精胺氧化酶靶向调控硫氧还蛋白还原酶1促进结肠癌恶性进展

目的探讨精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)靶向调控硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TR1)对结肠癌恶性进展的影响。方法收集2018年9月至2019年6月就诊于南京市第一医院的30例结肠癌患者的结肠癌组织及其癌旁组织。采用免疫组织化学染色检测组织中的SMOX表达。采用Western blot实验检测结肠癌细胞株(HCT116、SW480、DLD-1、SW620、Caco-2、HCT-15、T84和LS123)和正常结肠细胞株NCM460的SMOX表达。利用基因表达谱互作分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)网站查询SMOX在结肠癌组织与癌旁组织中的表达情况和SMOX表达水平与患者总生存的关系。采用Western blot实验检测上述细胞和组织中代谢产物亚精胺合成酶的水平。利用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)结合流式细胞术和组织免疫荧光实验分别检测结肠细胞和组织中代谢副产物活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。选取SMOX表达水平最高的结肠癌细胞株HCT116和SW480为实验对象,构建慢病毒载体,用PLKO.1-puro-shCtrl、PLKO.1-puro-shSMOX、PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1和PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1-TR1分别转染细胞,分别为shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组。Western blot实验检测HCT116和SW480细胞shCtrl组和shSMOX组SMOX与TR1的表达情况,以及HCT116细胞shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的TR1表达水平。利用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力。碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染结合流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化。PI/异硫氰酸荧光素-膜连蛋白(PI/fluorescein isothiocyanate-Annexin V,PI/FITC-Annexin V)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡/坏死情况。Transwell体外侵袭实验分析细胞侵袭能力。shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的HCT116细胞稀释至浓度为1×107个/mL的细胞悬液分别向裸鼠右侧腋窝皮下注射0.2 mL细胞悬液,建立裸鼠结肠癌移植瘤模型。4周后处死裸鼠,分离组织,剥取肿瘤称重。运用免疫组织化学染色检测裸鼠结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数。结果SMOX在8种结肠癌细胞株和结肠癌组织中的表达水平均高于正常结肠细胞株和癌旁组织,且与不良预后有关(均P<0.05)。与正常结肠细胞和癌旁组织比较,8种结肠癌细胞和结肠癌组织中的代谢产物亚精胺合成酶和ROS水平随SMOX的高表达同步升高(均P<0.05)。与shCtrl组比较,shSMOX组G_(0)/G_(1)期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目增加,细胞增殖活性降低,侵袭数量减少,SMOX和TR1表达水平降低(均P<0.05)。与shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组比较,shSMOX+TR1组TR1表达水平升高,S期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目减少,细胞增殖活性升高(均P<0.05)。裸鼠结肠癌移植瘤模型显示,注射后14 d,与shCtrl组比较,shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组肿瘤体积和重量均降低,结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数减少,而shSMOX+TR1组肿瘤体积、重量和结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数则较shSMOX+pcDNA3.1组增加(均P<0.05)。结论SMOX在结肠癌细胞和组织中表达上调,可能通过靶向提高TR1的表达促进细胞周期运转,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长,进而促进结肠癌恶性进展。

