酿酒酵母超氧化物歧化酶的分离纯化研究

酿酒酵母CNU94经发酵培养后,离心收集菌体,将菌体用甲苯法破壁得到的粗酶液调节pH除杂蛋白,丙酮二次沉淀后,用DEAE32纤维素柱层析梯度洗脱,得到纯化的SOD,其比活为3500u/mg,收率为58.3%。PAGE电泳后的活性染色显示,酵母超氧化物歧化酶具4条明显的同功酶。该样品经KCN,H2O2,CHCl3乙醇抑制试验,酶类型为Cu/ZnSOD。

高压脉冲电场对酿酒酵母杀菌效果影响和模型分析研究

研究了高压脉冲电场(pulsed electric field,PEF)对接种于胡萝卜汁中酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae,CGMCC2.604)的杀菌效果并进行了模型分析。结果表明,随电场强度和脉冲时间增加,PEF对酿酒酵母的杀灭效果增强,25kV/cm、2173μs时酿酒酵母降低了4.5个对数。Weibull模型和Log-Logistic模型均能很好的拟合PEF处理酿酒酵母的失活曲线,模型评价参数(Af,Bf,SS,RMSE和R2)分析表明,Log-Logistic模型比Weibull模型能更好地拟合PEF处理下酿酒酵母失活动力学变化。

重组酿酒酵母表达白斑综合征病毒VP28的保护性初探

目的:构建重组酿酒酵母表达白斑综合征病毒VP28蛋白,并对其口服给药后的保护效率进行分析。方法:以白斑综合征病毒的vp28基因(基因库编号:FJ756456.1)作为研究对象,构建重组酿酒酵母S.cerevisiae EBY100/pYD1-VP28,通过SDS-PAGE、Western blot以及免疫荧光分析对重组酿酒酵母S.cerevisiae EBY100/pYD1-VP28的表达进行检测。以白肢虾(Penaeus vannamei)作为动物模型,通过白斑综合征病毒攻击实验,检测重组酿酒酵母S.cerevisiae EBY100/pYD1-VP28的保护效率。结果:口服重组酿酒酵母EBY100/pYD1-VP28后的对虾存活率为60%。结论:重组酿酒酵母S.cerevisiae EBY100/pYD1-VP28可以应用于对虾养殖业预防白斑综合征病毒的感染,潜藏着巨大的市场应用前景。

有机溶剂二次沉淀法提取纯化酵母菌超氧化物歧化酶的研究

酿酒酵母BUV094经发酵培养后,离心收集菌体,将菌体用甲苯法破壁得到粗酶液,粗酶液经调节PH除杂蛋白,丙酮二次沉淀三步纯化工艺,得到纯化的SOD,其比活为1015U/mg,收率为65.2%。PAGE电泳后的活性染色显示,酵母超氧化物歧化酶具四条同功酶。该样品经K C N,H2O2,氯仿—乙醇抑制试验,酶类型为Cu/ZnSOD。

Saccharomyces cerevisiae谷氨酸脱羧酶的诱导纯化及其活性的研究

为了了解酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae,S.cerevisiae)谷氨酸脱羧酶(GAD)的情况,分别用酵母提取物及胰蛋白胨(3×YP)+6%棉子糖液体培养基、3×YP+6%半乳糖液体培养基进行诱导培养,粉碎破碎酵母,采用ProfiniaTM蛋白质纯化系统纯化,并用SDS-PAGE凝胶电泳测定分子质量,同时研究了磷酸吡哆醛(PLP)对酿酒酵母谷氨酸脱羧酶(S.cerevisiae GAD)活性的影响。结果表明:转基因酿酒酵母在28℃振动培养47 h,3×YP+6%棉子糖培养基OD600值为7.4,3×YP+6%半乳糖培养基OD600值为6.8。棉子糖诱导的酿酒酵母没有表达目的基因,没有纯化到GAD;相反,半乳糖诱导的酿酒酵母表达了目的基因,纯化到了GAD,其分子质量为67 ku。PLP对GAD的活化作用较显著。

重组酿酒酵母表达幽门螺杆菌VacA蛋白及其免疫原性分析

目的:利用酿酒酵母表面展示技术筛选幽门螺杆菌候选疫苗,并分析其免疫原性。方法:以幽门螺杆菌的空泡型细胞毒素A(vac A)基因作为研究对象,构建重组S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA,通过Western blot、免疫荧光标记和流式细胞仪对S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA进行体外表达分析。以PBS和S.cerevisiae EBY100/pYD1为对照组,S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA为实验组,口服免疫SPF级BALB/c小鼠。通过ELISA分析检测口服免疫后小鼠抗VacA特异性IgG及分泌型IgA效价。结果:VacA抗原蛋白被成功地展示在S.cerevisiae EBY100表面。小鼠经口服免疫S.cerevisiae EBY100/p YD1-VacA后可诱导产生较高的VacA特异性抗体。结论:表面展示型酿酒酵母可以作为幽门螺杆菌候选疫苗的递送载体,与此同时,这也为开发其他细菌或病毒疫苗提供新思路。