一种区分莪术、醋莪术、郁金饮片及标准汤剂的特征图谱方法研究

目的:建立一种能够区分莪术、醋莪术和郁金的饮片及其标准汤剂的UPLC特征图谱方法。方法:色谱条件:Waters ACQUITY UPLC BEH Shield RP 18(2.1×100 mm,1.7μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速0.4 mL/min,检测波长为240 nm,柱温40℃。结果:分别以多批莪术、醋莪术及郁金饮片及其标准汤剂建立了标准图谱。其中莪术饮片特征图谱标示了特征峰10个;醋莪术饮片在此基础上多一个特征峰,即标示了11个特征峰;郁金饮片特征图谱标示了5个特征峰,其中有4个可以与莪术饮片对应,有一个峰为其特征峰;莪术标准汤剂标示了9个特征峰,醋莪术标准汤剂在此基础上多一个特征峰,即标示了10个特征峰;郁金标准汤剂标示了9个特征峰,其中有6个可与莪术标准汤剂对应,有3个峰为其特征峰。醋莪术的峰2为炮制品的特征峰,可以作为醋莪术与莪术的鉴别点。郁金所有峰面积均较莪术与醋莪术小,且其中莪术烯醇峰较其他峰面积大,可以作为郁金与莪术、醋莪术的鉴别点。结论:本研究所建立的方法可以通过特征峰来鉴别莪术、醋莪术及郁金,同时可为莪术类商品的鉴别提供参考依据。

醋莪术对气滞血瘀证血液流变学影响的表征及谱效相关性研究

目的建立醋莪术改善气滞血瘀证大鼠血液流变作用的谱效关系,表征醋莪术化学信息与生物效应信息的相关性,以揭示其作用物质基础。方法采用灰色关联度分析法,将已建立的10个批次醋莪术HPLC指纹图谱的16个共有峰与其血液流变学改善作用的5个药效指标相关联,构建醋莪术"谱-效"模型。结果醋莪术指纹图谱16个共有峰中,第6号、7号、9号、10号、11号、12号、13号色谱峰与醋莪术对气滞血瘀证大鼠血液流变学的药效作用相关性贡献较大,认为这7个色谱峰为体现醋莪术破血功效的生物信息峰簇。结论通过"谱-效"关系研究,寻找到醋莪术"破血"的有效物质基础,为莪术的醋制机理和质量评价奠定基础。

醋莪术饮片HPLC指纹图谱研究

目的:建立醋莪术饮片的HPLC指纹图谱。方法:采用HPLC法,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长216 nm;并加以计算机辅助相似性评价系统对指纹图谱进行相似度分析。结果:建立了醋莪术饮片HPLC指纹图谱共有模式,标示了16个共有峰,得到分离度、重复性均较好的特征指纹图谱。结论:该指纹图谱研究完善了醋莪术饮片质量评价标准,其方法简便可靠,重复性好,可作为目前醋莪术饮片内在质量控制的有效方法之一。

HPLC法测定不同产地醋莪术饮片中姜黄素、双去甲氧基姜黄素和去甲氧基姜黄素的含量

目的采用HPLC法测定不同产地醋莪术饮片中姜黄素、双去甲氧基姜黄素和去甲氧基姜黄素的含量,对不同产地醋莪术饮片进行质量评价。方法色谱柱为Agilent pro shell C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.5‰甲酸水-0.5‰甲酸乙腈(梯度洗脱),流速1.0 ml/min,柱温30℃,检测波长415 nm,进样量10μl。结果在上述色谱条件下测得姜黄素、双去甲氧基姜黄素和去甲氧基姜黄素分别在1.42~71.00、0.22~10.82、1.01~50.50μg/ml时与色谱峰面积线性关系良好,平均回收率分别为99.2%、96.9%、97.7%,RSD分别为1.0%、1.9%、1.2%。结论该方法准确、灵敏,可作为不同产地醋莪术饮片的质量控制方法;测定结果表明,四川产醋莪术饮片中3种成分含量相对较高。

醋莪术配方颗粒HPLC指纹图谱研究

采用HPLC法,色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),以乙腈—水为流动相,梯度洗脱,检测波长254 nm,色谱柱柱温30℃,流速1.0 mL/min.建立了醋莪术饮片HPLC指纹图谱共有模式,标定了8个主要共有峰,并利用计算机辅助相似性评价系统对指纹图谱进行相似度分析,表明相似度较大.实验结果表明:该指纹图谱研究方法简便可靠,重复性好,可作为目前醋莪术配方颗粒内在质量控制有效方法之一.

