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1-磷酸甘露醇脱氢酶基因转化水稻的研究 被引量:16
1
作者 王慧中 刘俊君 +6 位作者 卢德赵 赵艳 颜美仙 钱前 彭学贤 陈受宜 黄大年 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期6-10,共5页
PCR和 Southern blotting检测表明 ,来自大肠杆菌的 mtl D基因已通过农杆菌介导整合进水稻基因组。mtl D基因在 T1代出现分离 ,T2 代出现纯系。在 0 .75% Na Cl胁迫下 ,7个转基因 T3 代株系都能检测到 mtl D酶活性 ,与对照相比细胞膜的... PCR和 Southern blotting检测表明 ,来自大肠杆菌的 mtl D基因已通过农杆菌介导整合进水稻基因组。mtl D基因在 T1代出现分离 ,T2 代出现纯系。在 0 .75% Na Cl胁迫下 ,7个转基因 T3 代株系都能检测到 mtl D酶活性 ,与对照相比细胞膜的相对电导率和大分子渗漏值明显降低。部分转基因株系能在 1 .0 % Na Cl浓度下正常生长 ,而对照在 0 .5% Na Cl浓度下已不能存活。通过有性杂交途径实现了 mtl D和 gut D两个基因的聚合 ,部分杂交后代株系能在 1 .2 5% Na Cl胁迫下正常生长结实。 展开更多
关键词 水稻 1-磷酸甘露醇脱氢酶基因 6-磷酸山梨醇脱氢酶基因 基因植株 耐盐性 产量性性 有性杂交 农艺性状
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茶树醇脱氢酶基因的表达特征及番茄遗传转化分析 被引量:6
2
作者 辛肇军 孙晓玲 陈宗懋 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期864-871,共8页
根据茶树醇脱氢酶基因(CsiADH1)的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR方法从茶树品种‘龙井43’中克隆了CsiADH1序列,分析了CsiADH1在生物和非生物胁迫下的诱导表达情况并转化番茄。结果表明:CsiADH1包含一个1 044bp的最大开放阅读框,编码347... 根据茶树醇脱氢酶基因(CsiADH1)的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR方法从茶树品种‘龙井43’中克隆了CsiADH1序列,分析了CsiADH1在生物和非生物胁迫下的诱导表达情况并转化番茄。结果表明:CsiADH1包含一个1 044bp的最大开放阅读框,编码347个氨基酸。qRT-PCR分析显示,CsiADH1的表达受到茶尺蠖取食、机械损伤、茉莉酸和水杨酸的诱导;将CsiADH1基因ORF区域克隆进pCAMBIA1301载体中,构建了由CaMV35S启动子驱动的CsiADH1基因植物表达载体pCAMBIA-ADH,并以农杆菌介导的方法侵染番茄‘中蔬四号’子叶,经PCR鉴定,获得了8个转CsiADH1基因阳性植株。该结果为进一步揭示CsiADH1基因在植物诱导防御反应中的分子机理研究奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树 醇脱氢酶基因 克隆 表达 番茄转化
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人Ⅰ型醇脱氢酶基因的克隆及其等位基因鉴定 被引量:1
3
作者 曾凡才 陈勤 +2 位作者 李爱玲 何涛 李洪 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第15期2822-2825,共4页
[目的]克隆人Ⅰ型醇脱氢酶基因,并对所克隆序列进行鉴定。[方法]用RT-PCR法获得Ⅰ型醇脱氢酶基因的cDNA,然后用双酶切得到目的基因并定向克隆到pUC19载体上。经蓝白筛选后,用限制性酶谱和DNA测序以及BLAST比对分析,并结合Internet数据... [目的]克隆人Ⅰ型醇脱氢酶基因,并对所克隆序列进行鉴定。[方法]用RT-PCR法获得Ⅰ型醇脱氢酶基因的cDNA,然后用双酶切得到目的基因并定向克隆到pUC19载体上。经蓝白筛选后,用限制性酶谱和DNA测序以及BLAST比对分析,并结合Internet数据库和相关文献对基因进行鉴定。[结果]证实从一位病人癌旁正常肝组织中克隆的序列有人Ⅰ型醇脱氢酶基因的ADH1B*2、ADH1C*2和ADH1C*2,3个等位基因。[结论]用一对引物成功克隆了人Ⅰ型醇脱氢酶基因的3个等位基因,为进一步研究和利用Ⅰ型醇脱氢酶奠定了基础。 展开更多
关键词 Ⅰ型醇脱氢酶基因 基因克隆 等位基因鉴定
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山梨醇脱氢酶基因多态性与2型糖尿病视网膜病变相关性的研究
4
作者 郭海科 刘清洋 +2 位作者 孟倩丽 张良 方梦圆 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期418-421,共4页
背景国外研究表明,多元醇通路在2型糖尿病血管并发症中具有重要的作用,山梨醇脱氢酶(SDH)基因作为该通路的限速酶之一参与糖尿病视网膜病变(DR)的发生,但国内尚未见相关的研究。目的探讨SDHG-888C基因多态性同2型DR的关系。方法... 背景国外研究表明,多元醇通路在2型糖尿病血管并发症中具有重要的作用,山梨醇脱氢酶(SDH)基因作为该通路的限速酶之一参与糖尿病视网膜病变(DR)的发生,但国内尚未见相关的研究。目的探讨SDHG-888C基因多态性同2型DR的关系。方法运用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性技术检测187例2型糖尿病患者的基因型,其中DR患者118例,无明显DR组69例、健康对照组123例,比较各组的基因型和等位基因的频率。结果DR组与无DR组间的临床特征比较显示,DR组糖尿病病程明显长于无DR组,差异有统计学意义(t=2.070,P=0.042),2组间其他基线特征的差异无统计学意义(P〉0.05)。DR组、无DR组和对照组GG基因型频率分别为24.6%、8.7%和8.1%,G等位基因频率分别为42.4%、25.4%和29.7%,DR组GG基因型和G等位基因频率显著高于无DR组和对照组,差异均有统计学意义(GG:P=0.007,P=0.001;G:P=0.001,P=0.004),无DR组与对照组的各基因型和等位基因频率比较差异均无统计学意义(P〉0.05);增生型DR与无DR组间各基因型和等位基因频率比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论SDHG-888C基因多态性可能与中国南方人群2型DR的发生具有一定的相关性。 展开更多
