人乙醛脱氢酶家族1成员A3调控胰腺癌细胞的侵袭能力

目的探讨人乙醛脱氢酶家族1成员A3(aldehyde dehydrogenase 1 family member A3,ALDH1A3)在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达情况,并研究其对胰腺癌侵袭的调控及可能的机制。方法利用癌症和肿瘤基因图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中胰腺癌患者数据集、基因组织表达项目(Genotype-Tissue Expression Project,GTEx)中正常胰腺组织基因表达谱数据和肿瘤细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)数据库中胰腺癌细胞系的基因表达谱矩阵,分析ALDH家族各亚型的表达情况;Transwell实验检测敲低ALDH1A3对胰腺癌细胞侵袭能力的影响;基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探讨ALDH1A3与JAK/STAT3通路活化的关系。结果 ALDH1A3在胰腺癌组织中的表达高于正常胰腺组织;在胰腺癌细胞系中的表达高于其他ALDH亚型;下调ALDH1A3可以降低胰腺癌细胞系的侵袭能力;JAK/STAT3通路在ALDH1A3高表达胰腺癌患者中显著富集;下调ALDH1A3可抑制STAT3的磷酸化。结论 ALDH1A3参与调控胰腺癌细胞的侵袭,其机制可能与JAK/STAT3通路的活化有关。

Alda-1通过激活线粒体乙醛脱氢酶2改善大鼠肺缺血再灌注损伤

目的:通过Alda-1激活线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)活性,探讨激活该酶对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用。方法:选择24只SD雄性大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和Alda-1+缺血再灌注组(Alda-1组)。实验结束取肺组织和动脉血标本,测各组肺组织的湿干重比(W/D)、HE染色观察肺泡结构;检测血浆及肺组织的丙二醛(MDA)含量、4-羟基壬烯醛(4-HNE)浓度;Western blot检测ALDH2的相对表达量及ELISA检测ALDH2的活性。结果:与Sham组相比,I/R组肺组织W/D值明显升高(P<0.05),肺泡结构明显破坏,血浆及肺组织的MDA、4-HNE明显增多(P<0.05),ALDH2的活性明显降低(P<0.05);与I/R组相比,Alda-1组肺组织W/D值显著下降(P<0.05),肺泡结构显著改善,血浆及肺组织的MDA、4-HNE显著减少(P<0.05),ALDH2的活性明显升高(P<0.05)。结论:Alda-1可通过激活ALDH2的活性来加速醛类物质代谢从而减轻肺缺血再灌注损伤。

乙醛脱氢酶家族18成员A1对结直肠癌预后的判断意义及其对骨髓细胞瘤原癌基因表达的影响

目的观察乙醛脱氢酶家族18成员A1[aldehyde dehydrogenase family 18 member A1,ALDH18A1,又称为吡咯啉-5-羧酸合成酶(pyrroline-5-carboxylate synthetase,P5CS)]在结直肠癌的表达及预后判断意义,探讨ALDH18A1与骨髓细胞瘤原癌基因(myelocytomatosis oncogene,MYC)的相关性及对其表达的影响。方法利用肿瘤基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)和基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO),比较ALDH18A1在人结直肠癌和正常结肠组织的表达,列联表分析ALDH18A1与临床病理参数的相关性,Kaplan-Meier及Cox回归分析ALDH18A1的预后判断意义;四唑化合物(methyl-thiazolyldiphenyl-sulfophenyl-tetrazolium bromide,MTS)检测下调ALDH18A1表达对结直肠癌细胞增殖的影响;分析ALDH18A1与MYC基因表达的相关性; Real-time PCR和Western blot检测敲低ALDH18A1后MYC基因的表达,基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)探讨ALDH18A1与MYC下游靶基因活化的关系。结果 ALDH18A1在结直肠癌组织高表达,与其临床病理参数及预后相关(风险比为1. 996,95%置信区间为1. 012～3. 939,P=0. 046);下调ALDH18A1表达抑制结直肠癌细胞增殖; ALDH18A1与MYC表达正相关;下调ALDH18A1抑制MYC基因表达;ALDH18A1高表达患者中,c-MYC靶基因显著富集。结论 ALDH18A1可作为结直肠癌患者的预后判断因子,并可能通过调控MYC基因表达而抑制结直肠癌细胞的增殖。

