分级醇沉裙带菜褐藻糖胶及其体外降血糖活性研究

为研究裙带菜褐藻糖胶分级醇沉组分及其体外降血糖活性,本文以裙带菜为原料,通过CaCl2溶液浸提裙带菜褐藻糖胶后逐级沉淀得到四组多糖样品(UPP-45、UPP-55、UPP-65和UPP-75),分别测定其分子量、总糖含量、糖醛酸含量、蛋白质含量、硫酸根含量及单糖组成,通过紫外光谱扫描、红外光谱以及扫描电镜进行分析,并测定多糖组分对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率来探究其体外降血糖活性。结果表明,醇沉浓度越大,小分子量多糖占比越大。UPP-65的总糖含量最高为84.38%,UPP-45的粗糖蛋白和硫酸根含量与其他组分存在显著性差异(P<0.05);四种多糖组分均为酸性多糖。单糖组成分析可知多糖组分的单糖组成和摩尔百分比存在差异。紫外扫描分析可知多糖组分核酸含量有所不同。红外光谱分析可知四种组分的官能团和糖苷键有不同程度的吸收峰。电镜扫描结果可知,多糖组分微观形态各有不同。多糖组分对α-淀粉酶的抑制无剂量依赖关系,UPP-65的抑制率最高,IC50值为0.008 mg/mL;对α-葡萄糖苷酶的抑制呈量-效关系,UPP-65的IC50值最低,为2.346 mg/mL。综上所述,裙带菜分级醇沉的多糖制备工艺切实可行,四种多糖组分均有一定的体外降血糖活性,且UPP-65效果更好。

烟酰胺单核苷酸醇沉干燥工艺研究及微观结构观察

利用烟酰胺单核苷酸微溶于醇类的性质,对醇沉分离纯化烟酰胺单核苷酸的工艺操作条件进行优化,结合真空干燥的方式获得符合标准的烟酰胺单核苷酸。以烟酰胺单核苷酸含量、纯度、收率和水分为指标,考查醇沉温度、醇沉时间等因素,确定烟酰胺单核苷酸的最佳醇沉工艺和干燥工艺,得到烟酰胺单核苷酸的最佳醇沉工艺为取15 g/L的烟酰胺单核苷酸溶液,加入乙醇,使乙醇体积分数达到70%,4℃搅拌1 h,离心得到烟酰胺单核苷酸湿固体,在-0.08 MPa和50℃条件下干燥所得产物的收率最高且水分和纯度达标。利用扫描电镜观察微观结构,分析该工艺制备烟酰胺单核苷酸的可靠性。该优选工艺稳定可靠,可用于烟酰胺单核苷酸的分离纯化。

一种提高醇沉沉渣排放速度的方法

在中药制剂生产过程中,水提醇沉法是常用于中药水提液的一种纯化精制方法。该方法存在着醇沉后沉渣排放速度较慢,影响生产效率的问题。对此,本文将从沉渣的性质及醇沉罐的结构,分析影响沉渣排放速度的原因,提供一种在不改造醇沉罐及管道的基础上,通过优化清洗方法来提高醇沉沉渣的排放速度的解决方案。

烟草水提液醇沉技术制备烟草浸膏的研究

通过在烟草水提液中加入乙醇,选择性地去除烟草水提液中对再造烟叶感官品质产生不利影响的物质,提高烟草水提液中有效成分相对含量,实现从烟草水提液制备烟草浸膏。考查了乙醇终体积分数和烟草水提液初始密度这2个重要因素对烟草水提液醇沉效果的影响。结果表明,①烟草水提液醇沉过程中大分子物质(蛋白质、果胶和淀粉)去除率达到90%以上,烟碱和总糖保留率为70%以上,中性致香成分保留率达90%以上;②制备的浸膏中中性致香含量相对于烟草水提液为4~6倍。研究可为造纸法再造烟叶生产过程中过剩烟草水提液制备烟草浸膏提供参考依据。

大枣叶水提醇沉物的抗氧化活性研究

目的:对大枣叶水提醇沉物的抗氧化活性进行研究,筛选抗氧化活性良好的醇沉方式和醇沉浓度。方法:分别用不同浓度的乙醇直接醇沉、分级醇沉得到大枣叶醇沉物,以ABTS自由基清除率、DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率、还原力为考察指标,筛选抗氧化活性高的醇沉工艺。结果:大枣叶分级醇沉物总体上抗氧化活性强于直接醇沉,大枣叶水提物直接醇沉使含醇量达80%的醇沉物抗氧化活性较佳,分级醇沉物在4种不同抗氧化考察方法下呈现不同规律。结论:优选的醇沉方式和醇沉浓度,可为大枣叶健康产品的开发提供依据。