T2DM患者血清过氧化还原酶1水平与抑郁症状及主观应激间的关系

目的:分析血清过氧化还原酶1(PRDX1)水平与2型糖尿病(T2DM)患者抑郁症状及主观应激的相关性。方法:选择2019年7月至2021年12月陕西省榆林市第二医院的256例T2DM患者,根据抑郁—焦虑—压力量表-21(DASS-21)抑郁评分将患者分为抑郁症状组(n=56)及无抑郁症状组(n=200)。采用酶联免疫吸附法检测血清PRDX1水平。根据DASS-21评估患者心理状态。采用压力知觉量表(PSS)评估患者的主观应激程度。结果:根据DASS-21评分,抑郁症状组中血清PRDX1水平显著高于无抑郁症状组的患者(P<0.05);所有T2DM患者血清PRDX1水平为(12.98±3.70)ng/mL,且血清PRDX1水平与DASS-21抑郁评分和压力评分均呈正相关关系(P<0.05);经受试者工作特征曲线分析,血清PRDX1水平诊断T2DM合并抑郁症状的曲线下面积为0.767(95%CI:0.699~0.835),灵敏性、特异性分别为87.5%、68.5%;经Pearson相关性分析和校正多种干扰因素的多元线性回归分析,血清PRDX1水平与有抑郁症状的T2DM患者PSS评分呈正相关关系(P<0.001),但与无抑郁症状的患者PSS评分无相关关系(r=0.076,P=0.283)。此外,对于有抑郁症状的T2DM患者,血清PRDX1水平与IL-6、TNF-α水平亦呈正相关关系(P<0.001)。结论:血清PRDX1水平对诊断T2DM患者是否合并抑郁症有良好的效能,且对于出现抑郁症状的T2DM患者,血清PRDX1水平持续增加与患者机体低度炎症反应以及主观应激程度有关。

血清NQO1、CRP/ApoA1、sRAGE与原发性高血压患者冠状动脉病变的相关性

目的 探究血清醌氧化还原酶(NQO1)、C反应蛋白与载脂蛋白A1比值(CRP/ApoA1)及可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)与原发性高血压患者冠状动脉病变的相关性。方法 分析2021年6月至2022年12月期间广东药科大学附属第一医院就诊的原发性高血压患者资料122例。根据合并冠状动脉病变与否分为单纯高血压组(77例)和冠状动脉病变组(45例),并根据Gensini评分将冠状动脉病变组患者分为轻度组(14例),中度组(18例),重度组(13例)。比较两组患者血清NQO1、CRP/ApoA1、sRAGE水平差异;Pearson相关性检验分析NQO1、CRP/ApoA1、sRAGE与Gensini评分的关系;多因素Logistic回归模型分析高血压患者并发冠状动脉病变的影响因素。结果 病变组患者吸烟、合并糖尿病占比高于单纯高血压组(χ^(2)=22.215、9.872,P<0.05);病变组患者高血压病程、收缩压、舒张压、血清CRP、CRP/ApoA1均高于单纯高血压组(t=7.539、6.192、10.923、24.049、17.362,P<0.05);病变组患者NQO1、sRAGE低于单纯高血压组(t=11.530、6.746,P<0.05);Pearson分析显示血清NQO1、sRAGE与Gensini评分负相关(P<0.001),CRP/ApoA1则与Gensini评分呈正相关(P<0.001),多因素Logistic回归分析显示患者收缩压、舒张压、糖尿病史、血清CRP、ApoA1、NQO1、CRP/ApoA1、sRAGE均是其并发冠状动脉病变的影响因素(P<0.05)。结论 原发性高血压患者合并冠状动脉病变其血清NQO1、sRAGE水平与病变程度负相关,CRP/ApoA1与病变程度正相关,可作为高血压患者冠状动脉病变预测指标。

淫羊藿苷对哮喘大鼠醌氧化还原酶1及谷胱甘肽还原酶表达及氧化应激的影响

目的探讨淫羊藿苷对哮喘大鼠醌氧化还原酶1(NQO1)及谷胱甘肽还原酶(GR)表达及氧化应激的影响。方法选取40只健康雌性Wistar大鼠,随机将其分为正常组、模型组、布地奈德组及淫羊藿苷组,每组10只。除正常组外,其余组大鼠采用卵蛋白溶液造成慢性大鼠哮喘模型。实验期间正常组及模型组每天灌胃生理盐水,淫羊藿苷组每天灌胃淫羊藿苷120 mL/kg,布地奈德组致敏2周后在卵蛋白溶液雾化吸入后给予布地奈德吸入。于末次激发后24 h内处死各组(正常组同期处死)大鼠并取出右肺组织,以ELISA方法检测各组氧化因子活性氧(ROS)表达水平,采用RT-PCR法检测各组GR mRNA表达水平,采用Westernblot方法检测各组NQO1蛋白表达水平。结果模型组大鼠肺组织中ROS表达水平明显高于正常组(P<0.05),GR mRNA及NQO1蛋白表达水平均明显低于正常组(P均<0.05)。淫羊藿苷组及布地奈德组大鼠肺组织中ROS表达水平均明显低于模型组(P均<0.05),GR mRNA及NQO1蛋白表达水平均明显高于模型组(P均<0.05),淫羊藿苷组与布地奈德组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论淫羊藿苷可上调哮喘大鼠GR mRNA及NQO1蛋白的表达,减轻哮喘大鼠氧化应激反应。

