醋柴胡多糖对拉米夫定体外抗乙型肝炎病毒的增效作用研究

目的:考察醋柴胡多糖对拉米夫定抗乙型肝炎病毒(HBV)的增效作用,并初步探讨其作用机制。方法:将不同浓度的醋柴胡多糖、拉米夫定及二者联合作用于人肝癌细胞HepG2.2.15,同时设立对照组,孵育48 h,酶联免疫吸附试验试剂盒检测细胞上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)分泌量,荧光探针定量聚合酶链式反应(PCR)检测细胞HBV脱氧核糖核酸(DNA)表达量,金(正均)氏公式定量分析醋柴胡多糖的增效作用。采用高效液相色谱法测定细胞内拉米夫定含量;Western blot法测定有机阳离子转运蛋白(OCT)1、OCT2、P糖蛋白(P-gp)和多药耐药蛋白2(MRP2)的表达量。结果:与拉米夫定单用组相比,醋柴胡多糖增加拉米夫定对HBsAg分泌的抑制作用,表现为相加作用、对HBeAg作用表现为协同增强,Q值达6.55、对HBV-DNA抑制作用表现为相加。醋柴胡多糖低剂量组、醋柴胡多糖低中剂量组、醋柴胡多糖低高剂量组可显著促进拉米夫定的摄取;醋柴胡多糖高剂量联用组可显著降低P-gp的表达;醋柴胡多糖单用及联用组均可显著提高OCT1的表达。结论:醋柴胡多糖可通过增加拉米夫定的摄取发挥协同抗HBV作用,其作用机制可能P-gp、OCT1有关。

不同分子量醋柴胡多糖对迟发型超敏反应小鼠的影响

目的探讨不同分子量醋柴胡多糖(vinegar-baked Bupleuri Radix polysaccharides,VBCP)对迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH)小鼠的影响。方法采用超滤法分离以获得不同分子量的醋柴胡多糖。将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、醋柴胡总多糖组和不同分子量醋柴胡多糖组,采用2,4-二硝基氟苯(DNFB)制备迟发型超敏反应模型,给予总多糖和不同分子量醋柴胡多糖(100 mg·kg^(-1))干预10 d后,测定皮肤厚度,称质量计算耳肿度和脾脏指数,采用MTT法测定脾淋巴细胞活力。采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠肠道派氏结病理组织变化,并采用ELISA法检测派氏结中干扰素γ(INF-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平。结果分离得到分子量>750、100~750、10~100、3~10及<3 kDa的5个不同分子量部位的醋柴胡多糖(命名为VBCP 1~5),各分子量段醋柴胡多糖均能明显降低小鼠腹部皮肤厚度(P<0.01);总多糖、醋柴胡多糖1、醋柴胡多糖4和醋柴胡多糖5能明显抑制小鼠耳肿胀(P<0.05,P<0.01);醋柴胡多糖1、醋柴胡多糖3、醋柴胡多糖4和醋柴胡多糖5能明显降低脾脏指数(P<0.01);总多糖、醋柴胡多糖1、醋柴胡多糖3、醋柴胡多糖4和醋柴胡多糖5能明显降低脾淋巴细胞活力(P<0.05,P<0.01);醋柴胡多糖1、醋柴胡多糖3、醋柴胡多糖4和醋柴胡多糖5能明显减少肠道派氏结中淋巴细胞数量;总多糖、醋柴胡多糖1、醋柴胡多糖2、醋柴胡多糖4和醋柴胡多糖5能明显降低INF-γ含量(P<0.05),醋柴胡多糖1、醋柴胡多糖3可明显升高IL-4含量(P<0.01)。结论不同分子量醋柴胡多糖对DTH小鼠均具有免疫抑制作用,其作用机制可能与其降低小鼠肠道派氏结中淋巴细胞数量以及抑制淋巴细胞INF-γ水平和升高IL-4水平有关,其中醋柴胡多糖2的作用不明显。

不同分子量醋柴胡多糖对Raw264.7巨噬细胞抗炎免疫活性的影响

目的探讨不同分子量醋柴胡多糖对Raw264.7小鼠巨噬细胞抗炎免疫活性的影响。方法采用截留不同分子量的透析袋将醋柴胡多糖进行不同分子量分离;采用MTT检测不同分子量醋柴胡多糖对Raw264.7小鼠巨噬细胞活力的影响;采用中性红吞噬实验检测多糖对细胞吞噬活性的影响;采用Griess法检测不同分子量醋柴胡多糖对LPS刺激Raw264.7炎症细胞模型NO释放的影响。结果分离得到<3.5,3.5~50,50~100,100~300,300~1 000,>1 000 kDa 6个不同分子量段的醋柴胡多糖;各分子量段醋柴胡多糖在1.95~31.25μg·mL^-1对巨噬细胞无毒性;除<3.5 kDa分子量段外,其他分子量段醋柴胡多糖能显著促进巨噬细胞吞噬活性,且分子量>100 kDa醋柴胡多糖活性更显著;各分子量段醋柴胡多糖均能显著抑制LPS刺激Raw264.7炎症细胞NO的释放。结论分子量是影响醋柴胡多糖抗炎免疫活性差异的重要因素。