基于分步醇沉法研究酒制黄精多糖理化性质及免疫活性

目的对酒制黄精水溶性多糖(Polysaccharides from wine-processed Polygonatum sibiricum.,PSPW)进行分步醇沉,对各醇沉组分理化性质及免疫活性进行研究。方法采用分步醇沉法对PSPW进行分离、纯化;采用气相色谱(GC)、高效凝胶渗透色谱(HPGPC)及傅里叶变换红外光谱(FT-IR)等方法对各醇沉组分的理化性质进行研究;采用MTT法、中性红吞噬实验及Griess法评价各醇沉组分对RAW 264.7细胞免疫活性的影响。结果随分步醇沉中所用乙醇浓度增加,依次获得0~30%、30%~50%、50%~70%及70%~80%多糖组分,分别命名为PSPW-1、PSPW-2、PSPW-3及PSPW-4;理化性质结果表明4个醇沉组分(分子量分别为2.26×10^(4)、2.24×10^(4)、1.15×10^(4)及6.58×10^(3)u)均为糖蛋白复合物;各醇沉组分单糖组成种类和比例存在显著差异,均含高比例的半乳糖;免疫活性研究表明各组分均可促进RAW264.7细胞活力、吞噬中性红能力、分泌NO能力及分泌酸性磷酸酶活力,其中组分PSPW-3免疫活性最强。结论分步醇沉法所得PSPW各醇沉组分理化性质和免疫活性存在较大差异,推测PSPW-3为酒制黄精多糖发挥免疫调节作用的最佳活性组分,本研究为酒制黄精多糖最佳免疫调节活性组分的构效关系及黄精多糖功能性食品开发提供依据。

雪松松针多糖的醇沉、脱蛋白工艺及抗氧化活性研究

对雪松松针多糖的醇沉、脱蛋白工艺及其体外抗氧化活性进行研究。在单因素试验基础上,利用Box-Behnken模型对提取液浓缩比、乙醇体积分数和醇沉时间进行优化,比较多糖得率确定最佳雪松松针多糖醇沉工艺条件。以蛋白质清除率和多糖损失率为指标,比较了Sevage法和三氯醋酸(TCA)法的脱蛋白效果,并对试剂用量、脱蛋白次数进行了考察,然后利用DPPH和ABTS自由基法对纯化后多糖的抗氧化活性进行评价。研究结果表明:优化的雪松松针多糖一级醇沉条件为粗提液体积和松针干质量的比例(浓缩比)为3∶1(mL∶g,下同),乙醇体积分数为71%,醇沉温度为40℃,醇沉时间为10 h,在此条件下,雪松松针多糖得率为3.81%,结果与预测值接近。收集多糖后的上清液再按浓缩比1∶1浓缩,筛选得到二级醇沉的乙醇体积分数为80%。Sevage法脱蛋白效率优于TCA法,其最佳条件为Sevage试剂与多糖溶液的体积比为1∶1,脱除蛋白次数为3次,经UV法测得脱蛋白后的一级、二级醇沉多糖(以葡萄糖折算)质量分数分别为35.36%和36.62%。清除DPPH与ABTS自由基能力依次为Vc>二级醇沉多糖>BHT>一级醇沉多糖,纯化后的雪松松针80%醇沉多糖表现出良好的抗氧化活性。

不同梯度醇沉对红芪多糖提取含量的影响及其抗氧化活性和红外谱图的分析

目的研究不同梯度醇沉对红芪多糖提取含量的影响,及其抗氧化活性和红外谱图的分析。方法采用水提分级醇沉(20%、40%、60%、80%乙醇浓度)法提取红芪多糖,采用苯酚-浓硫酸法测定红芪多糖的含量,并利用方法学考察该含量测定方法。测定不同梯度醇沉所得红芪多糖对金属Cu2+螯合能力、DPPH自由基清除率及羟基自由基清除率。通过近红外光谱分析确定抗氧化活性最强多糖组分的特定官能团结构。结果当醇沉浓度为80%时,红芪多糖提取率为84.80%,含量为61.62%,抗氧化活性最强,红外光谱分析显示抗氧化活性最强的多糖组分中含有羟基(-OH),次甲基(C-H),羰基(C=O),碳氧单键(C-O-C或C-O)等多个还原性基团。结论红芪多糖的提取率和含量随着醇沉浓度增加明显增加,红芪多糖具有良好体外抗氧化活性,其抗氧化活性与富含羟基和次甲基等还原性官能团有关。