抗氧化剂和低氧诱导醌氧化还原酶1基因的表达及其机制

目的 探讨低氧和抗氧化剂诱导醌氧化还原酶1(NQO1 )基因表达及其与细胞增殖的关系和诱导表达的调节机制。方法 人肝癌细胞SMMC 772 1经抗氧化剂[酪醇(p Ty) ,丁基羟茴香醚(BHA) ,β萘黄酮(βNF) ]、低氧或两者共同处理2 4h ,分别采用微孔板测定法、RT PCR、结晶紫显色法、电泳迁移率变动试验(EMSA)测定MQO1 活力,NQO1 mRNA表达,细胞增殖和细胞核蛋白与抗氧化反应元件(ARE)的结合情况。结果 常氧下BHA ,βNF和p Ty均能诱导NQO1 比活力增加,酪醇诱导NQO1 mRNA表达呈剂量依赖性增加,且与酶比活力存在明显的相关性;酪醇在一定范围内,其抑制细胞增殖的能力呈剂量依赖性,且细胞增殖与酶比活力存在负相关。低氧与抗氧化剂共同处理比常氧下抗氧化剂诱导NQO1 比活力有增加(r=-0 41,P <0 0 1)。EMSA试验表明,ARE能与低氧、抗氧化剂或低氧+抗氧化剂诱导的核蛋白特异结合。结论 抗氧化剂在常氧下可诱导人肝癌细胞NQO1 活力增加,低氧加强其诱导能力。其中酪醇诱导NQO1 活力与NQO1 mRNA表达量增加相关,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活力诱导增加有关。ARE参与介导抗氧化剂和低氧诱导NQO1 基因表达的调节。

醌氧化还原酶1抑制剂双香豆素促进HBV X蛋白降解进而抑制cccDNA转录的机制研究

【据Journal of Hepatology2021年3月报道】题:醌氧化还原酶1抑制剂双香豆素促进HBV X蛋白降解进而抑制ccc DNA转录的机制研究(作者Cheng ST等)HBV ccc DNA在肝细胞核内持续稳定的存在,被认为是HBV感染慢性化、抗病毒治疗无法彻底清除以及停药后肝炎复发的最主要原因。HBV X蛋白(HBx)对HBV ccc DNA的转录过程发挥关键作用;促进HBx降解,则可能抑制ccc DNA转录。因此,开发靶向HBx的小分子化合物是达到"ccc DNA沉默清除"这一重要目标的可能途径。

维生素K环氧化物还原酶复合物亚基1基因多态性与冠心病、脑卒中相关性进展

维生素K环氧化物还原酶复合物亚基1(VKORC1)通过影响维生素K依赖的凝血因子和非凝血因子的羧化,从而影响血栓的易感性以及大动脉壁的钙化。血栓和动脉硬化直接导致血管性疾病如冠心病、脑卒中。国内外关于VKORC1与冠心病、脑卒中关系的临床研究存在分歧。本文就VKORC1与冠心病、脑卒中关系的研究进展作一综述。

整合素连接激酶、醌氧化还原酶-1和增殖细胞核抗原在肝细胞癌中的表达及意义

目的检测肝细胞癌术后组织中整合素连接激酶(ILK)、NADPH:醌氧化还原酶(NQO)-1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,关注三者的关系及临床意义。方法 79例肝细胞癌术后组织及临床资料作为观察组,55例正常肝组织作为对照组,采用免疫组化方法检测两组中ILK、NQO-1和PCNA的表达。结果肝细胞癌中ILK、NQO-1和PCNA表达阳性率明显高于对照组,观察组中ILK、NQO-1和PCNA的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、肿瘤最大径及Ki67的表达密切相关。相关性分析显示ILK和PCNA、NQO-1和PCNA的表达均具有正相关性。观察组中ILK、NQO-1和PCNA高表达患者生存时间明显短于低表达患者。结论肝细胞癌中ILK、NQO-1和PCNA高表达,对病变的进展有重要影响,术后联合检测ILK、NQO-1和PCNA的表达可能对判断生物学行为和生存时间有一定价值。ILK、NQO-1对PCNA表达的增殖有直接关系,这可能是两种蛋白的作用机制。