高分辨率熔解曲线技术在筛查琥珀酸半醛脱氢酶缺陷症致病基因突变中的应用

目的对4例琥珀酸半醛脱氢酶缺陷症(SSADHD)患儿家系进行基因突变分析,在明确突变的基础上建立针对醛脱氢酶5家族成员A1基因(ALDH5A1)中常见致病基因突变位点c.1529C> T(p.S510F)的高分辨率熔解(HRM)曲线快速筛查方法。方法先证者4例SSADHD患儿年龄(5.3±2.2)个月,其中男性3例,女性1例。商品化试剂盒提取4例先证者及其亲属外周血基因组DNA;采用一代测序技术对患者家系的ALDH5A1进行基因突变分析;应用HRM曲线技术随机筛查80例患儿ALDH5A1上c.1529C> T位点突变。结果先证者均有致病基因突变c.1529C> T位点,其中2例为该位点纯合突变,2例杂合携带并伴有其他致病位点的杂合突变。先证者及其家属的HRM分析结果与测序结果一致。随机检测的80例患儿,年龄为(7.5±3.9)岁,其中男性48例,女性32例,均不携带该基因突变。结论推测c.1529C> T位点突变可能是津冀地区SSADHD患儿中ALDH5A1的常见致病基因突变位点,但其在人群中携带频率很低;利用HRM曲线技术可实现对该位点的快速筛查。

miR-221-5p通过靶向调控ALDH1A2对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-221-5p与醛脱氢酶1家族成员A2(ALDH1A2)的靶向关系及其对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 收集2020年7月至2022年7月于岳池县人民医院接受根治性胃癌切除术的50例胃癌患者的胃癌组织及其癌旁正常组织标本,体外培养的细胞株包括人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1和人胃癌细胞系BGC-803、AGS、SGC-7901、BGC-823、HGC-27。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织和细胞中miR-221-5p、ALDH1A2 mRNA的表达,Pearson相关分析胃癌组织中二者的相关性,分析miR-221-5p表达与患者临床病理参数的关系;生物信息学预测和双荧光素酶实验验证miR-221-5p对ALDH1A2的靶向调控作用;将HGC-27细胞分为对照组、抑制物-NC组、miR-221-5p抑制物组、模拟物NC组、miR-221-5p模拟物组、miR-221-5p模拟物+pc DNA3.1组和miR-221-5p模拟物+pc DNA3.1-ALDH1A2组,转染相应的质粒;分别采用MTT法、克隆形成实验、Transwell小室实验、划痕实验、流式细胞术检测细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布情况;蛋白质印迹法分析细胞中EMT相关蛋白表达情况。结果 miR-221-5p在胃癌组织和细胞中显著高表达,ALDH1A2 mRNA表达显著下调,二者在胃癌组织中呈明显负相关(P<0.05);miR-221-5p表达与胃癌患者的TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移有明显相关性(P<0.05);miR-221-5p靶向抑制ALDH1A2表达;与anti-miR-NC组相比,anti-miR-221-5p组细胞的OD值、划痕愈合率、N-cadherin、Vimentin蛋白、miR-221-5p表达水平、S期细胞比例明显下降,E-cadherin、α-catenin、ALDH1A2蛋白表达水平、G0/G1期细胞比例明显升高,单克隆形成、侵袭数目明显减少(P<0.05);与miR-NC组相比,miR-221-5p组细胞获得与上述相反的结果;上调ALDH1A2表达能够逆转miR-221-5p对HGC-27细胞恶性生物学行为的影响。结论 miR-221-5p过表达可能通过靶向下调ALDH1A2表达促进胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT和细胞周期进程,抑制细胞凋亡。