不同醇沉米糠多糖的体外抗氧化和降血糖活性研究

为分离纯化米糠粗多糖(RBP),提高其纯度及生物活性,对RBP进行分级醇沉,得到RBP-40、RBP-60、RBP-80、RBP-80S四组醇沉RBP,并将其与RBP对比进行理化性质、抗氧化活性、降血糖活性分析。结果表明:RBP-80S的总糖、可溶性蛋白质、糖醛酸含量均显著高于其他各组多糖(P<0.05);5组多糖的抗氧化活性和降血糖活性均随多糖纯度的提高而增强,RBP-80S对1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O_(2)^(-)·)的清除率,总抗氧化活性和Fe^(2+)还原力均最高;RBP-80S对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率最高可达90.69%和74.56%,且显著优于其他4组多糖(P<0.05)。以上结果说明,分级醇沉可提高RBP的纯度,从而提高其体外抗氧化和降血糖活性,为提高米糠粗多糖价值提供了新途径。

补骨脂炮制品水提和醇沉物化学成分及肝毒性研究

目的研究补骨脂不同炮制品水提及醇沉物中5种化学成分的含量变化情况,并初步评价其肝毒性。方法制备补骨脂生品和雷公法、流水漂洗法、盐炙法炮制品的水提样品,以及雷公法、盐炙法炮制品的醇沉样品,采用高效液相色谱法测定其中补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的含量并进行比较;以不同质量浓度补骨脂生品、流水漂洗法、雷公法、盐炙法水提样品和雷公法、盐炙法醇沉样品作用72 h,计算各样品对野生型斑马鱼的半数致死浓度(LC50)和最大非致死浓度(MNLC);以对乙酰氨基酚为阳性对照,以上述样品(MNLC)作用72 h,观察野生型斑马鱼的基本形态和转基因斑马鱼的肝脏表型。采用Pearson相关性分析评价成分含量与肝毒性的相关性。结果与生品水提物比较,不同炮制品水提样品中补骨脂苷、异补骨脂苷的含量均显著降低(P<0.05),而雷公法、盐炙法醇沉样品中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的含量均显著升高(P<0.05)。生品、流水漂洗法、雷公法、盐炙法水提样品和雷公法、盐炙法醇沉样品的LC50分别为2.45、5.00、5.38、1.55、2.36、0.64 g/L(以生药量计),MNLC分别为2.21、4.53、5.02、1.37、2.13、0.53 g/L(以生药量计);与空白对照组比较,各样品处理组斑马鱼幼鱼均表现出不同程度的畸形,肝脏相对荧光强度均显著减弱(P<0.05或P<0.01)。补骨脂酚、异补骨脂素、补骨脂素等脂溶性成分与肝脏相对荧光强度的相关性较高(R2>0.7)。结论补骨脂炮制品经水提后以补骨脂苷、异补骨脂苷为主,经醇沉后补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚的含量增加;醇沉样品的肝毒性更强,且肝毒性与补骨脂脂溶性成分的含量呈正相关。

梯度醇沉兰州百合多糖结构及降血糖活性分析

对兰州百合采用热水提取和不同体积分数乙醇(30%、50%、70%、80%)醇沉得到4种多糖,分别记为BLP-30、BLP-50、BLP-70和BLP-80。对上述4种多糖性能进行了测试,比较了多糖对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制能力,分析了多糖基本组成与降血糖活性的相关性。结果表明,4种多糖均不含或含有极少量糖醛酸和蛋白,BLP-80可溶性总糖质量分数最高,为30.96%。4种多糖为混合多糖,均由甘露糖、葡萄糖和少量半乳糖组成,重均相对分子质量从BLP-30-1的625k Da逐渐减至BLP-70-4的2.45kDa。其中,BLP-30和BLP-50为葡聚糖,BLP-70为半乳甘露葡聚糖,BLP-80为甘露葡聚糖,BLP-30中甘露糖、葡萄糖、半乳糖摩尔分数分别为10.18%、88.67%、1.15%;BLP-50中上述3种多糖摩尔分数分别为2.49%、97.02%、0.49%;BLP-70中上述3种多糖摩尔分数分别为26.94%、68.21%、4.85%;BLP-80中甘露糖和葡萄糖摩尔分数分别为41.56%和58.44%。4种多糖对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制能力强弱顺序分别为BLP-70>BLP-80>BLP-30>BLP-50和BLP-50>BLP-70>BLP-80>BLP-30。4种多糖对α-淀粉酶的抑制能力与甘露糖和半乳糖的摩尔分数呈正相关,对α-淀粉酶的抑制能力与葡萄糖的摩尔分数呈负相关;对α-葡萄糖苷酶的抑制能力与可溶性总糖质量分数、糖醛酸质量分数、甘露糖摩尔分数呈负相关;对α-葡萄糖苷酶的抑制能力与葡萄糖摩尔分数呈正相关。

