机械活化酿酒酵母葡聚糖改善其水溶性

酿酒酵母葡聚糖是一种良好的免疫效应应答剂,但是不溶于水,这严重影响了它在食品、医药等行业中的应用。对酿酒酵母葡聚糖进行机械改性,显著提高了它的溶解性。随着机械强度和活化时间的增加,葡聚糖的溶解率从11%提高到37%。活化之后的葡聚糖的粒径明显变小,比表面积增大;微观形态结构规整性降低,表面呈现粗糙状。红外光谱分析证实,活化之后葡聚糖的主体化学结构没有改变,但羟基吸收峰位置向低频方向发生较大偏移,氢键键能降低,氢键相互作用减弱。这些变化有利于葡聚糖分子与水分子相互作用,提高酵母葡聚糖的溶解性。由此制备的水溶性葡聚糖具有良好的免疫活性,可以显著刺激巨噬细胞产生TNF-α、IL-6、NO,它们的分泌量分别是阴性对照组的29.3、28.3、5.6倍。因此机械活化是一种提高酿酒酵母葡聚糖溶解性的高效、简便、环保方法。

绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ基因的克隆与表达

采用RTPCR方法克隆到绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ(EGⅠ)的cDNA序列,测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上,转化酿酒酵母,转化子用2%的βD半乳糖进行诱导,用Northern杂交、刚果红染色法和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测.结果表明,EGⅠ的cDNA基因开放阅读框长度为1377bp,编码459个氨基酸,推测蛋白质分子量为48.1kD.刚果红染色显示,转化子可产生明显的水解圈;CMC酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EGⅠ并分泌到胞外.发酵液中的酶活在培养60h达到最高0.06UmL,最适酶解温度为50℃,最适pH值为5.4.

藤黄节杆菌β-1,3-葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的克隆及表达

以藤黄节杆菌基因组为模板,克隆获得β-1,3-葡聚糖酶基因,分别构建至原核表达载体pET-28a(+)与pBAD18上,诱导获得高效表达,粗酶液对酵母多糖的裂解活性达到161 U/mL。在裂解酵母试验中,粗酶液也表现出较高的活性。研究中得到一株突变株,其对于研究β-1,3-葡聚糖酶在裂解酵母中多糖结合域的地位和作用有着重要的价值。