醋酸钙不动杆菌PHEA-2对苯酚的降解特性研究

自炼油厂污水中分离的醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus) PHEA-2具有较强的苯酚降解能力.在温度为30℃和接种量为1%条件下,该菌在24h内完全降解苯酚的浓度为300mg/L；该菌的最适生长和最适降解苯酚温度为30℃;在pH值5~10范围内能保持对苯酚的降解能力.醋酸钙不动杆菌PHEA-2的苯酚降解反应符合Monod动力学模式,其反应的米氏常数Km为275mg/L,最大反应速度Vm为41mg苯酚/(108·h).一定量的葡萄糖(5%)促进PHEA-2菌体的生长,从而提高了整个培养体系降解苯酚的能力.

醋酸钙不动杆菌PHEA-2的16SrDNA测序及其苯酚降解特性研究

从我国东北某炼油厂工业废水中分离到一株高效降解苯酚的菌株PHEA 2。采用PCR技术从该菌总DNA中克隆到 150 0bp的 16SrDNA片段。该片段的核苷酸序列分析结果表明 ,PHEA 2的 16SrDNA核苷酸序列与醋酸钙不动杆菌模式菌株 (Acine tobactercalcoaceticus )的同源性为 98%。在细菌系统发育分类学上 ,PHEA 2归属变形细菌γ亚类中的不动杆菌属 ,醋酸钙不动杆菌。PHEA 2除了能够降解苯酚外 ,还能降解苯甲酸盐和邻苯二酚。

异育银鲫(Carassius auratus gibelio)源醋酸钙不动杆菌表型及分子鉴定

采用常规的培养特征、理化特性及分子生物学的方法,对从濒死异育银鲫(Carassius auratus gibelio)血液中分离到的菌株SY-1进行了致病性、表型生物学、分子生物学及药敏试验的系统研究。结果表明,该菌株在盐度5—30、pH6—8,温度10—42℃的LB液体培养基中均能生长,具有脲酶。该菌株16SrRNA基因序列(Gen Bank登录存取号:JX164201,长度1435bp)与其它不动杆菌属菌的16SrRNA基因同源性相似性在99%—100%之间,构建系统发育树确定该菌株为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)。人工回感可导致异育银鲫死亡。药敏试验结果显示:对恩诺沙星、强力霉素、萘啶酸、复方新诺明、氧氟沙星等10种抗生素敏感;对羧苄青霉素、诺氟沙星、大观霉素、卡那霉素、四环素等14种抗生素中度敏感;对氨苄西林、苯唑西林、林可霉素、万古霉素、氟苯尼考等15种抗生素耐药。

黑山羊醋酸钙不动杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为确诊南宁某养殖户黑山羊死亡的病因,取病死黑山羊的肝、脾和心血进行了细菌分离培养。通过形态学鉴定、生化试验、16S r DNA测序分析、小鼠攻毒试验、药敏试验和耐药基因检测等方法,对分离到的疑似致病菌进行鉴定及药敏特性观察。结果显示,分离菌为醋酸钙不动杆菌,可引起80%的小鼠死亡(4/5),表明该分离菌株对小鼠有较强的致病性。药敏特性发现该菌对青霉素类、头孢菌素类、呋喃类等4种抗生素耐药,对磺胺类、氯霉素类及多粘菌素类等5种抗生素呈中敏;对喹诺酮类、氨基糖苷类及大环内酯类等9种抗生素敏感。检出磺胺类、四环素类及氯霉素类等的14个耐药基因。结果表明,分离的醋酸钙不动杆菌毒力较强,有多重耐药性,对养殖业有一定的危害,要引起重视。

临床分离的醋酸钙鲍曼复合不动杆菌耐药性分析

目的:研究无锡市第四人民医院和无锡市第三人民医院临床分离的醋酸钙鲍曼复合不动杆菌的耐药情况及其临床分布特点。方法:收集并分离临床来源的35株醋酸钙鲍曼复合不动杆菌,观察并记录临床分布,并用琼脂二倍稀释法测定抗菌药物对醋酸钙鲍曼复合不动杆菌的MIC值。结果:临床分离的35株醋酸钙鲍曼复合不动杆菌ICU感染居多,占42.86%,老年男性居多,主要来源于痰,占88.57%。醋酸钙鲍曼复合不动杆菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢唑林、呋喃妥因的耐药率均为100%;对氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、头孢米诺、头孢匹胺、氨曲南和庆大霉素的耐药率>90%;对替卡西林/克拉维酸、头孢曲松、头孢吡肟、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲(口恶)唑的耐药率≥80%;对哌拉西捌/他唑巴坦、头孢他啶、阿米卡星、妥布霉素、加替沙星的耐药率>50%;对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率相对较低,分别为23.53%、11.43%、11.43%。结论:醋酸钙鲍曼复合不动杆菌对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦较敏感,临床医生应根据药敏结果和患者自身情况合理用药。

