC检测赖氨酸含量。诱... 从四棱豆中克隆高赖氨酸蛋白基因wblys,通过PCR扩增wblys片段,转入原核表达载体pGEX-4T-1,构建pGEX-4T-1/wblys大肠埃希菌工程菌,表达重组蛋白,IPTG诱导后,发现细菌全蛋白在44 ku(含GST标签)处多出1条明显条带。HPLC检测赖氨酸含量。诱导后菌体总赖氨酸含量比正常菌体提高15.84 mg/g。在大肠埃希菌中高效表达植物源高赖氨酸蛋白基因,为该基因在益生菌中表达提供研究工作基础。 展开更多
关键词 高赖氨酸蛋白基因 大肠埃希菌 表达
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转移到水稻中的富赖氨酸蛋白基因的初步研究
8
作者 GaoYuefeng 邱敦莲 《国外作物育种》 2002年第5期2-2,共1页
关键词 基因 品质育种 水稻 富赖氨酸蛋白基因
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农杆菌介导法将高赖氨酸蛋白基因sb401导入玉米的研究 被引量:4
9
作者 铁双贵 孙静 +5 位作者 岳润清 齐建双 王延召 柏松 陈小洁 田保明 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期49-53,共5页
以玉米杂交组合PA×PB的胚性愈伤组织为材料,通过农杆菌介导法将高赖氨酸蛋白基因sb401导入到玉米中。经过双丙胺膦筛选,共获得70株再生植株,其中15株经PCR检测呈阳性,将部分PCR呈阳性的植株进行Southern杂交,结果表明,sb401基因已... 以玉米杂交组合PA×PB的胚性愈伤组织为材料,通过农杆菌介导法将高赖氨酸蛋白基因sb401导入到玉米中。经过双丙胺膦筛选,共获得70株再生植株,其中15株经PCR检测呈阳性,将部分PCR呈阳性的植株进行Southern杂交,结果表明,sb401基因已经整合到玉米基因组中。bar蛋白试纸条检测结果呈阳性,推测目的蛋白得到了表达。 展开更多
关键词 玉米 农杆菌介导法 高赖氨酸蛋白基因
原文传递
高甲硫氨酸蛋白基因的克隆及转化大豆的研究 被引量:1
10
作者 陈宏伟 钱玮 +1 位作者 饶力群 邱业先 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1930-1939,共10页
为克隆高甲硫氨酸蛋白基因并导入大豆以提高大豆甲硫氨酸(Methionine,Met)含量,本研究首次报道利用同源克隆的方法从芦苇中克隆高甲硫氨酸蛋白基因,并利用农杆菌介导法将高甲硫氨酸蛋白基因导入大豆。基因克隆及测序结果表明该基因编码... 为克隆高甲硫氨酸蛋白基因并导入大豆以提高大豆甲硫氨酸(Methionine,Met)含量,本研究首次报道利用同源克隆的方法从芦苇中克隆高甲硫氨酸蛋白基因,并利用农杆菌介导法将高甲硫氨酸蛋白基因导入大豆。基因克隆及测序结果表明该基因编码区420 bp,编码139个氨基酸,其中含有21个Met,Met含量达到15.11%。GUS组织化学染色、荧光定量PCR和测序结果表明,该基因已整合进大豆基因组中。8株转基因大豆叶片甲硫氨酸含量测定表明:各转基因植株甲硫氨酸含量均有不同程度提高,最高幅度达51.11%。本研究可为高必需氨基酸贮藏蛋白编码基因的克隆和转化及大豆品质改良及其功能研究提供借鉴。 展开更多
关键词 高甲硫氨酸蛋白基因 农杆菌 基因大豆
原文传递
嗜水气单胞菌TPS-30株丝氨酸蛋白酶基因与溶血素基因在大肠杆菌中的融合表达 被引量:11
11
作者 潘晓艺 郝贵杰 +3 位作者 姚嘉赟 徐洋 尹文林 沈锦玉 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期591-597,共7页
嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶和溶血素是该菌重要的致病因子与保护性抗原。致病性嗜水气单胞菌TPS-30株为江浙一带鱼类暴发病病原主要血清型O:9的代表株。研究利用PCR方法扩增嗜水气单胞菌TPS-30株的丝氨酸蛋白酶基因(Spe)和溶血素基因(Hl... 嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶和溶血素是该菌重要的致病因子与保护性抗原。致病性嗜水气单胞菌TPS-30株为江浙一带鱼类暴发病病原主要血清型O:9的代表株。研究利用PCR方法扩增嗜水气单胞菌TPS-30株的丝氨酸蛋白酶基因(Spe)和溶血素基因(Hly),将基因Spe和Hly通过柔性片段进行融合,并将融合片段插入pET32a的多克隆位点,构建成重组融合表达载体pET32a-Spe-Hly。将重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙醛-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得融合蛋白Spe-Hly。表达产物经SDS-PAGE检测,显示与预期大小约130kD相吻合的融合蛋白带。纯化融合蛋白并对鲫鱼进行免疫攻毒试验。结果表明,丝氨酸蛋白酶基因和溶血素基因融合表达载体构建成功,并成功获得了融合蛋白Spe-Hly,对鲫鱼的免疫保护率达81.4%。这为基因工程亚单位多价疫苗的开发提供基础。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 丝氨蛋白基因 溶血素基因 融合表达