褪黑素通过上调泛醌―细胞色素C还原酶核心蛋白1抑制MPP^(+)诱导的MN9D细胞凋亡和线粒体损伤

目的探讨褪黑素(melatonin,MT)在1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP^(+))诱导的帕金森病体外模型中的作用及分子机制。方法将MN9D细胞分为对照组、MPP^(+)组、MT组、治疗组。采用细胞计数试剂盒8检测MT和MPP^(+)对细胞活力的影响;采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)评价线粒体功能;Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡;通过免疫荧光蛋白质印迹法(Western blotting)检测凋亡相关蛋白[Cleaved-Caspase 3和细胞色素C(cytochrome C,CytC)]以及泛醌―细胞色素C还原酶核心蛋白1(ubiquinol-cytochrome C reductase core protein 1,UQCRC1)蛋白的表达;采用干扰RNA技术沉默MN9D细胞中UQCRC1的表达,然后采用Western blotting检测凋亡相关蛋白表达。结果MT可以减轻MPP^(+)诱导的细胞活力下降(P<0.05);恢复MPP^(+)造成的线粒体膜电位下降(P<0.05);减少MPP^(+)诱导的凋亡细胞数量(P<0.05);抑制凋亡蛋白(CytC和Cleaved-Caspase3)的表达(P<0.05);上调UQCRC1的表达(P<0.05)。沉默UQCRC1后,MT组和治疗组的UQCRC1表达均下降(P<0.05);MT对MPP^(+)诱导细胞凋亡的保护作用下降(P<0.05);凋亡蛋白(CytC和Cleaved-Caspase3)的表达增加(P<0.05)。结论MT对MPP^(+)诱导的多巴胺能神经元损伤具有保护作用,其机制可能是通过上调UQCRC1抑制神经元凋亡。

姜黄素通过下调HO-1/NQO1保护肝癌模型小鼠

目的:观察姜黄素对N-亚硝基二乙胺(DEN)联合四氯化碳(CCl4)诱导的C57BL/6J小鼠肝癌模型的作用并探索其机制。方法:取14日龄雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射DEN(25 mg/kg),随机分成模型组和姜黄素(100、200和400 mg/kg)给药组,另取同龄雄性小鼠10只作为正常对照组。模型组和姜黄素给药组从第8周开始灌胃给予10%CCl4(5 mL/kg),每周2次;同时,给药组开始灌胃姜黄素,正常对照组灌胃等体积的蒸馏水,每天1次,连续14周。给药结束后处死小鼠,检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性,观察肝组织病理学变化,检测血红素加氧酶1(HO-1)和NAD(P)H-醌氧化还原酶1(NQO1)的mRNA表达水平,以及HO-1、NQO1和Ki67蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠体重显著降低(P<0.01),肝脏指数显著增加(P<0.01),血清ALT和AST活性显著升高(P<0.01),HO-1和NQO1的mRNA表达水平无显著差异(P>0.05),HO-1和NQO1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),Ki67阳性表达率显著增加(P<0.05)。姜黄素治疗后,小鼠体重显著升高(P<0.01),肝脏指数无明显变化(P>0.05),癌结节数量显著减少(P<0.05或P<0.01),血清AST活性显著降低(P<0.01),HO-1和NQO1的mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),Ki67阳性表达率显著降低(P<0.05)。结论:姜黄素对DEN联合CCl4诱导的肝癌模型C57BL/6J小鼠具有显著保护作用,其机制与抑制HO-1和NQO1表达有关。