医院获得性肺炎患者醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的鉴定和耐药基因研究

目的:了解我院医院获得性肺炎患者下呼吸道分离的醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的菌种鉴定方法和耐药性,探讨其耐药机制。方法:收集2009-2014年临床分离的醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体共318株,用K-B法进行药敏试验,用gyr B多重PCR法对其进行菌种鉴定,检测碳青霉烯酶及金属β-内酰胺酶耐药基因。结果:318株醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体鉴定为鲍曼不动杆菌298株、不动杆菌基因种型3为5株、不动杆菌基因种型13TU 8株。对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦的不敏感率分别为78.0%、89%、92.1%。OXA型碳青霉烯酶基因OXA-51、OXA-23、OXA-24、OXA-58检出率分别为91.2%、65.7%、1.3%、3.8%;金属β-内酰胺酶基因IMP、VIM、GIM-1、SPM-1检出率分别为0.9%、34.6%、6.3%、0.9%;未检测到OXA-48、OXA-143、SIM-1、KPC、NDM-1等基因。结论:gyr B多重PCR法是一种快速、特异性高、可靠的鉴定鲍曼不动杆菌的方法。鲍曼不动杆菌对多种抗生素呈现高度耐药。我院鲍曼不动杆菌耐药性主要与OXA-23、VIM等耐药基因的表达有关。

醋酸钙不动杆菌的分离鉴定及溶藻特性

淡水微囊藻水华不仅造成水体动植物缺氧死亡,而且释放藻毒素,影响人类和其它动物的健康。利用液体感染技术,从河南省平顶山市白龟山水库分离一株能够溶解铜绿微囊藻PCC 7806的溶藻菌,命名为溶藻菌5,16S r DNA核苷酸序列测序证实该菌株为醋酸钙不动杆菌。它具有一定的溶藻特异性,只溶解PCC 7806,对FACHB-930和斜生栅藻没有影响,能够促进衣藻和红球藻的生长。最佳溶藻体积比为1∶1。溶藻菌5的菌体和无细胞培养物均具有相同的溶藻效果。显微观察藻细胞被溶解的黄化液显示细菌并未附着在藻细胞周围,也无菌胶膜形成。表明溶藻菌5可能通过释放杀藻物质和与藻竞争营养物质两种机制溶解藻细胞。

MALDI-TOF MS对醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群菌种鉴定效果的分析

目的评估基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对醋酸钙不动杆菌-鲍曼不动杆菌复合群内菌种的鉴定能力。方法收集2018年1月至2020年3月经Vitek 2全自动微生物鉴定仪鉴定为醋酸钙不动杆菌-鲍曼不动杆菌复合群的菌株280株,用Vitek MALDI-TOF MS(V3.2)鉴定并用gyr B基因测序验证,比较复合群内不同种间的耐药性差异。结果 280株醋酸钙不动杆菌-鲍曼不动杆菌复合群经Vitek MALDI-TOF MS鉴定,结果为鲍曼不动杆菌251株、医院不动杆菌15株和皮特不动杆菌14株。质谱鉴定结果与基因测序结果符合率为100%。鲍曼不动杆菌对多种抗菌药物均表现为高度耐药,耐药率多在60%以上,医院不动杆菌和皮特不动杆菌对多种抗菌药物呈现高度敏感。除了对阿米卡星、米诺环素、复方磺胺甲噁唑外,鲍曼不动杆菌对各种检测药物的耐药性显著高于医院不动杆菌和皮特不动杆菌,差异有统计学意义(P<0.05);医院不动杆菌和皮特不动杆菌在各种检测药物耐药率上差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 Vitek MALDI-TOF MS3.2版本可实现醋酸钙不动杆菌-鲍曼不动杆菌复合群不同种的鉴定;醋酸钙不动杆菌-鲍曼不动杆菌复合群不同种的药敏结果存在差异性。