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水稻转高赖氨酸蛋白质基因(sb401)植株的获得及种子中蛋白质和氨基酸的含量分析 被引量:24
12
作者 王为民 赵倩 +2 位作者 于静娟 朱登云 敖光明 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期603-607,共5页
用来源于马铃薯花粉的高赖氨酸蛋白质基因和玉米醇溶蛋白基因启动子构建了一个植物表达载体。采用农杆菌介导法导入籼稻品种龙特甫B ,PCR和Southernblot结果表明外源基因已整合到水稻基因组中,Westernblot分析表明高赖氨酸蛋白质基因已... 用来源于马铃薯花粉的高赖氨酸蛋白质基因和玉米醇溶蛋白基因启动子构建了一个植物表达载体。采用农杆菌介导法导入籼稻品种龙特甫B ,PCR和Southernblot结果表明外源基因已整合到水稻基因组中,Westernblot分析表明高赖氨酸蛋白质基因已在转基因水稻种子中表达。对7株转基因水稻种子的分析表明,蛋白质的含量(10 . 87%~13. 16 % )平均提高了18. 7% ,赖氨酸的含量(0 . 4 7%~0 . 6 0 % )平均提高了10 % ,苏氨酸的含量(0 . 4 2 %~0 . 5 3% )平均提高了15 . 71% ,苯丙氨酸、蛋氨酸、组氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸等必需氨基酸的含量也均有不同程度的提高。 展开更多
关键词 水稻 高赖氨蛋白基因 农杆菌
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野桑蚕中肠组织cDNA文库的构建及丝氨酸蛋白酶基因片段的克隆与序列分析 被引量:13
13
作者 王燕红 李兵 +4 位作者 王东 朱莎 赵华强 卫正国 沈卫德 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第27期11663-11665,共3页
[目的]构建野桑蚕中肠组织cDNA文库并分离其丝氨酸蛋白酶基因。[方法]利用TaKaRa公司生产的cDNA Library Construction Kit构建了野桑蚕中肠组织的cDNA文库,并采用测序法克隆分析丝氨酸蛋白酶基因cDNA。[结果]经鉴定,文库的滴度达6.2... [目的]构建野桑蚕中肠组织cDNA文库并分离其丝氨酸蛋白酶基因。[方法]利用TaKaRa公司生产的cDNA Library Construction Kit构建了野桑蚕中肠组织的cDNA文库,并采用测序法克隆分析丝氨酸蛋白酶基因cDNA。[结果]经鉴定,文库的滴度达6.2×105pfu/ml,文库插入片段的平均大小为1.2 kb左右。从文库的测序结果中获得了野桑蚕丝氨酸蛋白酶基因片段(登录号:EU672968),序列分析结果显示:该基因片段由854个核苷酸组成,编码284个氨基酸残基。通过对该基因片段编码的氨基酸和其他10种昆虫的丝氨酸蛋白酶基因编码的氨基酸的同源性分析,发现该氨基酸序列与其他丝氨酸蛋白酶具有一定的同源性。[结论]该基因的发现对于研究家蚕和野桑蚕对外来入侵物的抗性具有重要意义。 展开更多
关键词 野桑蚕 中肠组织 CDNA文库 丝氨蛋白基因 序列分析
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旋毛虫丝氨酸蛋白酶基因的克隆与分析 被引量:2
14
作者 李莲瑞 付宝权 +2 位作者 卢强 韩文瑜 刘明远 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期200-205,共6页
以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫3日龄成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序,用分子生物学软件对所得cDNA序列进行了分析。序列分析结果显示,阳性克隆Zh68cDNA全长为1372bp,含有1个1287bp的完整的开放阅读框... 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫3日龄成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序,用分子生物学软件对所得cDNA序列进行了分析。序列分析结果显示,阳性克隆Zh68cDNA全长为1372bp,含有1个1287bp的完整的开放阅读框架,编码由429个氨基酸组成的多肽,理论分子质量为47.5ku,等电点为8.45。SMART分析表明,1~18位氨基酸为信号肽序列,37~277位氨基酸为典型的丝氨酸蛋白酶胰蛋白酶类结构域,其中His88、Asp142、Ser233为催化中心的3个主要氨基酸残基,78~80位氨基酸为N-糖基化位点(NCS),另外还有6个保守的Cys形成二硫键。BLASTn同源性分析表明,与其他生物丝氨酸蛋白酶的基因序列无明显的同源性,为1个新的cDNA分子。BLASTp蛋白质同源性分析表明,与丝氨酸蛋白酶的同源性为30%左右。Southern—blot杂交表明,此基因在旋毛虫基因组中属于多基因家族,具有基因多态性。cDNA的PCR结果表明,此基因在旋毛虫肌幼虫、新生幼虫及成虫期均有表达。 展开更多
关键词 旋毛虫 丝氨蛋白基因 克隆
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蒙古冰草半胱氨酸蛋白酶基因MwCP1的克隆 被引量:2