NAD(P)H:醌氧化还原酶1对多巴胺能细胞的保护作用

目的:研究多巴胺(DA)对多巴胺能细胞的毒性作用、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)的保护作用及其机制。方法:运用MTT法检测多巴胺对神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)活性的影响;运用脂质体转染或Ⅱ相酶诱导剂预处理的方法对细胞进行预处理,并用免疫荧光方法检测转染效率;运用蛋白质印迹(Western blotting)方法检测细胞经过不同处理后胞内NQO1蛋白的表达情况;运用醌蛋白检测方法(硝基四氮唑蓝/甘氨酸法)检测细胞经不同处理后胞内醌化蛋白含量的变化。结果:多巴胺对细胞具有剂量依赖性毒性,且与细胞内醌化蛋白的含量相关;脂质体转染和Ⅱ相酶诱导剂萝卜硫素(SF)均能使细胞内NQO1表达量增高;NQO1高表达能缓解多巴胺对细胞造成的毒性;细胞内NQO1表达量增高能减少多巴胺引起的细胞内醌化蛋白含量。结论:细胞内NQO1的过表达可以减轻多巴胺对细胞产生的毒性作用。

乙型肝炎相关性肝细胞癌患者组织NQO1表达水平对预后的影响

目的研究乙型肝炎相关性肝细胞癌(HBV-HCC)患者组织醌氧化还原酶-1(NQO1)表达水平对预后的影响。方法选取2019年3月至2020年1月于上海中医药大学附属第七人民医院行手术治疗的103例HBV-HCC患者,术中取癌组织与癌旁组织备用;采用免疫组织化学染色法检测NQO1在组织中的表达情况。收集患者临床病理资料,比较NQO1高表达、低表达与患者病理特征的关系。对患者行3年随访,绘制Kaplan-Meier生存曲线,对中位生存时间行Log-rank检验;采用COX模型分析影响患者预后的危险因素。结果NQO1在HBV-HCC组织中阳性率为84.47%(87/103),高表达率为59.22%(61/103);HBV-HCC组织中NQO1阳性率、高表达率高于癌旁组织(P<0.05)。NQO1高表达与低表达患者肿瘤最大径、病灶数量、美国癌症联合委员会(AJCC)分期、血管侵犯比较差异有统计学意义(P<0.05)。3年随访结果显示,患者中位生存时间为37个月,无失访病例;103例患者中死亡34例,总生存率为66.99%(69/103),复发42例,无复发生存率为59.23%(61/103)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,NQO1高表达组总生存率[52.46%(32/61)]与无复发生存率[50.82%(31/61)]低于NQO1低表达组[88.10%(37/42)、71.43%(30/42)](P<0.05)。COX模型分析结果显示,NQO1高表达、肿瘤最大径≥5 cm、病灶多发、AJCC分期为Ⅲ~Ⅳ期、血管侵犯是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论NQO1在HBV-HCC组织中高表达,与患者临床病理特征有关,可作为评估预后的独立生物标志物。