醋莪术配方颗粒质量标准研究

目的:建立醋莪术配方颗粒的质量标准。方法:采用薄层色谱法对醋莪术配方颗粒进行定性分析,采用高效液相色谱法对醋莪术中的姜黄素进行含量测定。结果:建立的薄层色谱图中可检视出醋莪术清晰的特征斑点;姜黄素在0.017μg^0.17μg范围内呈良好线性关系,回归方程为:Y=1.1595X-0.0123,R=0.9998,平均回收率为97.33%(RSD为1.8%)。结论:本方法操作简便、科学、重现性好,可以有效控制醋莪术配方颗粒质量。

UPLC法测定广西莪术、醋莪术及其水提药渣中莪术烯醇含量

采用Waters ACQUITY UPLC BEH Shield RP C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液(44∶56,体积比)为流动相,等度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温35℃,检测波长262 nm,建立了莪术烯醇含量测定的UPLC法,比较了广西莪术、醋莪术及其水提药渣中莪术烯醇含量的差异性。结果表明,广西莪术和醋莪术水提药渣中莪术烯醇含量分别是广西莪术和醋莪术饮片中莪术烯醇含量的50%、44%,水提药渣中莪术烯醇含量仍然很高,具有较大利用价值,可根据需求进行二次开发与利用;不同干燥温度对水提药渣中莪术烯醇含量的影响较小。莪术烯醇含量测定的UPLC法稳定、准确、灵敏,可用于莪术及炮制品的质量控制,为水提药渣的资源化利用提供科学依据。

红芪蜜炙前后配伍醋莪术抗结肠炎相关结直肠癌的药效比较研究

目的:基于转录组学结合免疫浸润分析探讨红芪蜜炙前后配伍醋莪术抗结肠炎相关结直肠癌(CAC)的药效及潜在机制差异。方法:75只SPF级C57/6J小鼠随机分为5组:空白组、氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)组、柳氮磺胺吡啶阳性对照组、红芪∶醋莪术(4∶1)组(6.825 g/kg)及炙红芪∶醋莪术(4∶1)组(6.825 g/kg)。采用AOM与DSS联合诱导CAC小鼠模型的同时,各给药组给药干预,空白组给予0.9%氯化钠溶液,干预17周后实验结束。计算各组小鼠体质量、DAI评分、结肠长度、肿瘤计数、生存指数、结肠长度/结肠质量、结肠及脾、胸腺、肝、肺、肾与心等脏器指数,HE染色观察小鼠结肠病变情况,ELISA法检测小鼠血清白介素(IL)-1β及肿瘤坏死因子(TNF)-α表达水平,有参转录组测序结合免疫浸润分析筛选并预测给药后免疫细胞表达情况,流式细胞术对所筛选的免疫细胞进行检测。结果:与AOM/DSS组比较,炙红芪-醋莪术与红芪-醋莪术均可显著升高CAC小鼠体质量、结肠长度、生存率及胸腺指数(P<0.05,P<0.01),显著降低DAI评分、肿瘤计数、HE病理评分、结肠长度/结肠质量及结肠、脾、胸腺、肝、肺等脏器指数与血清IL-1β与TNF-α表达水平(P<0.05,P<0.01);但从结肠HE病理切片评分及TNF-α水平来看,炙红芪-醋莪术的作用要显著优于红芪-醋莪术(P<0.05,P<0.01)。有参转录组测序结合免疫浸润分析发现,红芪-醋莪术与炙红芪-醋莪术均可通过上调小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞表达量,降低CD4+T/CD8+T值;但对小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞表达的影响,炙红芪-醋莪术作用显著优于红芪-醋莪术(P<0.01)。结论:红芪-醋莪术与炙红芪-醋莪术均具防治CAC作用,机制与调节机体T、B淋巴细胞表达量,改善机体免疫,从而改善炎症状态,延缓炎症进程,改善结肠病变有关。但炙红芪-醋莪术防治CAC优于红芪-醋莪术的机制主要与降低小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞与血清TNF-α水平,从而改善小鼠结肠炎病理损伤有关。