关键词 山梨醇脱氢酶基因 基因多态性 2型糖尿病 视网膜病变
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弱氧化醋杆菌阿拉伯糖醇脱氢酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达
5
作者 何秀萍 怀文辉 +1 位作者 郭文洁 张博润 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期248-251,共4页
The partial genomic library of Acetobacter suboxydans was constructed using Yeast\| E.coli shuttle plasmid YEp352 as vector.Two positive transformants,designated as DH5α(pAD91) and DH5α(pAD98),were obtained by scree... The partial genomic library of Acetobacter suboxydans was constructed using Yeast\| E.coli shuttle plasmid YEp352 as vector.Two positive transformants,designated as DH5α(pAD91) and DH5α(pAD98),were obtained by screening the growth of transformants on the agar plate in which D\|arabitol was used as the sole carbon source.The results of Southern blot and restriction endonuclease analysis showed that the two recombinants are identical.The insert is about 2.3kb.Arabitol dehydrogenase activity assay indicated that the transformants could produce D\|xylulose\|forming D\|arabitol dehydrogenase.Hence,the gene encoding D\|arabitol dehydrogenase exists in the cloned DNA fragment. 展开更多
关键词 弱氧化醋酐菌 阿拉伯糖醇脱氢酶基因 克隆 表达
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水芹肉桂醇脱氢酶基因的克隆与表达特性分析 被引量:4
6
作者 仇亮 朱胜琪 +3 位作者 王永鑫 冯凯 刘洁霞 熊爱生 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1003-1009,共7页
以‘八卦洲水芹’及其紫色叶柄突变型水芹‘南选八卦洲紫水芹’为实验材料,利用RT-PCR方法从‘南选八卦洲紫水芹’中克隆得到水芹肉桂醇脱氢酶(CAD)基因,命名为OjCAD。OjCAD基因开放阅读框长为1 074bp,编码357个氨基酸。OjCAD蛋白相对... 以‘八卦洲水芹’及其紫色叶柄突变型水芹‘南选八卦洲紫水芹’为实验材料,利用RT-PCR方法从‘南选八卦洲紫水芹’中克隆得到水芹肉桂醇脱氢酶(CAD)基因,命名为OjCAD。OjCAD基因开放阅读框长为1 074bp,编码357个氨基酸。OjCAD蛋白相对分子质量为39 143.10,理论等电点为6.91,属于MDR家族。系统进化分析显示,水芹OjCAD与同属伞形科的胡萝卜CAD进化关系最近,具有高度保守性。OjCAD编码的蛋白属于疏水蛋白,空间结构主要由7个α-螺旋和17个β-折叠组成。实时定量PCR分析显示,OjCAD基因在紫色和非紫色水芹的叶片和叶柄中相对表达量存在差异,水芹OjCAD基因在叶片中的表达量显著高于叶柄,在‘八卦洲水芹’中的表达量高于‘南选八卦洲紫水芹’。该研究结果为进一步分析水芹木质素生物合成奠定了基础。 展开更多
关键词 水芹 水芹肉桂醇脱氢酶基因(OjCAD) 克隆 表达分析
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6-磷酸山梨醇脱氢酶(gutD)基因克隆、测序和表达 被引量:2
7
作者 陈启伟 刘广发 邱凤英 《台湾海峡》 CAS CSCD 2004年第3期314-317,共4页
本研究根据6 磷酸山梨醇脱氢酶基因(gutD)两端序列设计引物,以假单胞杆菌(PseudonmonasXM)的总DNA为模板通过PCR的方法克隆gutD基因并进行序列分析.将克隆得到的gutD基因与原核表达载体pBV220连接并转化大肠杆菌(Es cherichiacoli)JM10... 本研究根据6 磷酸山梨醇脱氢酶基因(gutD)两端序列设计引物,以假单胞杆菌(PseudonmonasXM)的总DNA为模板通过PCR的方法克隆gutD基因并进行序列分析.将克隆得到的gutD基因与原核表达载体pBV220连接并转化大肠杆菌(Es cherichiacoli)JM101后检测其蛋白表达及菌株生长耐盐性. 展开更多
关键词 分子生物学 6-磷酸山梨醇脱氢酶基因 克隆 序列分析 蛋白表达
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中国人山梨醇脱氢酶基因相关腓骨肌萎缩症的基因型-表型分析 被引量:1
8
作者 林志强 李小波 +6 位作者 黄顺祥 赵华栋 刘蕾 曹婉芊 刘鑫 唐北沙 张如旭 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期882-887,共6页