乙醛脱氢酶1和ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中乙醛脱氢酶1(ALDH1)和ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2(ABCG2)的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取山东省泰山医院2016年1月至2018年11月行手术治疗的82例NSCLC患者的组织标本,采用免疫组织化学法检测术后新鲜癌组织及癌旁组织中ALDH1、ABCG2的表达水平。采用χ^2检验分析ALDH1、ABCG2表达与患者临床病理特征的关系,使用Pearson法分析ALDH1和ABCG2的相关性,应用Kaplan-Meier和log-rank检验分析ALDH1、ABCG2表达与患者总生存(OS)的关系,采用Cox比例风险模型分析OS的影响因素。结果NSCLC组织中ALDH1、ABCG2阳性表达率高于癌旁组织,差异均有统计学意义[60.98%(50/82)比12.19%(10/82),51.22%(42/82)比3.66%(3/82),χ^2值分别为42.051、46.582,均P<0.01]。NSCLC组织中ALDH1与ABCG2表达呈正相关(r=0.451,P=0.014)。TNM分期Ⅱ~Ⅲ期患者ALDH1、ABCG2阳性表达率均高于Ⅰ期患者[70.00%(35/50)比46.88%(15/32),60.00%(30/50)比37.50%(12/32),均P<0.05],淋巴结转移患者ALDH1、ABCG2阳性表达率均高于未转移患者[75.00%(27/36)比50.00%(23/46),66.67%(24/36)比39.13%(18/46),P<0.05]。中位随访时间22.5个月,共2例患者失访,中位OS时间25.4个月,ALDH1阳性患者OS较阴性患者差(χ^2=5.124,P=0.031),ABCG2阳性患者OS较阴性患者差(χ^2=6.969,P=0.008)。多因素Cox分析显示,年龄(OR=1.241,95%CI 1.021~2.535,P=0.045)、淋巴结转移(OR=1.521,95%CI 1.102~4.281,P=0.012)、TNM分期(OR=2.104,95%CI 1.289~6.150,P=0.018)、ALDH1(OR=2.435,95%CI 1.214~8.654,P=0.001)、ABCG2(OR=1.503,95%CI 1.148~5.696,P=0.021)是NSCLC患者OS的独立影响因素。结论NSCLC组织中ALDH1、ABCG2表达水平增高,且与淋巴结转移、TNM分期相关,ALDH1、ABCG2阳性者OS率较低,二者可能成为NSCLC的预后标志物。

重症肺炎患儿NADH脱氢酶1、NADH脱氢酶3和味觉受体2家族成员43基因表达的意义

目的研究重症肺炎患儿NADH脱氢酶1(ND1)、NADH脱氢酶3(ND3)和味觉受体2家族成员43(TAS2R43)基因表达情况及与儿童重症肺炎的关系。方法选取2016年5月至2018年5月驻马店市中心医院儿童重症监护病房住院的儿童重症肺炎患儿30例为重症肺炎组,选取同期在本院体检健康的儿童25例为健康对照组。重症肺炎组男17例,女13例,年龄(5.30±1.69)岁;健康对照组男13例,女12例,年龄(4.96±1.31)岁。使用real-time PCR方法检测ND1、ND3和TAS2R43基因表达量,2-ΔΔCt法计算ND1、ND3和TAS2R43基因相对表达量。结果重症肺炎组ND1、ND3及TAS2R43 mRNA的循环阈(Ct)值分别为20.49±0.45、21.32±0.61和32.20±0.46,健康对照组分别为26.69±0.62、27.50±0.35和26.69±0.49,2组比较差异均有统计学意义(t=-14.02、-15.25、-14.19,均P<0.05)。2-ΔΔCt法计算重症肺炎组ND1、ND3和TAS2R43基因相对表达量是健康对照组的51.27、50.56和0.02倍。结论ND1、ND3和TAS2R43基因在重症肺炎患儿体内有异常表达,这3个基因可能与儿童重症肺炎关系密切。