醋酸钙不动杆菌PAHs降解酶的超声波提取优化

为了提取醋酸钙不动杆菌(Actnetobacter calcoaceticus)的PAHs降解酶,利用超声波破碎醋酸钙不动杆菌细胞,对多环芳烃(PAHs)降解酶进行优化提取。在对超声输出功率、工作\间隔时间、菌体稀释倍数以及超声时间进行单因素实验的基础上,利用Box-Behnke中心组合实验设计,响应面法优化得到多环芳烃降解酶的最佳提取工艺为:工作\间隔时间为2 s\2 s、超声功率320W、总超声时间17 min、稀释倍数12.5,在此条件下提取的酶活力为190.48U/g。

响应面法优化醋酸钙不动杆菌菌株23的脂肪酶产酶条件

采用响应面法对醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)菌株23的发酵产脂肪酶培养基进行优化实验。实验首先考察该菌株产酶所需的最适碳源和氮源,然后用Plackett-Burman法设计实验确定影响产酶的主要影响因素,用最陡爬坡实验逼近最大响应区域,最后通过Box-Behnken方法进行二次回归分析得到最佳的产酶条件为:营养肉汤18.4%、蛋白胨9.18%、吐温800.52%、K2HPO40.2%,橄榄油1%,MgSO40.05%,CaCl20.05%,FeSO40.1%。在该优化条件下,发酵液的脂肪酶活力可以达到15.2U/ml,比优化前提高3倍。

鲍曼/醋酸钙不动杆菌复合体感染危险因素分析

目的对鲍曼/醋酸钙不动杆菌复合体感染的危险因素进行分析与总结,为临床提供预防的依据和方法。方法收集2015年12月至2017年12月在北京积水潭医院住院并培养出鲍曼/醋酸钙不动杆菌复合体的177例患者的临床资料进行回顾性研究。针对患者基础疾病与急性生理和慢性健康评分标准Ⅱ(APACHEⅡ)、各种侵入性操作、抗生素的使用、白蛋白、手卫生等进行单因素与多因素非条件Logistic回归分析,根据分析的结果临床采用相应的措施减少该菌的院内感染。结果共检出177株鲍曼/醋酸钙不动杆菌复合体,占革兰阴性杆菌感染的12. 3%(177/1 439)。单因素分析显示,APACHEⅡ评分、碳青霉烯类、手卫生、使用呼吸机、联合使用抗生素差、血清白蛋白降低均具有统计学意义(P <0. 05)。多因素非条件Logistic回归分析显示,APACHEⅡ评分、手卫生与机械通气是院内感染的独立危险因素。结论鲍曼/醋酸钙不动杆菌复合体对常用抗生素多数表现为耐药,治疗原发病、减少呼吸机的使用、注意手卫生能明显减少鲍曼/醋酸钙不动杆菌复合体的感染。

西藏日喀则地区绵羊源醋酸钙不动杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了解致西藏日喀则市某村死亡绵羊感染的主要病原,试验对采集的绵羊肝脏、肺脏、脾脏等病料组织进行病原菌的分离培养,对分离纯化后的细菌进行革兰氏染色;根据染色结果选择细菌鉴定卡和药敏鉴定卡进行鉴定,并对分离菌进行致病性分析;通过16S rRNA引物对分离菌进行PCR鉴定和遗传进化分析。结果表明:分离菌为革兰氏阴性;对分离的1株优势菌进行全自动微生物鉴定系统VITEK2 Compact System的GN卡鉴定,结果为鲍曼不动杆菌复合物;分离菌对氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南、庆大霉素、复方新诺明等8种药物敏感,对氨苄西林、头孢呋辛酯、安曲南、呋喃妥因等7种药物不敏感,对头孢曲松中度敏感;动物致病性试验结果表明,本菌具有一定的毒力;PCR产物测序比对后鉴定该菌为醋酸钙不动杆菌;遗传进化分析结果显示,该菌与序列号为MG011594.1的醋酸钙不动杆菌相似性达100%,确定为醋酸钙不动杆菌。说明西藏日喀则市某村死亡绵羊感染了醋酸钙不动杆菌,应加强防控。

替加环素对碳青霉烯类耐药鲍曼醋酸钙复合不动杆菌的体外抗菌活性

目的测定替加环素对碳青霉烯类耐药鲍曼醋酸钙复合不动杆菌的体外抗菌活性。方法收集2013年12月至2014年2月本院分离的碳青霉烯类耐药鲍曼醋酸钙复合不动杆菌,采用MTS法检测替加环素MIC值,折点采用美国食品药物管理局(FDA)公布的判定标准。结果 61株碳青霉烯类耐药鲍曼醋酸钙复合不动杆菌对临床常用抗菌药物具有极高的耐药率,替加环素的灵敏度为80.3%,中介率为19.7%,无耐药菌株。MIC90为3μg/mL,而MIC50为2μg/mL。结论替加环素对于本院分离的碳青霉烯类耐药鲍曼醋酸钙复合不动杆菌有较好的体外抗菌活性。

