栉孔扇贝酸性α-醋酸萘酯酶的组织化学研究

采用酶组织化学方法对栉孔扇贝 (Chlamysfarreri)各主要器官组织中的酸性α 醋酸萘酯酶 (ANAE)进行了定性定位研究。结果表明 ,栉孔扇贝的大部分器官 ,包括 :外套膜、鳃、唇瓣、口唇、胃、肠、直肠、肝脏、肾脏、生殖腺、心脏和闭壳肌 ,其上皮组织和大血窦多呈很强的ANAE阳性 (++++) ;血细胞呈ANAE强阳性 (+++) ;结缔组织和肌纤维呈ANAE较强阳性 (++)或弱阳性 (+) ;肝脏肝小叶呈较强的ANAE阳性 ;肾脏肾小管呈ANAE强阳性 ,生殖腺滤泡呈很强的ANAE阳性。

血清酸性α-醋酸萘酯酶的比色测定及初步临床应用

目的 建立比色测定血清酸性α 醋酸萘酯酶总活性的方法。方法 用α 醋酸萘酯为底物 ,在 37℃、pH6 .2的酸性环境中经酶水解产生α 萘酚 ,然后与重氮试剂固蓝B偶联反应显色测定。结果 最适pH 6 .0～ 6 .4 ,底物浓度为 2mmol/L ,吸收峰波长为 5 2 0nm ,线性范围 0～ 2 5 0 0U/L ,酶促反应时间为 2 0min ,显色反应时间为 2 0min ,显色稳定时间为 2 0min ,批内、批间变异系数分别为 2 .6 7%和 5 .1 %。血红蛋白 1g/L和胆红素 1 72 μmol/L无干扰。枸橼酸钠、草酸盐、肝素、EDTA K2 常用浓度无抑制 ,氟化钠可抑制该酶活性。标本 2～ 8℃冰箱保存 7d结果无变化。正常参考值 (n =1 0 0 )为 (1 6 4 5± 378.5 )U/L( x± 1 .96s)。结论 该方法简便实用 ,适于各级实验室开展 ,可作为评价肝细胞变性坏死、肝纤维化。

血清α-醋酸萘酯酶同工酶琼脂糖凝胶电泳法及临床应用

为简化α－醋酸萘酯酶同工酶检查技术，建立琼脂糖凝胶电泳法。１０ｇ／Ｌ琼脂糖－ＰＶＰ和ｐＨ７．４０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液，泳池ｐＨ８．６，μ＝０．０６巴比妥缓冲液，滤纸刺槽加样，电压１５０Ｖ，电流２ｍＡ／ｃｍ电泳４０ｍｉｎ，搭桥填充染色。染色液由α－醋酸萘酯ｐＨ６．２０．１ｍｏｌ／ＬＰＢ液和固蓝Ｂ盐组成，３７℃染色２０ｍｉｎ，醋酸漂洗比色。结果对照组（ｎ＝３０）α－ＡＮＥ同工酶谱带３～４条（Ｅ１、Ｅ１ａ、Ｅ２、Ｅ３）着色强度Ｅ３＞Ｅ１＞Ｅ１ａ＞Ｅ２，ｘＥ３占８８％，Ｅ１～Ｅ２１２％左右，相对电泳位置Ｅ１：ｐｒｅＡｌ／Ａｌ，Ｅ１ａ：Ａｌ／α１，Ｅ２：ｐｒｅ－α２，Ｅ３：α２／β，Ｒｆ分别为０．５４５、０．５２７、０．４３６、０．３６４。Ｅ３区组成复杂，用ＮＡＮＡ酶水解和ＷＧＡ亲加试验证明它富含ＳＡ和ＧｌｃＮＡＣ的一组不均一的糖蛋白。谱形异常的典型病例有Ⅰ型在症糖尿病和部分肝癌患者，它除有正常谱带外，前者多Ｅ４和Ｅ５，其色度比（％）Ｅ４０．１１４，Ｅ５０．１９８，相对电泳位置在β和β与Ｐｒｅ－γ之间，Ｒｆ＝０．２５４，０．１８２。肝癌病人谱带也多１～２条（Ｅ５和Ｅ６）位于Ａ／ｐｒｅ－γ和ｐｒｅ－γ，?

