布鲁氏菌omp25基因真核表达载体的构建与分析

构建表达流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25的酿酒酵母表达菌并进行验证。对流产布鲁氏菌疫苗株S19外膜蛋白基因omp25设计特异引物进行PCR扩增,连接到pGM-T载体上,获得pGM-T-omp25,进行PCR扩增、酶切、测序鉴定。将质粒pGM-T-omp25与pGBKT7载体进行EcoRⅠ/SalⅠ双酶切,回收DNA片段,并进行连接,构建pGBKT7-omp25后,转化酿酒酵母菌Y187,并进行PCR鉴定、自激活实验和毒性检测。克隆了流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25,PCR、酶切、测序表明成功构建了pGBKT7-omp25真核表达载体,获得的转化子酵母Y187菌株无自激活活性,无毒性。成功构建了表达流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25的酿酒酵母表达菌,为揭示流产布鲁氏菌感染与母畜流产间的分子机制奠定基础。

牛种布鲁菌virB4基因酵母表达载体的构建

根据GenBank中的牛种布鲁菌RB51株virB4基因保守序列设计引物，扩增virB4基因，将其克隆到pMD18-T载体上，鉴定正确后与酵母表达载体pGBKT7进行连接，转化酿酒酵母菌Y187后进行PCR、酶切鉴定，阳性克隆测序分析后转化酿酒酵母菌Y187感受态细胞进行自激活和毒性检测。结果表明：克隆的基因包含了virB4完整编码区的2496bp核苷酸序列，成功地构建了包含pGBKT7-virB4诱饵质粒的酿酒酵母菌Y187表达菌。