多指标综合评分法优化养阴生肌肠溶胶囊水提醇沉工艺

优化养阴生肌肠溶胶囊水提醇沉工艺。采用星点设计-效应面法,以浸泡时间、提取时间、加水量、提取次数为考察因素,以龙胆苦苷、芍药苷、甘草苷、盐酸小檗碱、6-姜酚、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的含量及干膏得率为评价指标,利用熵权法进行多指标综合评分,优化水提工艺;采用L9(34)正交试验法,以浓缩比、醇沉浓度、静置时间为考察因素,以龙胆苦苷、芍药苷、甘草苷、盐酸小檗碱、6-姜酚、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的含量及干膏得率为评价指标,利用熵权法进行多指标综合评分,优化醇沉工艺。结果表明,优化的水提工艺为加12倍量水,浸泡45min,提取2次,每次90min;优化的醇沉工艺为浓缩比1∶2,醇沉浓度50%,静置30h。本研究优选的水提醇沉工艺稳定性好、重复性高,可为养阴生肌肠溶胶囊后续的成型工艺研究提供参考。

复方黄芪方醇沉工艺优化

目的优化复方黄芪方醇沉工艺。方法基于质量源于设计(QbD)理念,以黄芪甲苷、京尼平苷酸、总黄酮保留率及总固体去除率为关键质量属性,采用鱼刺图结合失效模式与效应分析(FMEA)及Plackett-Burman设计筛选出醇沉过程的关键工艺参数为浓缩液相对密度、静置时间、醇沉体积分数,再通过Box-Behnken设计建立关键工艺参数与关键质量属性之间的数学模型及设计空间并验证。结果最优操作空间为浓缩液相对密度1.000~1.025 g/mL,静置时间21~24 h,醇沉体积分数50%,黄芪甲苷、京尼平苷酸、总黄酮保留率及总固体去除率分别为83.99%、91.46%、81.17%、35.82%,综合评分为73.11%。结论本实验将设计空间应用于复方黄芪方醇沉工艺中,可为其他中药复方醇沉除杂过程的质量控制提供参考。

硬毛粗盖孔菌多糖分级醇沉及抗氧化活性研究

通过对硬毛粗盖孔菌进行液体发酵培养获得菌丝,以冻干菌丝为原料,采用超声辅助热水法提取多糖。用不同终浓度的乙醇溶液(40%、60%和80%)进行沉淀,分别得到(FCP-40、FCP-60和FCP-80)3个组分。同时,运用不同方法对其化学组成、结构特征和抗氧化活性进行了探究。结果表明,3个组分的多糖均含有核酸和蛋白质,其中FCP-40的总糖含量最高,FCP-80的蛋白质含量最高。不同醇沉组分多糖均含有较长侧链和较多分支且都是三螺旋多糖。3种多糖均具有剂量依赖性的抗氧化活性,且羟基(·OH)清除能力相较DPPH自由基清除能力而言效果更显著。

分级醇沉竹荪多糖的结构及抗氧化活性比较

通过缓冻协同微波法提取竹荪多糖,以20%~80%乙醇分级制备得到4种多糖组分,分别为PI-20、PI-40、PI-60和PI-80;采用UV、FI-IR、HPSEC-MALLS-RI、HPAEC对多糖结构进行分析.结果表明4种组分均含有少量蛋白质,但未检测到糖醛酸存在,PI-20和PI-40多糖含量均在50%以上;低浓度乙醇醇沉的多糖PI-20和PI-40的相对分子质量达到千万级,而高体积分数乙醇醇沉的多糖相对分子质量在万级水平;20%~60%醇沉多糖均由Gal、Glu和Man构成,PI-80仅由Glu和Man组成.4种醇沉多糖组分均具有一定的抗氧化能力,在3种抗氧化试验中,4种醇沉组分PI-80综合抗氧化能力最佳,清除ABTS自由基半抑制质量浓度为0.2484 mg/mL,PI-40综合抗氧化活性最弱,清除ABTS自由基半抑制质量浓度为2.9043 mg/mL.