用酸性α-醋酸萘酯酶染色法测定儿童外周血T淋巴细胞

T淋巴细胞是机体的主要免疫活性细胞,执行特异细胞免疫和免疫调节功能:在监测环境毒物对人群免疫功能影响方面最常见的是儿童唾液溶菌酶的测定,而用酸性α-醋酸萘酯酶(简称AN AE)染色法测定T淋巴细胞数尚鲜见报导。为此测定了99例健康儿童外周血T淋巴细胞,结果可为免疫毒性监测提供正常参考值。

青年人外周血淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶反应类型及其正常值的探讨兼测气温对反应类型的影响

用酸性α-醋酸萘酯酶(Acid α-naphtylacetateesterase-ANAE)反应检测58例青年人外周血淋巴细胞总阳性率为76.0%,并按5种类型统计分析,其中1—3个园点状颗粒型为47.8%,4个以上园点状颗粒型为17.1%,散在细小颗粒型为2.7%,单核样弥散型为5.6%,大小不等颗粒型为2.3%。同时观察了32名同一群体在气温差别较大的生活条件下对ANAE反应类型的影响,未见有意义的差异。术文与生后1天和30天新生儿以及临产妇外周血淋巴细胞ANAE反应类型作了比较,发现本分型能较好地反映淋巴细胞ANAE反应类型的动态变化。

HBV-STF对小白鼠T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶的影响

报道在小白鼠腹腔注射HBV STF ,然后检测小白鼠T淋巴细胞酸性α 醋酸萘酯酶(ANAE) ,结果显示 :实验组小白鼠T淋巴细胞ANAE阳性率显著高于对照组 ,表明HBV STF能够显著提高小白鼠T淋巴细胞的免疫功能。

几种化学物质对小鼠外周血酸性α-醋酸萘酯酶阳性淋巴细胞的影响

很多外源性化学物质对T淋巴细胞数会产生一定的影响。鉴别T、B淋巴细胞的方法很多,主是根据膜的特性如用玫瑰花形成试验、免疫萤光染色等方法,也可借助扫描电镜将T、B淋巴细胞区别开来,以上方法操作繁杂,必须具备一定的条件,因此在应用上受到一定限制。1975年,Mueller首先发现酸性α-醋酸萘酯酶(Acid α-naphthylacetate esterse,ANAE)能特异地标记小鼠T淋巴细胞,在光学显微镜下即可鉴别T。

α-醋酸萘酯酶正常值及在铅汞接触者的应用价值

鉴别T、B淋巴细胞主要根据膜的特性,如玫瑰花形成试验、免疫荧光染色、电镜扫描等方法,这些方法操作繁琐且须具备一定条件,大面积的普查体检尤其受到限制。1975年Mueller提出酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)能特异地标记T淋巴细胞。

不同海拔地区人群外周血淋巴细胞α-醋酸萘酯酶反应阳性率的研究

目的和方法 :α-醋酸萘酯酶 ( ANAE)反应标记 T淋巴细胞活性的细胞化学方法 ,对成都地区 (海拔 50 0 m) ;循化地区 (海拔 190 0 m) ;玉树地区 (海拔 380 0 m)三个不同海拔地区健康人群的外周血淋巴细胞总阳性率及其亚型进行了测定。结果 :移居高海拔地区人群的外周血 T淋巴细胞总阳性率及点状颗粒型淋巴细胞的阳性率明显低于平原地区人群 ( P<0 .0 1)。而弥散颗粒型淋巴细胞阳性率却高于平原地区人群 ( P<0 .0 5)。结论

酸性α-醋酸萘酯酶染色法的改良

通过对酸性α-醋酸萘酯酶染色过程中的几个重要因素进行研究,确定了其最佳处理条件,并探讨了几个因素间的相互作用。结果表明,固定液用2.5%戊二醛的效果要优于甲醛-丙酮混合液;用pH值5.8～6.2的孵育液孵育1.5h,甲基绿复染1～10s效果最佳。变化各因素的处理条件对最终的观测效果和结果都有影响,其中以甲基绿复染时间过长影响最大。同时,该染色法应用于贵妃鸡的T淋巴细胞计数中,4次重复的结果表明,贵妃鸡酸性α-醋酸萘酯酶阳性细胞率为37.86±1.89%,各重复间差异不显著。