目的报道中国人群中山梨醇脱氢酶(SORD)基因相关腓骨肌萎缩症(CMT)的基因型和表型特点。方法从2009—2018年在中南大学湘雅三医院收集的CMT患者中选择57个未明确基因诊断的、散发或常染色体隐性遗传(AR)的轴索型CMT(CMT2)家系。应用聚... 目的报道中国人群中山梨醇脱氢酶(SORD)基因相关腓骨肌萎缩症(CMT)的基因型和表型特点。方法从2009—2018年在中南大学湘雅三医院收集的CMT患者中选择57个未明确基因诊断的、散发或常染色体隐性遗传(AR)的轴索型CMT(CMT2)家系。应用聚合酶链反应(PCR)结合Sanger测序法进行SORD基因的突变检测,并总结SORD基因相关CMT患者的表型特点。结果在4例无家族史患者中检测到SORD基因纯合c.757delG(p.Ala253GlnfsTer27)突变,约占该组患者总数的7%。2例患者表现为慢性进行性双下肢肌无力和肌萎缩、运动和感觉神经轴索变性电生理改变的CMT2;另2例患者表现为慢性进行性双下肢肌无力和肌萎缩,仅运动神经轴索变性电生理改变的遗传性远端运动神经病(dHMN)。患者发病年龄为5~16岁,CMT神经病变评分为2~9分。结论首次在中国CMT患者中报道SORD基因纯合热点突变c.757delG(p.Ala253GlnfsTer27)及其对应的儿童/青少年期起病、神经功能轻度受损的CMT2和dHMN表型。SORD基因相关CMT可能是最常见的AR-CMT2基因亚型。 展开更多
关键词 山梨醇脱氢酶基因 常染色体隐性遗传 轴索型腓骨肌萎缩症 遗传性远端运动神经病
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大肠杆菌Top10甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因克隆及生物信息学分析
9
作者 麻鹏达 张晓英 +1 位作者 李海云 马瑞 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第5期981-986,共6页
根据细菌中存在的甘露醇-1-磷酸脱氢酶(mannitol-1-phosphate dehydrogenase,mtlD)的基因序列,采用PCR扩增的方法从大肠杆菌(Escherichia coli)Top10中克隆到了mtlD基因(Acession numeber:EU433565)。mtlD开放阅读框为1149bp,编码含有38... 根据细菌中存在的甘露醇-1-磷酸脱氢酶(mannitol-1-phosphate dehydrogenase,mtlD)的基因序列,采用PCR扩增的方法从大肠杆菌(Escherichia coli)Top10中克隆到了mtlD基因(Acession numeber:EU433565)。mtlD开放阅读框为1149bp,编码含有382个氨基酸残基,分子量为41.2kD的蛋白,预测等电点为5.37。mtlD含有38个碱性氨基酸,50个酸性氨基酸,158个疏水氨基酸及72个极性氨基酸。二级结构预测表明该蛋白含约60.47%的α-螺旋、4.71%的β-转角、10.73%的延伸链和20.48%的不规则卷曲。亲疏水性分析显示,mtlD是亲水性蛋白。亚细胞定位分析表明mtlD主要定位于细胞质中。序列分析表明大肠杆菌Top10mtlD基因与大肠杆菌W3350、大肠杆菌DEC12a和盐生盐杆菌(Halobacterium salinarum)的mtlD基因同源性分别为99%、97%和93%。大肠杆菌Top10mtlD基因的克隆及生物信息学分析为今后对mtlD的进一步深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌Top10 甘露-1-磷酸基因 基因克隆 生物信息学分析
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gutD基因的克隆及植物表达载体的构建
10
作者 王悦 燕丽萍 +2 位作者 夏阳 李阳春 洪春 《山东林业科技》 2007年第6期39-41,共3页
通过RT-PCR的方法从大肠杆菌K12中扩增出了gutD基因的全长cDNA片段,将其克隆到pMD18 T-vector中,序列分析表明克隆的片段长度为780bp,包含了完整的gutD基因的编码序列,除编码区第61位密码子由CTG变为CGT和第72位密码子CTT变为CCT其它序... 通过RT-PCR的方法从大肠杆菌K12中扩增出了gutD基因的全长cDNA片段,将其克隆到pMD18 T-vector中,序列分析表明克隆的片段长度为780bp,包含了完整的gutD基因的编码序列,除编码区第61位密码子由CTG变为CGT和第72位密码子CTT变为CCT其它序列与所报道的修正序列一致。以BamHⅠ和HindIII限制性内切酶从克隆载体上切取gutD基因,将其连接在相应酶切的中间载体KS上,再以KpnI和BamHI酶切重组子获得具粘性末端的目的片段(gutD)与植物表达载体pCAMBIA2300连接,重组质粒通过双酶切和PCR鉴定正确后,采用直接转化法将pCAMBIA2300-gutD质粒导入根癌农杆菌LBA4404,并用PCR方法进行了鉴定。 展开更多
关键词 6-磷酸山梨醇脱氢酶基因(gutD) 克隆 序列分析 PCR及切检测
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cDNA Cloning and Sequence Analysis of ADH Gene in Delia antiqua
11
作者 陈春露 陈斌 +1 位作者 司风玲 何正波 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第5期1007-1010,共4页