15
作者 敖特根白音 杨学举 +3 位作者 郎明林 云锦凤 赵勇 陈桂顺 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期11-17,共7页
利用RACE技术从蒙古冰草中分离到1个半胱氨酸蛋白酶基因序列,命名为MwCP1,Genbank注册号为KJ534636。序列分析表明:MwCP1基因全长1042bp,含有1个579bp的开放型阅读框,编码192个氨基酸,含有1个CP保守区,属于CP1家族成员。基因编码蛋白的... 利用RACE技术从蒙古冰草中分离到1个半胱氨酸蛋白酶基因序列,命名为MwCP1,Genbank注册号为KJ534636。序列分析表明:MwCP1基因全长1042bp,含有1个579bp的开放型阅读框,编码192个氨基酸,含有1个CP保守区,属于CP1家族成员。基因编码蛋白的分子量为20.908KD,理论等电点为5.339,属于亲水性、非跨膜蛋白。其编码的氨基酸序列与Genbank中粗山羊草半胱氨酸蛋白酶蛋白(登录号:EMT10192.1)具有较高的氨基酸一致性。 展开更多
关键词 蒙古冰草 半胱氨蛋白基因 克隆 序列分析
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阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶基因变异分析 被引量:2
16
作者 贾万忠 李志 +1 位作者 赵亮 伦照荣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期191-196,202,共7页
目的研究阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶(TvCP)基因变异特点,为分子种系发生和遗传进化等提供参考资料。方法利用PCR扩增TvCP基因,用pBS-T或pET28b载体构建重组质粒,转化大肠埃希菌,筛选阳性克隆,测定目的基因序列。通过以序列相似性为基础... 目的研究阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶(TvCP)基因变异特点,为分子种系发生和遗传进化等提供参考资料。方法利用PCR扩增TvCP基因,用pBS-T或pET28b载体构建重组质粒,转化大肠埃希菌,筛选阳性克隆,测定目的基因序列。通过以序列相似性为基础的数据库搜索方法检索同源序列,利用Clustal X、DNAstar等软件分析TvCP基因核苷酸和氨基酸序列多态性、遗传变异和进化规律。结果克隆的TvCP2和TvCP3基因与数据库中相应参考序列在核苷酸和氨基酸水平上的相似性均为99%以上,高度保守。克隆的TvCP4基因与TvCP4参考序列在核苷酸和氨基酸水平上的相似性为97.5%以上,属于TvCP4基因家族的两个不同成员。根据阴道毛滴虫基因组数据库信息,经分析表明TvCP4酶前体由305个氨基酸残基组成,共有大小一致的TvCP4同源分子9个和N-末端缺少部分氨基酸残基的同源分子2个,它们之间的氨基酸序列相似性为62.3%~96.7%。TvCP4、TvCP1-3、TvCP12、TvCP25和半胱氨酸蛋白酶65(CP65)之间也有同源性,氨基酸序列相似性约为61%~88.2%。此外,阴道毛滴虫还拥有为数众多的其他组织蛋白酶L样成员,TvCP构成呈高度多样性。序列联配和聚类分析表明TvCP酶活性位点、酶前体结构中ERFNIN样基序和形成二硫键的半胱氨酸残基数目和位置非常保守,进化树分析也表明它们可能由共同的祖先分子通过基因复制和不断突变进化而来。结论TvCP组成一蛋白酶家族,家族内各成员酶活性位点上残基高度保守,但其他位点上的序列呈现高度多态性;推测TvCP家族各成员可能由一个共同的祖先基因分子进化而来,在保持酶基本功能的同时又赋予多样的功能。 展开更多
关键词 阴道毛滴虫 半胱氨蛋白基因 变异 进化树
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少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶基因同源性分析 被引量:5
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作者 王瑞 王军 杨晓野 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期123-127,共5页
为了比较不同地理株的捕食线虫性真菌-少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶基因的同源性,首先利用Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒,提取少孢节丛孢菌内蒙古株(Arthrobotrys oligospora CHIM)的DNA,然后根据GenBank中相应丝氨酸蛋白酶基因,分别设... 为了比较不同地理株的捕食线虫性真菌-少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶基因的同源性,首先利用Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒,提取少孢节丛孢菌内蒙古株(Arthrobotrys oligospora CHIM)的DNA,然后根据GenBank中相应丝氨酸蛋白酶基因,分别设计上下游引物;再经PCR扩增后,纯化并回收扩增产物,然后进行序列测定并分析。结果表明:少孢节丛孢菌内蒙古株丝氨酸蛋白酶基因序列与少孢节丛孢菌瑞典株(AY444597)和少孢节丛孢菌云南株(AF516146)同源性分别为80.3%和84.1%;虽然这3株菌具有较高的亲缘性,但其差异也非常明显,这一结果说明少孢节丛孢菌在不同国家或地区间有差异。 展开更多