冷浴对小鼠淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶活性的影响

目的：探讨冰点前０～４°С低温水对机体免疫功能的影响，观察小鼠在该温度冷浴前后外周血Ｔ细胞α－醋酸萘酯酶（ＡＮＡＥ）活性变化情况。方法：将小鼠２０只随机分为观察组和对照组。在０～４°С和２５°С低温水中分别浸浴２分钟，浸浴后于１，５，２４小时采集小鼠外周血，用ＡＮＡＥ染色法测定各时相ＡＮＡＥ阳性率。结果：冷浴后１及５小时ＡＮＡＥ阳性率与浴前差异无显著性（Ｐ＞０．０５），冷浴后２４小时ＡＮＡＥ阳性率明显增高（Ｐ＜０．００１），对照组各时相ＡＮＡＥ活性无显著变化。结论：实验提示０～４°С适宜时间的冷水浴，可激发小鼠机体免疫功能。据此推测，经过一定周期冷浴训练的小鼠可能会明显提高非特异性免疫功能水平。

血液酸性α-醋酸萘酯酶染色方法改进

1 方法用酸性α-醋酸萘酯酶法(简称ANAE法)检测血液中的T淋巴细胞及其亚群,以观察机体的细胞免疫功能,已广泛用于组织学中的细胞化学及相关的动物实验中.由于α-醋酸萘酯酶易受时间、温度及pH值等多种因素的影响,故作者在常规染色的基础上,对几个主要步骤进行了改进,效果较好.其方法是:(1)取末梢血制成涂片,室温干燥;(2)于4℃甲醛-丙酮固定液(pH6.0)固定45s;

青海撒拉族人外周血淋巴细胞A——醋酸萘酯酶反应阳性率及其亚群的观察

应用α-醋酸萘脂酶反应标记法,对94例青海撒拉族健康人的外周血淋巴细胞阳性率进行了研究.结果:α-醋酸萘酯酶反应者为T淋巴细胞.阳性率为75.15±5.22%,T淋巴细胞的亚群:“点状颗粒型”淋巴细胞为61.75±7.29%:“弥散颗粒型”淋巴细胞为13.08±3.39%。同时发现α-醋酸萘酯酶反应阳性淋巴细胞随年龄增长而发生变化.

肝硬化患者血清和腹水中酸性α-醋酸萘酯酶的含量

目的 :探讨肝硬化患者血清、腹水酸性α 醋酸萘酯酶 (ANAE)的含量与肝硬化肝功能Child pugh分级的关系。方法 :比色法测定肝硬化患者血清、腹水ANAE含量。结果 :肝硬化患者血清、腹水ANAE含量较对照组明显降低 ,其中肝硬化肝功能ChildB级以后血清、腹水ANAE含量下降明显。血清、腹水ANAE含量相关性显著。结论 :肝硬化患者血清、腹水ANAE含量 。

维吾尔族百岁老人外周血淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶活性的观察

作者对新疆维吾尔族百岁老人(100～112岁)、老年前期、(50～60岁)青年(20～25岁)外周血的淋巴细胞酸性α-醋酸蒂酯酶(ANAE)活性进行了测定。结果表明:百岁老人组淋巴细胞ANAE阳性率为60.70±11.05％,其中斑点型为30.30±9.29％,弥散型为30.41±9.91%;阳性率与青年组相比,该酶在淋巴细胞中的总均值较低,有高度显著性差异(P<0.01);与老年前期组相比,阳性率与酶分布类型无显著性差异(P>0.05),说明百岁老人组的细胞免疫功能与老年前期组相比,无明显衰退。