[Objective] This study aims to conduct cloning and sequence analysis of ADH gene in D. Antiqua. [Method] Full-length cDNA of ADH gene in D. antiqua was cloned by using RACE technology (GenBank access number: JQ66600... [Objective] This study aims to conduct cloning and sequence analysis of ADH gene in D. Antiqua. [Method] Full-length cDNA of ADH gene in D. antiqua was cloned by using RACE technology (GenBank access number: JQ666006). Analysis of the homology, characteristics and functional domains of ADH sequence and the phy- Iogenetic relationship to other dipteran ADH were conducted. [Result] The full length of ADH cDNA is 1 088 bp containing a 771 bp of ORF, encoding 256 amino acids, with a calculated relative molecular weight of 30.80 kDa and a theoretical isoelectric point of 8.22. The deduced amino acid sequence shares the highest homology with Glossina morsitans morsitans based on homological analysis and phylogenetic analysis. [Conclusion] This study provides basis for further research of ADH gene. 展开更多
关键词 Delia antiqua ADH Sequence analysis Phylogenetic relationship
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Polymorphisms of alcohol dehydrogenase 2 and aldehyde dehydrogenase 2 and colorectal cancer risk in Chinese males 被引量:3
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作者 Chang-Ming Gao Toshiro Takezaki +9 位作者 Jian-Zhong Wu Xiao-Mei Zhang Hai-Xia Cao Jian-Hua Ding Yan-Ting Liu Su-Ping Li Jia Cao Keitaro Matsuo Nobuyuki Hamajima Kazuo Tajima 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第32期5078-5083,共6页
AIM: To evaluate the relationship between drinking and polymorphisms of alcohol dehydrogenase 2 (ADH2) and/or aldehyde dehydrogenase 2 (ALDH2) for risk of colorectal cancer (CRC) in Chinese males. METHODS: A case-cont... AIM: To evaluate the relationship between drinking and polymorphisms of alcohol dehydrogenase 2 (ADH2) and/or aldehyde dehydrogenase 2 (ALDH2) for risk of colorectal cancer (CRC) in Chinese males. METHODS: A case-control study was conducted in 190 cases and 223 population-based controls. ADH2 Arg47His (G-A) and ALDH2 Glu487Lys (G-A)genotypes were identified by PCR and denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC). Information on smoking and drinking was collected and odds ratio (OR) was estimated. RESULTS: The ADH2 A/A and ALDH2 G/G genotypes showed moderately increased CRC risk. The age- and smoking-adjusted OR for ADH2 A/A relative to G/A and G/G was 1.60 (95% CI=1.08-2.36), and the adjusted OR for ALDH2 G/G relative to G/A and A/A was 1.79 (95% CI=1.19-2.69). Signif icant interactions between ADH2, ALDH2 and drinking were observed. As compared to the subjects with ADH2 G and ALDH2 A alleles, those with ADH2 A/A and ALDH2 G/G genotypes had a signif icantly increased OR (3.05, 95% CI= 1.67-5.57). The OR for CRC among drinkers with the ADH2 A/A genotype was increased to 3.44 (95% CI= 1.84-6.42) compared with non-drinkers with the ADH2 G allele. The OR for CRC among drinkers with the ALDH2 G/G genotype was also increased to 2.70 (95% CI= 1.57-4.66) compared with non-drinkers with the ALDH2 A allele. CONCLUSION: Polymorphisms of the ADH2 and ALDH2 genes are significantly associated with CRC risk. There are also signifi cant gene-gene and gene- environment interactions between drinking and ADH2 and ALDH2 polymorphisms regarding CRC risk in Chinese males. 展开更多