生、醋莪术对大鼠免疫性肝纤维化及HSC-T6增殖和α-SMA,Procollagen Ⅰ表达的影响

比较生、醋莪术对猪血清所致大鼠免疫性肝纤维化及对活化的肝星状细胞(HSC-T6)增殖和α-SMA,ProcollagenⅠ表达的影响。采用腹腔注射猪血清0.5 mL/只,每周2次,共14周制备大鼠免疫性肝纤维化模型。观察生、醋莪术(0.95,1.90 g·kg^(-1))对大鼠血清ALT,AST,PC-Ⅲ,IV-C,LN,HA和肝组织HYP,MDA的表达水平;采用HE染色观察大鼠肝组织病理改变情况,Masson染色和天狼猩红染色观察大鼠肝组织中胶原表达情况;体外培养HSC-T6细胞,MTT法测定不同浓度生、醋莪术含药血清作用12,24,36,48 h对HSC-T6增殖的影响;采用Real-time PCR法检测各组α-SMA和ProcollagenⅠ表达情况。结果显示,给药生、醋莪术后,大鼠血清ALT,AST,PC-Ⅲ,IV-C,LN,HA表达水平均下降,与生莪术组相比,醋莪术组作用效果优于生莪术组;生、醋莪术含药血清各剂量组均能抑制HSC-T6的增殖,呈现一定的量效和时效关系;各给药组作用24 h后,HSCT6中α-SMA和ProcollagenⅠ表达水平降低,且醋莪术组降低更显著。生、醋莪术均能不同程度减轻肝纤维化,其抗肝纤维化机制可能与抑制HSC-T6增殖,减少细胞外基质的生成并促进其降解有关。

醋莪术饮片质量控制方法的研究

目的完善醋莪术饮片的质量控制方法。方法用薄层色谱鉴别醋莪术饮片;检测吸光度、水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇浸出物;测定挥发油的含量;采用HPLC测定醋莪术中姜黄素的含量。结果姜黄素与峰面积的线性关系良好(r=0.9999,n=6),平均加样回收率为96.02%(RSD=2.80%,n=6),拟定醋莪术中姜黄素的含量不得少于40μg.g-1;挥发油含量测定的结果明显低于2010年版《中国药典》中醋莪术项下的有关规定。结论采用HPLC法测定醋莪术中姜黄素的方法简便、灵敏、重复性好,能更好地控制其质量。

人工神经网络法优化醋莪术挥发油的提取与包合工艺

目的优化醋莪术挥发油的提取与包合工艺。方法采用水蒸气蒸馏法提取醋莪术挥发油,以浸泡时间、加水量、提取时间为主要影响因素,以挥发油得率为评价指标,正交试验筛选挥发油的提取工艺;采用饱和水溶液法包合挥发油,以β环糊精与挥发油的加入比例、包合时间及包合温度为主要影响因素,以挥发油包合率和包合物得率为评价指标,进行正交试验设计,筛选挥发油包合工艺。采用人工神经网络法,优化提取与包合的参数。结果提取与包合工艺条件分别为:取醋莪术饮片100 g,加8倍量水,浸泡1 h,水蒸气蒸馏提取6 h,即得挥发油;取挥发油1 mL,β环糊精与挥发油加入比为8∶1,包合温度50℃,包合1 h,即得挥发油包合物。结论优化工艺能显著提高原药材中挥发油的利用率,稳定可行,重复性较好。

不同产地醋莪术饮片中β-榄香烯的含量比较

目的:建立以气相色谱法测定不同产地醋莪术饮片中β-榄香烯含量的方法。方法:以水杨酸甲酯为内标物,采用HP-5弹性石英毛细管色谱柱,程序升温,氢火焰离子化检测器,气化室温度为240℃,检测室温度为250℃,不分流进样,进样量为1μL。结果:β-榄香烯进样量在0.01507～0.15070μg范围内同其与水杨酸甲酯峰面积的比值呈良好线性关系(r=0.9996);平均回收率为96.13%,RSD=1.37%(n=9)。温郁金中的β-榄香烯含量相对较高。结论:本方法可作为不同产地醋莪术饮片中β-榄香烯的含量测定方法。

