小鼠醛糖还原酶相似基因同源蛋白表达研究

目的 检测小鼠ARL-1同源蛋白的表达情况,分析人醛糖还原酶相似基因(ARL-1)与小鼠ARL-1同源蛋白的同源性和遗传距离,从进化的角度讨论小鼠ARL-1同源蛋白与人ARL-1的亲缘关系。方法 利用OenBank和Swiss-Prot数据库,采用Clustal X 1.8软件分析人ARL-1与小鼠ARL-1同源蛋白的同源性,利用Mega 2.0软件分析人ARL-1与小鼠ARL-1同源蛋白的遗传距离,推测其进化关系;采用westernblot方法,运用抗ARL-1多克隆抗体分析小鼠多种组织ARL-1同源蛋白的表达情况。 结果 人ARL-1分别与小鼠中国仓鼠卵巢还原酶(CHO-Red)、成纤维细胞生长因子调节蛋白(FR-1)、鼠醛糖还原酶相似蛋白(rARLP)、小鼠输精管蛋白(MVDP)、鼠晶状体醛糖还原酶(LeAR)、δ4-3-5β酮甾类还原酶(5β-Red)、鼠醛酮还原酶蛋白C(RaK-c)、3α-18-羟甾类脱氢酶(3α-HSD)有83％、82％、81％、79％70％、51％、50％、45％的同源性。人ARL-1与小鼠CHO-Red的遗传距离最短(18.0％,P=0.023),其次是FR-1(19.1％,P=0.023)和rARLP(19.9％,P=0.025)。从进化树来看,人ARL-1与小鼠FR-1、rARLP、CHO-Red亲缘关系较近,其次是MVDP与LeAR。采用western blot在小鼠输精管,睾丸、膀胱、子宫检测到ARL-1同源蛋白。 结论 人ARL-1与小鼠CHO-Red、FR-1、rARLP、MVDP有较高的同源性、较?

高表达醛糖还原酶相似基因的HepG2单克隆细胞模型的建立

醛糖还原酶相似基因(aldose reductase-like gene,ARL-1)表达的增高与肝癌抗药性关系的研究是近年来发展的一个新课题.

醛糖还原酶相似基因-1与人肝癌细胞药物敏感性的关系及相关基因的筛选

目的探讨醛糖还原酶相似基因-1(ARL-1基因)与人肝癌细胞药物敏感性的关系,及相关基因的筛选。方法线性化的ARL-1表达载体DNA转染至人肝癌细胞系(HepG-2细胞)。含有活性醛基的表阿霉素、丝裂霉素作为实验用药,不含活性醛基的5-氟尿嘧啶作为阳性对照。采用MTT法和流式细胞仪研究ARL-1基因对肝癌细胞耐药性的影响,并运用cDNA芯片技术对相关基因进行筛选。结果ARL-1基因成功转染至人肝癌细胞HepG-2后,加入含有活性醛基的表阿霉素和丝裂霉素后,实验组的细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05),耐药水平明显高于对照组。加入不含活性醛基的5-氟尿嘧啶后,两组的细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。cDNA芯片分析发现实验组8种基因的表达水平明显上调,9种基因的表达水平明显降低,涉及细胞的蛋白质代谢、信号传导、转移、耐药性等方面。结论转染ARL-1基因后,人肝癌细胞的耐药水平明显升高,而且基因的表达谱发生改变。为系统研究肝癌细胞的耐药性及其机制提供了有用的线索。

醛糖还原酶相似基因-1与人肝癌细胞耐药性关系的实验研究

目的探讨醛糖还原酶相似基因-1(ARL-1基因)与人肝癌细胞耐药性的关系。方法线性化的ARL-1表达载体DNA转染至人肝癌细胞系(HepG-2细胞)作为实验组。含有活性醛基的表阿霉素、丝裂霉素作为实验用药,不含活性醛基的氟尿嘧啶作为阳性对照。通过乳酸脱氢酶(LDH)的测定、MTT法和流式细胞仪研究ARL-1基因在肝癌细胞耐药性形成中的作用。结果ARL-1基因成功转染至人肝癌细胞HepG-2,加入表阿霉素和丝裂霉素后,实验组的细胞毒性水平和细胞凋亡率明显低于对照组(P<0·05),耐药水平明显上升。加入氟尿嘧啶后,实验组及对照组的耐药水平无明显差异。结论高表达的ARL-1基因明显降低含有活性醛基化疗药物的细胞毒性和抑制其所诱导的细胞凋亡,增强人肝癌细胞的耐药性。

醛酮还原酶超家族的研究进展

醛糖还原酶是多元醇通路的限速酶,此酶的激活被认为与糖尿病慢性并发症有关。本文主要就醛糖还原酶的基本结构、代谢特点及醛糖还原酶类似蛋白酶1的最新研究进展与糖尿病慢性并发症的关系予以综述。

人类ARL-1重组蛋白特异性抗体的制备及鉴定

目的 制备ARL -1重组蛋白及其特异性抗体。方法 利用基因重组技术构建PQE -ARL -1原核表达载体 ,在M15大肠杆菌中进行表达 ,制备ARL -1重组蛋白 ,再将此蛋白免疫健康新西兰兔 ,制备ARL -1特异性抗体。结果 ARL -1在大肠杆菌中获得高效表达 ,经Ni+-NTA (次氮基三乙酸 )琼脂柱纯化 ,获得纯蛋白 ,将此蛋白免疫健康新西兰兔 ,制备出抗人ARL-1特异性抗体 ,经环状沉淀试验及双琼脂扩散试验检测出抗体效价达 1∶2 0 0 0 0。结论 人类ARL -1重组蛋白及其特异性抗体的制备 ,为进一步研究ARL -1在肝癌早期诊断中的作用 。

微阵列分析转染ARL-1基因后人肝癌细胞基因表达的差异

目的 分析转染醛糖还原酶相似基因 1(ARL 1)后 ,实验组人肝癌细胞与对照组细胞在基因表达谱方面的差异。 方法 以实验组及对照组细胞的总RNA反转录合成的cDNA为探针 ,与cDNA芯片 (cDNAchips)进行差异杂交 ,并应用半定量RT PCR对差异表达的重要的相关基因进行初步筛选。 结果 cDNA芯片分析发现 6种基因的表达水平明显上调 ,9种基因的表达水平明显降低 ,涉及细胞的蛋白质代谢、信号传导、转移和耐药性等方面。 结论 cDNA芯片分析发现 :转染醛糖还原酶相似基因 1后肝癌细胞的基因表达谱发生改变 ,为系统研究肝癌的耐药性及其机制提供了有益的线索。