核因子E2相关因子2-醌氧化还原酶1抑制ferroptosis缓解肠缺血再灌注诱导的急性肺损伤

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)-酯氧化还原酶1(NQO1)对肠缺血再灌注所致急性肺损伤保护作用的机制。方法将32只健康的8周龄野生型(WT)C57BL/6雄性小鼠(简称WT小鼠)随机分为4组,即假手术组、模型组、模型+铁剂组(铁剂组)、模型+ferroptosis抑制剂组(ferroptosis抑制剂组),每组8只。假手术组暴露肠系膜上动脉,但不阻断;模型组用无创血管夹阻断肠系膜上动脉45 min,开放再灌注180 min,制备肠缺血再灌注肺损伤模型;铁剂组和ferroptosis抑制剂组在阻断肠系膜上动脉前经尾静脉分别注射柠檬酸铁15 mg/kg或ferroptosis抑制剂ferrostatin-15 mg/kg。另取Nrf2基因敲除小鼠(Nrf2-/-小鼠)32只,亦分为假手术组、模型组、铁剂组和ferroptosis抑制剂组,每组8只,各组处理方法与WT小鼠一致。各组于再灌注180 min后处死小鼠取其肺组织,称重后计算肺湿干比(W/D),分别采用Western印迹法和实时荧光定量PCR检测Nrf2、NQO1的蛋白质和mRNA表达。于光学显微镜下观察肺组织病理学表现。结果WT小鼠、Nrf2-/-小鼠模型组和铁剂组的肺组织W/D值和肺组织损伤病理学评分分别显著大于同种小鼠假手术组和ferroptosis抑制剂组(P值均<0.05),铁剂组的肺组织W/D值和肺组织损伤病理学评分分别显著大于同种小鼠模型组(P值均<0.05);Nrf2-/-小鼠模型组和铁剂组的肺组织W/D值和肺组织损伤病理学评分分别显著大于WT小鼠模型组和铁剂组(P值均<0.05)。WT小鼠模型组和铁剂组的肺组织Nrf2、NQO1蛋白质相对表达量和mRNA相对表达量均显著高于假手术组和ferroptosis抑制剂组(P值均<0.05),铁剂组的肺组织Nrf2、NQO1蛋白质相对表达量和mRNA相对表达量均显著高于模型组(P值均<0.05)。WT小鼠和Nrf2-/-小鼠模型组的肺组织NQO1蛋白质相对表达量分别显著高于同种小鼠假手术组(P值均<0.05),Nrf2-/-小鼠模型组的肺组织NQO1蛋白质相对表达量显著低于WT小鼠模型组(P<0.05)。结论Nrf2能够通过增加NQO1的表达有效抑制ferroptosis,减轻肠缺血再灌注所致的急性肺损伤。

中国云南汉族迟发性运动障碍与醌氧化还原酶1基因多态性的相关性研究

目的探讨醌氧化还原酶1[（NAD（P）H：quinone oxidoreductasel，NQ01]C609T基因多态性在精神分裂症迟发性运动障碍（tardive dyskinesia。TD）发病中的作用。方法采用病例一对照研究，运用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP）检测了233例精神分裂症患者（TD组55例和非TD组178例）NQ01C609T基因多态性。结果TD组中NQ01C609T位点CC，CT和TT基因型频率分别为45．5％，40．0％和14．5％；C和T等位基因频率分别为65．5％和34．5％。非TD组中CC，CT和TT基因型频率分别为36．0％，47．2％和16．8％；C和T等位基因频率分别为59．6％和40．4％。NQ01C609T基因型频率和等位基因频率在TD组与非TD组之间差异无统计学意义（x2=1．61，P=0．448；x2=1．23，P=0．267）。结论NQ01基因C609T位点在中国云南汉族人群中存在多态性，其基因多态性与中国云南汉族精神分裂症的迟发性运动障碍不存在关联，该基因多态性在迟发性运动障碍发病中的作用机制还有待进一步研究。

我国汉族华法令抗凝治疗患者维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1基因多态性的研究

目的探讨我国汉族口服华法令抗凝治疗患者维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1)-1639基因多态性的特点。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法检测184例口服华法令抗凝治疗患者VKORC1-1639基因的多态性。结果 184例口服华法令抗凝治疗患者VKORC1-1639基因AA、AG、GG型分别为152例(82.6%)、31例(16.9%)、1例(0.5%),等位基因G和A的频率分别为9.0%和91.0%。184例患者VKORC1-1639基因多态性Hardy-Weinberg平衡拟合度良好(χ2=0.19,P>0.05)。结论我国汉族口服华法令抗凝治疗患者中存在VKORC1-1639突变基因,其基因分布频率与欧洲等其他人群存在种族差异。使用华法令抗凝治疗时应检测患者的VKORC1-1639基因型,以便为临床个体化用药提供依据。

中药漏芦对口腔鳞癌细胞中转录因子Ets-1及过氧化物还原酶Prx1表达的影响

目的通过检测中药漏芦乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract,EA)对口腔鳞癌细胞株SCC15中转录因子Ets-1及过氧化物还原酶家族成员Prx1的表达水平的影响,初步探讨漏芦对口腔鳞癌细胞氧化应激作用的分子机制,为指导口腔癌临床用药提供新的思路。方法 50μg/ml漏芦EA处理口腔鳞癌细胞株SCC15 48h后,采用荧光定量PCR和Western Blot,检测药物处理组和对照组中Ets-1和Prx1的mRNA与蛋白表达情况。结果倒置显微镜下观察,50μg/ml漏芦EA处理SCC15细胞48h后,细胞生长速度较对照组减慢,细胞形态变圆,部分出现皱缩变圆甚至脱落。与对照组相比,药物处理组中Ets-1和Prx1的mRNA相对表达量显著降低(P=0.002,P=0.025),蛋白表达水平显著降低(P=0.030,P=0.042),差异有统计学意义。结论漏芦可能通过抑制氧化应激相关蛋白Ets-1和Prx1表达来抑制口腔癌细胞的生长。