乳腺癌组织中ALDH1、CXCR4及ABCG2与其分子亚型的关系

目的探讨乳腺癌组织中乙醛脱氢酶1(ALDH1)、CXCR4及三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的表达情况,并分析三者与乳腺癌分子亚型的关系。方法采用免疫组化S-P法检测90例乳腺癌组织中ALDH1、CXCR4、ABCG2以及ER、PR、HER-2的表达情况,根据后三者的表达情况将乳腺癌分为Luminal A型(35例,38.9%)、Luminal B型(16例,17.8%)、HER-2过表达型(22例,24.4%)和Basal-like型(17例,18.9%)4个亚型,并分析三者与分子亚型的关系。结果 90例乳腺癌组织中,ALDH1、CXCR4、ABCG2的阳性表达率分别为32.2%、60.0%、32.2%。不同亚型乳腺癌组织中ALDH1、CXCR4及ABCG2的表达比较差异有统计学意义(χ2=20.157,P<0.001;χ2=12.088,P=0.007;χ2=18.760,P<0.001)。结论不同亚型乳腺癌组织的ALDH1、CXCR4及ABCG2表达具有差异性,三者检测有助于乳腺癌分子亚型的预后评估。

ALDH9A1、ALDH2蛋白在脑膜瘤的表达情况及临床意义

目的观察脑膜瘤患者醛脱氢酶9家族成员A1(member of the aldehyde dehydrogenase 9 family A1,ALDH9 A1)、乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase,ALDH2)蛋白表达情况,并分析其临床意义。方法选取2015年8月-2017年5月在我院接受治疗的60例脑膜瘤患者为观察组,选取同期在我院接受治疗的脑外伤患者60例作为对照组,观察两组ALDH9 A1、ALDH2蛋白表达情况,比较两组血管内皮生长因子(VEGF-A)、基质金属蛋白酶(MMP-9)、胰岛素样生长因子-2(IGF-Ⅱ)及其受体(IGF-ⅡR)水平的差异,分析脑膜瘤患者ALDH9 A1、ALDH2蛋白表达情况与VEGF-A、MMP-9、IGF-Ⅱ和IGF-ⅡR水平的相关性。结果观察组患者的ALDH9 A1阳性和ALDH2阳性表达率均高于对照组(χ2值=70.533、86.724,P<0.001);观察组患者的VEGF-A和MMP-9蛋白表达水平均高于对照组(t=-16.866、-15.162,P<0.001);观察组患者的IGF-Ⅱ阳性和IGF-ⅡR阳性表达率均高于对照组(χ2值=101.538、112.258,P<0.001);脑膜瘤患者的ALDH9 A1、ALDH2阳性表达率与VEGF-A、MMP-9水平和IGF-Ⅱ和IGF-ⅡR阳性表达率正相关(r=0.612、0.598、0.605、0.627、0.608、0.612、0.634、0.587,P<0.05)。结论脑膜瘤患者的ALDH9 A1、ALDH2蛋白阳性表达率较高,且与EGF-A、MMP-9水平和IGF-Ⅱ和IGF-ⅡR阳性表达率明显正相关。

ALDH1和ABCG2在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的检测肿瘤干细胞标记物ALDH1和ABCG2在人肾透明细胞癌中的表达情况,探讨二者相关性及与临床病理因素的关系。方法采用免疫组化法检测78例肾透明细胞癌及30例癌旁正常肾组织中ALDH1和ABCG2的表达,结合临床病理资料进行关性联分析。结果 ALDH1和ABCG2在肾透明细胞癌组织中的表达明显高于正常肾组织(P<0.05);ALDH1和ABCG2在肾透明细胞癌中的阳性表达与肿瘤的病理分级、临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05),而与患者性别、年龄及肿瘤直径无关(P>0.05)。结论 ALDH1、ABCG2的表达可能在肾透明细胞癌的发生、发展中起着重要的作用。