关键词 Alcohol dehydrogenase 2 Aldehydede hydrogenase 2 Gene polymorphisms Alcohol drinking Colorectal cancer
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Polymorphisms of alcohol dehydrogenase-2 and aldehyde dehydrogenase-2 and esophageal cancer risk in Southeast Chinese males 被引量:11
13
作者 Jian-Hua Ding Su-Ping Li +7 位作者 Hai-Xia Cao Jian-Zhong Wu Chang-Ming Gao Ping Su Yan-Ting Liu Jian-Nong Zhou Jun Chang Gen-Hong Yao 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2009年第19期2395-2400,共6页
AIM: To evaluate the impact of alcohol dehydrogenase-2 (ADH2) and aldehyde dehydrogenase-2 (ALDH2) polymorphisms on esophageal cancer susceptibility in Southeast Chinese males.METHODS: Two hundred and twenty-one... AIM: To evaluate the impact of alcohol dehydrogenase-2 (ADH2) and aldehyde dehydrogenase-2 (ALDH2) polymorphisms on esophageal cancer susceptibility in Southeast Chinese males.METHODS: Two hundred and twenty-one esophageal cancer patients and 292 healthy controls from Taixing city in Jiangsu Province were enrolled in this study. ADH2 and ALDH2 genotypes were examined by polymerase chain reaction and denaturing high-performance liquid chromatography. Unconditional logistic regression was used to calculate the odds ratios (OR) and 95% confidence interval (CI).RESULTS: The ADH G allele carriers were more susceptible to esophageal cancer, but no association was found between ADH2 genotypes and risk of esophageal cancer when disregarding alcohol drinking status. Regardless of ADH2 genotype, ALDH2G/A or A/A carriers had significantly increased risk of developing esophageal cancer, with homozygous individuals showing higher esophageal cancer risk than those who were heterozygous. A significant interaction between ALDH2 and drinking was detected regarding esophageal cancer risk; the OR was 3.05 (95% CI: 2.49-6.25). Compared with non-drinkers carrying both ALDH2 G/G and ADH2 A/A, drinkers carrying both ALDH2 A allele and ADH2 G allele showed a significantly higher risk of developing esophageal cancer (OR = 8.36, 95% CI: 2.98-23.46).CONCLUSION: Both ADH2 G allele and ALDH2 A allele significantly increase the risk of esophageal cancer development in Southeast Chinese males. ALDH2 A allele significantly increases the risk of esophageal cancer development especially in alcohol drinkers. Alcohol drinkers carrying both ADH2 G allele and ALDH2 A allele have a higher risk of developing esophageal cancer. 展开更多
关键词 Alcohol dehydrogenase-2 Aldehyde dehydrogenase-2 Gene polymorphisms Alcohol drinking Esophageal cancer