泛醌细胞色素C还原酶核心蛋白1基因甲基化与阿尔茨海默病发病风险的相关性

目的探讨外周血中泛醌细胞色素C还原酶核心蛋白(UQCRC) 1基因启动子区甲基化与阿尔茨海默病(AD)发病风险的相关性。方法 AD患者(AD组) 50例,非AD患者(对照组) 55例,利用甲基化特异性PCR(MSP)检测两组外周血中UQCRC1基因甲基化水平。结果 UQCRC1基因在AD组和对照组发生甲基化率分别为64. 00%(32/50)和25. 45%(14/55),差异有统计学意义(P<0. 05)。在AD组中,按性别和年龄分层中,UQCRC1基因甲基化水平与性别无关,差异无统计学意义(P>0. 05);与年龄有关,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 UQCRC1基因启动子区甲基化与AD发病风险相关,通过检测外周血UQCRC1基因甲基化对AD的早期诊断具有一定的临床价值。

肠易激综合征患者血清中过氧化还原酶1和脑源性神经营养因子与抑郁和焦虑症状的相关性研究

目的探讨肠易激综合征(IBS)患者血清中过氧化还原酶1和脑源性神经营养因子与抑郁和焦虑症状的相关性研究。方法回顾性选择2020年2月至2021年3月上海中医药大学附属曙光医院消化科门诊收治的150例慢性腹泻患者。参考罗马Ⅳ标准将患者分为IBS 80例(IBS组),非IBS 70例(非IBS组);检测并比较两组患者的血清过氧化还原酶1(PRDX1)水平、脑源性神经营养因子(BDNF)水平及抑郁自评量表(SDS)和焦虑自评量表(SAS)的评分情况。结果IBS组患者的血清PRDX1水平为(13.47±4.26)ng/L,高于非IBS组[(8.56±2.21)ng/L],血清BDNF水平为(947.21±131.64)pg/mL,低于非IBS组[(1425.67±136.12)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。IBS组患者的SAS评分、SDS评分均高于非IBS组,差异有统计学意义(P<0.05);IBS患者血清PRDX1、BDNF水平与抑郁和焦虑症状间存在相关性(P<0.05)。采用Pearson进行相关性分析,结果发现,IBS患者PRDX1、BDNF水平与抑郁、焦虑症状呈相关性,与抑郁(r=0.276,P<0.001;r=0.322,P<0.001)、易怒(r=0.314,P<0.001;r=0.367,P<0.009)、惊恐(r=0.256,P<0.005;r=0.247,P<0.001)、焦虑(r=0.229,P<0.011;r=0.342,P<0.012)评分呈正相关。结论IBS患者血清PRDX1高表达及血清BDNF低表达,且与抑郁和焦虑症状存在相关性,PRDX1和BDNF可能成为IBS诊疗过程中的生物标志物和靶点。

丁酸梭菌1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT的克隆及在大肠杆菌中的表达

以丁酸梭菌(Clostridium butyricum)基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增得到1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT,将它连接到pMD 18-T载体上,得到重组质粒pMD-dhaT,对此重组质粒进行序列测定,对其DNA序列分析表明,dhaT基因全长为1 158 bp。将dhaT基因插入表达载体pSE-380中,构建成重组子pSE-dhaT,并在大肠杆菌JM109中进行诱导表达。研究表明,以1,3-丙二醇为底物时,基因工程菌在37℃下,以1.0 mmol/L IPTG诱导14h,酶活力达到16.28 U/mL,比原始菌株提高5.6倍。