醇沉法和膜分离法制备灵芝孢子多糖免疫调节活性比较

采用醇沉法和膜分离法制备灵芝(Ganoderma lucidum)孢子多糖,测定其得率、多糖含量、单糖组成,并通过迟发型变态反应、脾细胞抗体生成、碳廓清、NK细胞活性实验,考察灵芝孢子多糖的免疫调节活性。结果表明:膜分离法制备的灵芝孢子多糖得率高于醇沉法,为(4.61±0.28)%;两者多糖含量无显著差异。醇沉法、膜分离法制备的灵芝孢子多糖单糖组成均为鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和山梨糖,其摩尔比分别为0.34∶0.31∶1.44∶4.48∶3.35∶0.31和0.27∶0.10∶1.70∶6.08∶1.84∶0.31,均以葡萄糖为主要组成单糖。两种灵芝孢子多糖均能增强小鼠免疫调节活性。研究结果可为灵芝孢子多糖产业化提供参考。

响应面法优化双黄连口服液醇沉物乳酸菌发酵工艺

为研究双黄连口服液制剂醇沉物的乳酸菌液态发酵工艺,首先确定双黄连口服液制剂醇沉物添加量,再以活菌数作为指标,通过单因素试验分别研究接种量、发酵时间和发酵温度的影响,并采用响应面法优选最佳发酵条件,最后进行平行放大试验验证。结果:含20%的醇沉物、接种量4%、发酵温度32.7℃、发酵时间26 h时活菌数可达3.03×10^(9)CFU/mL,为最佳发酵条件。平行放大验证试验表明,该发酵工艺可用于制备双黄连口服液醇沉物乳酸菌液态发酵制剂。

正交试验法优化赤芍-牡丹皮药对水提醇沉工艺

目的优选赤芍-牡丹皮药对(11)水提醇沉工艺。方法采用L9(34)正交试验法,以料液比、提取时间、提取次数为考察因素,以芍药苷、丹皮酚的含量及干膏得率为考察指标,采用Hassan法进行多指标综合评分,优选水提工艺;以药液密度、乙醇体积分数、静置时间为考察因素,以芍药苷、丹皮酚的转移率及干膏得率为考察指标,结合大生产实际情况优选醇沉工艺。结果最优水提工艺为加10倍量水,煎煮提取1次,每次60 min;最佳醇沉工艺为药液密度1.20 g·mL^(-1)(30℃),加入95%乙醇使含醇量达60%,静置60 h。结论优选的水提醇沉工艺稳定可靠、重复性好,可为赤芍-牡丹皮药对(1∶1)的后续研究提供参考。

响应面法提取优化破壁灵芝孢子粉多糖及其分级醇沉组分的抗氧化活性研究

目的:对破壁灵芝孢子粉多糖(BGP)的最佳提取工艺、各分级醇沉多糖组分的抗氧化性进行探究。方法:以破壁灵芝孢子粉为原料,采用内部沸腾法探究提取温度、提取时间、料液比对BGP得率的影响;利用响应面法分析优化BGP的提取参数。用不同浓度的乙醇醇沉多糖,通过测定其DPPH自由基以及羟自由基的清除力,测定其抗氧化性。结果:根据回归模型分析预测结果,最佳提取工艺参数为提取温度83℃、提取时间7 min、料液比1:21。在此条件下BGP的得率为9.10%。以不同浓度的乙醇分级醇沉BGP,得到5种醇沉BGP组分。乙醇浓度为90%时,所得BGP的得率最高。抗氧化实验表明各醇沉BGP都具有一定的抗氧化活性。90%-BGP的抗氧化性稍强于其他醇沉多糖,并且随着多糖浓度的增加,各醇沉多糖的抗氧化性均有一定的增加的趋势。结论:利用最佳提取参数提取,不同乙醇浓度醇沉的BGP均具有一定的抗氧化活性。

醇沉条件对猴头菌多糖得率和品质的影响

以粗多糖得率和含量为评价指标,对水提醇沉制备猴头菌多糖(Hericium erinaceuspolysaccharides,HEP)工艺中主要醇沉条件进行了筛选,得出猴头菌多糖醇沉的最佳工艺条件:提取液的浓缩比(粗提液体积∶子实体干重,mL∶g)为3∶1,醇沉浓度70%,加入乙醇时浓缩液温度为40℃,醇沉时间和静置温度分别为8 h和4℃。不同醇沉浓度得到的多糖分子量分布及体外免疫活性测定结果表明,醇沉浓度为40%时,得到的多糖大分子部分占的比例较高,活性较好。醇沉浓度越高,多糖含有的小分子物质越多。