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Regeneration of transgenic loblolly pine expressing genes for salt tolerance 被引量:3
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作者 唐巍 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 2002年第1期1-6,82,共6页
Salinity stress is one of the most serious factors limiting the distribution and productivity of crops and forest trees. The detrimental effects of salt on plants are a consequence of both a water deficit resulting in... Salinity stress is one of the most serious factors limiting the distribution and productivity of crops and forest trees. The detrimental effects of salt on plants are a consequence of both a water deficit resulting in osmotic stress and the effects of excess sodium ions on critical biochemical process. A novel approach to improve salt tolerance has been established by using the technology of plant genetic transformation and using loblolly pine (Pinus taeda L.) as a model plant. Mature zygotic embryos of loblolly pine were infected with Agrobacterium tumefaciens strain LBA 4404 harbouring the plasmid pBIGM which carrying the mannitol-1-phosphate dehydrogenase (Mt1D) and glucitol-6-phosphate dehydrogenase (GutD). Organogenic transgenic calli and transgenic regenerated plantlets were produced on selection medium containing 15mg/L kanamycin and confirmed by Southern blot analysis of genomic DNA. Salt tolerance assays demonstrated that the salt tolerance of transgenic calli and regenerated plantlets were increased. These results suggested that an efficient Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation protocol for stable integration of foreign genes into loblolly pine has been developed and this could be useful for the future studies on engineering breeding of conifers. 展开更多
关键词 Pinus taeda L. Agrobacterium tumefaciens Salt tolerance Genetic engineering
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碱性果胶酶高产菌株的构建和高密度发酵 被引量:7
15
作者 望潇文 向腊 +2 位作者 徐婷 卢争辉 张桂敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2017-2027,共11页
碱性果胶酶可用于苎麻脱胶和棉织物前处理的精练工艺,与传统的高温碱煮相比,具有保护纤维、降低能耗和化学污染的优势,因此获得高表达的碱性果胶酶基因工程菌,低成本生产碱性果胶酶对于纺织工业节能减排具有重要的意义。前期研究工作已... 碱性果胶酶可用于苎麻脱胶和棉织物前处理的精练工艺,与传统的高温碱煮相比,具有保护纤维、降低能耗和化学污染的优势,因此获得高表达的碱性果胶酶基因工程菌,低成本生产碱性果胶酶对于纺织工业节能减排具有重要的意义。前期研究工作已经将来源于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168的碱性果胶酶基因pel经过密码子优化后在毕赤酵母Pichia pastoris GS115中成功表达。本研究为了提高其表达量,首先利用启动子和信号肽都优化的载体pHBM905BDM进行表达,摇瓶酶活从68 U/mL增加到100 U/mL,qPCR检测转录水平提高了27%。再利用果胶底物平板筛选水解圈大的转化子进行摇瓶发酵获得菌株GS115-pHBM905BDM-pels4,摇瓶酶活为536 U/mL。随后构建重组质粒pPIC9K-pels,电转化菌株GS115-pHBM905BDM-pels4,利用抗生素G418平板进行筛选,在含4 mg/mL的G418抗性平板上得到菌株GS115-pHBM905BDM-pPIC9K-pels1,摇瓶酶活为770 U/mL,qPCR测定含7个拷贝目的基因。最后将该菌株在5 L的发酵罐中进行高密度发酵,果胶酶酶活提高至2 271 U/mL。该碱性果胶酶酶活已达到目前酵母表达的最高水平,说明其具有很好的应用于纺织工业的潜力。 展开更多
关键词 碱性果胶 毕赤酵母 G418抗性标记 组氨醇脱氢酶基因(HIS4)选择标记 高密度发酵
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