醋制蓬莪术中总姜黄素回流提取工艺的优化

目的优化醋制蓬莪术中总姜黄素回流提取工艺。方法以双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素含有量为评价指标,乙醇体积分数、乙醇用量、提取次数、提取时间为影响因素,正交试验结合人工神经网络优化提取工艺。结果最佳条件为加入3倍量95%乙醇提取2次,每次2 h,人工神经网络优化后双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素含有量分别为1.12、19.83、30.00μg/mL,均高于正交试验优化后。结论该方法稳定可行,重复性好,可用于回流提取醋制蓬莪术中总姜黄素。

星点设计-效应面法优化醋莪术挥发油滴丸制备工艺研究

目的:优选蓬莪术挥发油滴丸的制备工艺。方法:采用水蒸气蒸馏法提取醋莪术中的挥发油。以成品的丸重差异系数、外观评分、溶散时限和吉马酮、呋喃二烯含量的总评"归一值"为评价指标,在单因素试验基础上,采用四因素五水平星点试验考察滴距、基质与挥发油质量比、药液温度和冷凝液上部温度对莪术滴丸制备工艺的影响,对试验数据进行多元线性、二项式方程和三项式方程拟合,建立回归模型,通过效应面法确定最佳工艺并进行预测分析和验证试验。结果:醋莪术挥发油滴丸的最佳制备工艺为基质PEG 4000,冷凝液为二甲基硅油,滴距为6cm,基质挥发油(4:1),药液温度85℃,冷凝液上部温度15℃。结论:星点设计-效应面法适用于醋莪术挥发油滴丸的制备工艺优化,建立的数学模型具有良好的预测性,为醋莪术挥发油新制剂的开发提供科学依据。

醋三棱配伍莪术前后抗血小板聚集活性物质研究

目的 研究醋三棱配伍莪术前后的抗血小板聚集活性物质。方法 分别建立醋三棱、药对(醋三棱-醋莪术)醇提液的HPLC化学指纹图谱,以体外抑制血小板聚集作用为药效指标,采用灰色关联结合偏最小二乘判别分析进行谱效关系研究。结果 建立10批次醋三棱醇提液的HPLC指纹图谱,标定33个共有峰,指认其中21种化学成分,与抗血小板聚集相关的主要活性物质有6-羟基烟酸、5-羟甲基糠醛、3,4二羟基苯乙酸、对羟基苯甲酸、香草酸,丁香酸,阿魏酸;建立10批次醋三棱-醋莪术的HPLC指纹图谱,标定38个共有峰,指认其中23种化学成分,与抗血小板聚集相关的主要活性物质包括原儿茶酸、3,4-二羟基苯乙酸、香草酸、丁香酸、苯甲酸、对香豆酸甲酯。进行单体成分活性验证,发现丁香酸、阿魏酸、对羟基苯甲酸、香草酸的作用较强。结论 醋三棱抗血小板聚集作用的发挥是多种酚酸及醛类成分协同作用的结果,配伍前后的活性物质同中有异,可结合临床应用规律进行综合分析得到更为全面的结论。

金嗓散结丸质量标准的研究

目的建立金嗓散结丸的质量标准。方法采用薄层色谱法对处方中蒲公英、玄参、桃仁、醋莪术进行定性鉴别;并用HPLC法对处方中丹参酮ⅡA进行含量测定。结果薄层色谱法定性鉴别专属性强。丹参酮ⅡA在0.112-0.560μg/ml的范围内呈良好的线性关系(r=1),加样回收率为98.75%,RSD为0.36%(n=6)。结论所建立的方法准确可靠,灵敏度高,专属性强,可更有效地控制金嗓散结丸的质量。