双峰驼外周血细胞的形态结构及酸性α－醋酸萘酯酶反应

应用光镜、电镜和酸性α－醋酸萘酯酶（ＡＮＡＥ）反应，对双峰驼外周血细胞的形态结构和淋巴细胞分类进行了观测研究，并与其他动物进行比较。结果表明，双峰驼红细胞为无核的椭圆形，大小７～８×３～４．５μｍ；嗜中粒细胞的特殊颗粒细小，光镜下不易辨认，电镜下为体积小的椭圆或亚铃状而与嗜天育颗粒区别，母驼有明显的Ｂａｒｒ小体；嗜酸粒细胞内充满亮桔红色的大颗粒，颗粒具有长杆状结晶体；嗜碱粒细胞数量极少，大小不等的嗜碱性颗粒常遮蔽细胞核，淋巴细胞中主要是小淋巴细胞，核缺刻侧有时可见数个粗大的圆形嗜天青颗粒，７５％～８０％的淋巴细胞为ＡＮＡＥ阳性。

Ⅰ型糖尿病血清α-醋酸萘酯酶同工酶出现变异谱带的初步分析

目的 :探讨血清α-醋酸萘酯酶 (α-ANE)及其同工酶在不同类型糖尿病的实用价值。方法 :采用琼脂糖凝胶电泳法分离α-ANE同工酶。结果 : 型糖尿病和胰腺炎 ,谱形基本正常 ; 型糖尿病谱形异常 ,多分离出 1～ 2条慢速的谱带 ,分别 E4和E5 ,并按其比例和色度 ,可分为 3种表现型 E4( )、E5 ( )、E4+ E5 ( ) ,相对迁移率为 0 .2 5 4和 0 .182。相对电泳位置 :β和β/pre-γ之间。结论 :E4和 E5带经过神经胺酸酶处理证明属脱 SA带 ,初步认定 E4带可能是 型糖尿病患者的一种特殊酶学特征 ,E5带在部分肝癌患者也有发现。

酸性α-醋酸萘酯酶染色法在鳜细胞免疫水平检测中的应用研究

研究了酸性α-醋酸萘酯酶染色法在鳜细胞免疫水平检测中应用的可行性。用不同比重的淋巴细胞分离液对鳜外周血中的淋巴细胞进行分离，结果表明比重为1．080的分离液可最大程度地将鳜外周血中的淋巴细胞分离出来。用酸性α-醋酸萘酯酶染色法对分离出的淋巴细胞进行染色，结果显示最佳的染色条件为在pH6．0～6．5的孵育液中37℃孵育90min，然后2％甲基绿37℃复染10min，酸性α-醋酸萘酯酶阳性细胞胞核被染成绿色而胞浆被染成红色，阴性细胞胞核和胞浆都被绿染。对正常未免疫鳜与嗜水气单胞菌脂多糖和鳜病毒主要衣壳蛋白免疫一周后的鳜外周血淋巴细胞染色计数，结果酸性α-醋酸萘酯酶阳性细胞所占的比例分别为15％～18％、33％～40％和26％～29％，方差分析表明免疫组与对照组阳性率差异极显著，说明α-醋酸萘酯酶染色法可用于鳜细胞免疫水平的检测。

血清α-醋酸萘酯酶在160例肝病中的诊断意义

目的探讨血清α-醋酸萘酯酶(α-ANE)对肝病的诊断、动态监测和预后评估及临床应用价值。方法应用偶氮比色法对160例肝病组和40例对照组进行血清α-ANE测定。结果对照组血清α-ANE为(1625±275)u/L,肝病组中急性肝炎患者血清α-ANE为(1315±280)u/L;慢性肝炎患者血清α-ANE为(1250±235)u/L;肝硬化患者血清α-ANE为(714±201)u/L;肝癌患者血清α-ANE为(950±162)u/L。结论约92%肝病患者血清α-ANE活性有不同程度降低,肝硬化患者最为突出。血清α-ANE活性变化可作为肝实质细胞功能和损伤程度的一项新的酶学指标,且该酶与AST/ALT、蛋白联合检查有助于慢性肝硬化的鉴别诊断,血清α-ANE测定对肝炎的治疗、动态监测及预后评估有重要意义。

112名健康学龄前儿童T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶活性测定

所测112名健康学龄前儿童ANAE阳性率平均值为58．39±4．66(ˉX±SE)，男女之间差异无显著性。同时对43例健康学龄前儿童进行Ea花结试验，平均值为39．98±7．47(ˉX±SE)，与ANAE阳性率比较，差异非常显著。