关键词 捕食线虫性真菌 少孢节丛孢菌 丝氨蛋白基因 同源性分析
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水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转化桑树获得转基因植株的初报 被引量:12
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作者 王洪利 楼程富 +2 位作者 张有做 谈建中 焦锋 《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第3期291-294,共4页
利用基因枪法将水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 (OC)导入桑树组织 ,经抗性筛选和组织培养获得再生植株 ,通过对转基因植株的PCR Southern杂交及RNA点杂交等检测 ,证实OC基因转化桑树成功 ,为选育抗虫性桑树品种奠定了基础。
关键词 水稻半胱氨蛋白酶抑制剂基因 桑树 遗传转化 基因 抗虫育种 基因植株
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脊尾白虾丝氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆及表达分析 被引量:4
19
作者 李洋 刘萍 +3 位作者 李健 李吉涛 马朋 高保全 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1166-1174,共9页
采用RACE方法获得了脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因的cDNA序列。该基因全长1 516 bp,开放阅读框1 245 bp,编码414个氨基酸,其预测分子量为45.06 kD,理论等电点为5.694,并含有两个糖基结合位点。同源性... 采用RACE方法获得了脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因的cDNA序列。该基因全长1 516 bp,开放阅读框1 245 bp,编码414个氨基酸,其预测分子量为45.06 kD,理论等电点为5.694,并含有两个糖基结合位点。同源性分析发现其与斑节对虾(Penaeus monodon)同源性最高,达到49%。组织表达分析表明,serpin基因在脊尾白虾血细胞中表达量最高,其次是肝胰腺和鳃组织,在肌肉中表达量最低。不同盐度胁迫后脊尾白虾的血细胞serpin基因表达量在盐度胁迫8 h时显著高于对照组(P<0.05),肝胰腺组织中serpin基因表达量在盐度胁迫后2 h和24 h出现明显峰值,且显著高于对照组(P<0.05)。上述结果表明,脊尾白虾serpin基因参与了急性盐度胁迫下机体的应激反应。本研究通过克隆脊尾白虾酚氧化酶原激活系统中的丝氨酸蛋白酶抑制剂基因cDNA全长,分析盐度胁迫后其在血细胞和肝胰腺组织中的表达变化规律,以期为脊尾白虾的健康养殖提供理论基础和参考依据。 展开更多
关键词 脊尾白虾 丝氨蛋白酶抑制剂基因 组织表达 盐度胁迫 应激反应
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总状毛霉丝氨酸蛋白酶基因结构和功能的生物信息学分析 被引量:1
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作者 柯野 曾松荣 郑秋桦 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期370-376,共7页
利用PCR和RACE(cDNA末端快速扩增)技术从总状毛霉中克隆获得1个丝氨酸蛋白酶新基因,利用生物信息学方法对该基因序列、编码的酶序列以及酶性质和结构进行预测。结果表明:该基因编码区序列长1 421bp,由3个外显子和2个内含子组成,编码由42... 利用PCR和RACE(cDNA末端快速扩增)技术从总状毛霉中克隆获得1个丝氨酸蛋白酶新基因,利用生物信息学方法对该基因序列、编码的酶序列以及酶性质和结构进行预测。结果表明:该基因编码区序列长1 421bp,由3个外显子和2个内含子组成,编码由429个氨基酸残基组成的多肽;对该多肽的组成和进化分析表明,其成熟肽属于蛋白酶K家族的胞外蛋白酶;通过同源建模结构分析表明,该酶没有二硫键,有152个氢键和29个盐键,酶的Glu190、Ala192和Asp215残基与一个Ca2+相结合,酶活性位点残基Asp44和Ser241溶剂可及表面积较大,分别达到0.211 42和3.309 32;该酶的底物结合区域中,S1和S4口袋结构明显,S2次之,S3最不明显,部分组成S1和S4口袋的氨基酸残基不保守,这可能使该酶具有独特的水解性。上述结果可为该蛋白酶基因的异源表达和结构与功能关系等方面的研究提供参考。 展开更多
关键词 总状毛霉 丝氨蛋白基因 生物信息学分析
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