金嗓散结丸中各味药材薄层色谱影响因素的研究

目的研究金嗓散结丸各中药成分最优的薄层色谱条件。方法在温度24℃、8℃,相对湿度18%、88%条件下,分别对金嗓散结丸中各药材成分进行薄层色谱鉴别。结果蒲公英选用温度8℃、相对湿度88%,玄参选用温度24℃、相对湿度18%,桃仁选用温度8℃、相对湿度18%,醋莪术选用温度8℃、相对湿度18%,以上条件能得到最优的薄层色谱分离度,斑点显色清晰,阴性对照无干扰。结论温度、相对湿度对中药材薄层色谱展开影响很大,因此在薄层色谱实验中控制温度和湿度以减少其对实验的影响。

电子鼻融合BP神经网络鉴别生、醋广西莪术及姜黄素类成分的含量预测

为建立一种快速准确识别生、醋广西莪术并预测其姜黄素类化合物含量的科学评价方法,采用一整套仿生学的识别模式,通过电子鼻获取莪术及其醋制品的数字化气味信号,应用反向传播(back propagation,BP)神经网络算法分析数据,以精确度、敏感性和特异性位指标评估判别模型,以相关系数和均方误差评估回归模型。实验结果表明,通过BP神经网络算法建立的电子鼻信号判别模型在训练集、校正集和预测集中的3个指标均为100%,明显优于传统的决策树、朴素贝叶斯、支持向量机、K最邻近和集成分类,能准确地区分生、醋广西莪术;回归模型预测集相关系数和均方误差分别为0.9748和0.1175,能很好地预测广西莪术中姜黄素类化合物含量,展示了模仿生物识别模式在中药分析中的优越性。电子鼻气味指纹图谱结合BP神经网络算法,快速、便捷、准确地实现了的判别和回归,这提示了可以有更多的仿生学信息获取和识别模式在中药领域中联合使用,为中药质量的快速评价和标准化提供了思路和方法。

莪术醋制前后抗复合因素致大鼠肝纤维化作用的比较研究

目的比较莪术醋制前后对复合因素致大鼠肝纤维化的影响及其作用机制。方法大鼠sc 40%CCl4橄榄油溶液合并ig乙醇、饲喂高脂饲料制备肝纤维化模型,持续给予诱导剂7周。实验设对照组、模型组、秋水仙碱(0.2 mg/kg)阳性对照组、生莪术(0.95、1.90 g/kg)给药组、醋莪术(0.95、1.90 g/kg)给药组,各给药组于造模同时给予相应药物,每天1次,连续给药8周。检测大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBiL)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平,肝脏指数,肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的量。HE染色观察肝组织病理学改变,Masson染色观察肝纤维化程度。结果与对照组比较,模型组出现典型的肝纤维化病理改变,血清ALT、AST、TBiL、HA、LN水平显著升高,肝组织Hyp、MDA的显著增加,SOD活性显著降低。与模型组相比,生莪术、醋莪术给药组均可不同程度地改善大鼠肝纤维化程度,醋莪术作用效果明显优于生莪术,且其高剂量组有明显的治疗优势。结论莪术醋制后抗复合因素所致大鼠肝纤维化作用显著增强。

醋炙蓬莪术活血化瘀作用研究

目的:探讨醋炙蓬莪术不同提取物(水提物、挥发油、油水混合物、醇提物)的活血化瘀作用。方法:采用毛细血管法测定凝血时间;建立急性血瘀模型,测定血瘀大鼠全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、红细胞变形指数、纤维蛋白原、卡松粘度等。结果:醋炙蓬莪术水提物5g生药/kg、挥发油5g生药/kg、油水混合物5g生药/kg、醇提物5g生药/kg均能显著延长小鼠凝血时间。醋炙蓬莪术挥发油5g生药/kg能够明显降低全血粘度、全血低切相对指数、红细胞聚集指数、全血还原粘度、红细胞变形指数、纤维蛋白原;醋炙蓬莪术油水混合物5g生药/kg能够明显降低全血粘度、全血低切相对指数、红细胞聚集指数、全血还原粘度;醋炙蓬莪术水提物5g生药/kg和醇提物5g生药/kg具有降低模型大鼠血液流变学指标的趋势。结论:醋炙蓬莪术能够延长小鼠凝血时间和改善大鼠血液流变学,提示醋炙蓬莪术具有活血化瘀作用。