临床分离的醋酸钙鲍曼复合不动杆菌基因分型的研究

目的检测临床分离的醋酸钙鲍曼复合不动杆菌的基因类型。方法收集并分离临床来源的100株醋酸钙鲍曼复合不动杆菌,应用简化的随机扩增多态性DNA(RAPD)技术检测醋酸钙鲍曼复合不动杆菌的基因类型,同时应用模糊聚类人工免疫网络算法(AINFCM)对分型指纹图进行图像分割,提取出图谱亮条信息,为临床分离的醋酸钙鲍曼复合不动杆菌的基因图谱比对提供条件。结果临床分离的100株醋酸钙鲍曼复合不动杆菌中仅2株未得到RAPD指纹图谱,98株共得17种RAPD指纹图谱,以A型和D型为主,分别为37株和22株。结论本文100株醋酸钙鲍曼复合不动杆菌中初步推断为2株醋酸钙不动杆菌,98株为鲍曼不动杆菌。

一株牛源醋酸钙不动杆菌的分离鉴定、药敏试验及耐药基因检测

为研究醋酸钙不动杆菌的致病机制及防控措施,对疑似患有醋酸钙不动杆菌的病死牛肺脏组织进行病原分离,得到了1株优势菌命名为9-1。对分离菌株进行形态学观察、生化试验、16S rDNA基因序列测定,动物致病性试验和药敏试验。结果显示,分离菌株为革兰阴性杆菌且对试验小鼠具有较强的致病性,经生化试验和16S rDNA基因序列测定分析确定为醋酸钙不动杆菌。药敏试验结果显示该分离菌株对氟苯尼考、头孢噻肟、头孢氨苄、阿奇霉素耐药,对其余8种测试药物敏感。经β-内酰胺类(TEM、DHA、OXA-23、OXA-58)耐药基因检测结果显示均为阴性。为醋酸钙不动杆菌引起的疾病选择合理的抗菌药物提供了一定科学依据,并为进一步研究其耐药机制奠定了基础。

23例次痰培养醋酸鲍曼氏不动杆菌阳性的临床分析

目的 :通过对 2 3例次醋酸鲍曼氏不动杆菌培养阳性结果的分析 ,指导临床药物治疗。方法 :对 2 3例次小儿先天性心脏病术后重症监护室 (ICU)持续机械通气患者痰培养醋酸鲍曼氏不动杆菌阳性结果进行分析。结果 :持续机械通气治疗 >4 8h的患者痰培养醋酸鲍曼氏不动杆菌的阳性率显著增加。结论 :合理应用抗生素 ,降低院内感染的发病率 ,提高患儿治愈率。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合菌鉴定及同源性分析中的应用

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对我院血流感染样本中醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合菌的鉴定及同源性分析中的应用。方法收集2011年4月—2015年4月我院非重复血流感染标本,对VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪初步鉴定为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合菌的菌株,开展基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定,用MALDIBiotyper软件和ERIC-PCR进行同源性分析,并用16S r RNA及rec A基因测序技术进行验证。结果基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对20株VITEK 2无法鉴定到种的醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合菌展开了有效的鉴定,其中9株为医院不动杆菌(Acinetobacter nosocominalis),11株为皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii),两种细菌的质谱图中均含有特异性的峰图,能有效地将两类细菌进行区分。同源性分析结果将菌株分为2大簇(I型11株,II型9株),II型又分为3小簇(IIa4株,IIb3株,IIc2株)。I型、II型分布在我院4个病区。结论基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合菌鉴定方面具有精准、快速的优点,可以鉴别出皮特不动杆菌和医院不动杆菌,MALDI-Biotyper软件进行同源性分析十分便捷。

醋酸钙不动杆菌PHEA-2苯酚降解调控蛋白MphR化学信号域的研究

MphR是醋酸钙不动杆菌PHEA-2调控苯酚代谢的激活蛋白。通过分析苯酚羟化酶启动子的lacZ融合子(PmphK::lacZ)在21种苯酚及苯酚衍生物诱导时的β-半乳糖苷酶活性,确定了调控蛋白MphR化学信号域可以识别苯酚,邻甲酚,间甲酚,邻氯苯酚等酚类衍生物。大肠杆菌中逐段截短MphR化学信号域试验证实,当化学信号域截短后,MphR受苯酚诱导激活转录的功能丧失。结果表明,化学信号域对于苯酚激活转录功能极为重要。