基于Nrf2通路探讨曲克芦丁对急性脑梗死大鼠神经功能的保护作用

目的研究曲克芦丁对急性脑梗死(ACI)大鼠神经功能保护的可能机制。方法30只大鼠随机分为假手术组、模型组和干预组,每组10只。采用“线栓法”构建ACI大鼠模型,造模后干预组立即给予曲克芦丁30 mg/kg灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,连续给药10 d。比较各组大鼠的神经功能评分、旷场实验得分、脑组织形态结构、脑组织中氧化应激指标、凋亡蛋白及Nrf2通路关键蛋白的表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经元细胞质结构明显改变,神经元细胞明显凋亡;干预组大鼠神经元结构及存活率较模型组明显改善。与假手术组比较,模型组神经功能评分、丙二醛(MDA)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、乳酸脱氢酶(LDH)、Bax、Cleaved-Caspase-3/Caspase-3水平显著升高,旷场实验得分、超氧化物歧化酶(SOD)、Bcl-2、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,干预组神经功能评分、MDA、iNOS、LDH、Bax、Cleaved-Caspase-3/Caspase-3水平显著减低,旷场实验得分、SOD、Bcl-2、Nrf2、HO-1、NQO1水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论曲克芦丁可能通过促进Nrf2/HO-1/NQO1通路缓解大鼠ACI后的氧化损伤,抑制神经元细胞凋亡,从而保护神经功能。

DHRS2抑制肝细胞肝癌增殖和转移的功能研究

目的:研究脱氢酶/还原酶SDR家族成员2(DHRS2)对肝细胞肝癌(HCC)细胞增殖和转移能力的影响,并探讨其作用的可能机制。方法:采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析DHRS2在HCC组织中的表达情况。Kaplan meier plotter数据库分析DHRS2的表达对HCC患者预后的影响。Western blot检测DHRS2在HCC细胞系Huh-7、HepG2、SK-hep-1及正常肝细胞系LO2中的表达水平,选择DHRS2表达最低的HCC细胞系进行DHRS2过表达质粒转染,分为NC组和oe-DHRS2组。CCK8检测各组细胞增殖能力;平板克隆实验检测各组细胞克隆形成能力;细胞周期实验检测各组细胞周期;Transwell实验检测各组细胞转移能力;Western blot检测各组细胞中TLR4/MyD88信号通路活性。结果:TCGA数据库分析结果显示,DHRS2 mRNA在HCC组织中的表达低于正常肝组织(P<0.05)。Kaplan meier plotter数据库分析结果显示,低表达DHRS2的HCC患者预后较差。Western blot结果显示,DHRS2在HCC细胞系的表达水平均低于正常肝细胞系LO2,选择表达水平最低的Huh-7细胞进行DHRS2过表达质粒转染(P<0.05)。oe-DHRS2组Huh-7细胞增殖、克隆形成和转移能力下降,细胞周期阻滞在G2/M期,oe-DHRS2组Huh-7细胞TLR4/MyD88信号通路活性被抑制(P<0.05)。结论:DHRS2可能通过下调TLR4/MyD88信号通路抑制HCC细胞增殖和转移,可能是治疗HCC的潜在靶点。

肿瘤干细胞标志物Oct4和ALDH1A1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤干细胞标记物八聚体结合转录因子4(Oct4)和乙酰脱氢酶家族成员A1(ALDH1A1)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测208例乳腺癌组织和80例乳腺腺瘤组织中的Oct4和ALDH1A1蛋白的表达,分析其表达与临床病理参数及预后的相关性,并分析二者表达的相关性;同时采用western blot法检测20例乳腺癌组织和20例乳腺腺瘤组织中Oct4和ALDH1A1蛋白的表达,并分析二者表达的相关性。结果Oct4和ALDH1A1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达明显高于乳腺腺瘤组织(P<0.05)。Oct4和ALDH1A1的表达与乳腺癌组织学分级、组织学类型、TNM分期、淋巴结转移及三阴性乳腺癌密切相关。Oct4和ALDH1A1高表达的患者预后明显差于低表达的患者(P<0.05)。乳腺癌组织中OCT4和ALDH1A1表达具有显著相关性(P<0.05)。结论乳腺癌组织中,Oct4和ALDH1A1表达与组织学分级、组织学类型、TNM分期、淋巴结转移及三阴性乳腺癌密切相关;Oct4和ALDH1A1高表达提示乳腺癌预后不良;OCT4和ALDH1A1表达具有相关性。

ALDH1A1调控Notch1信号通路在MMSCs“干性”维持中的作用和机制研究

目的研究乙酰脱氢酶家族成员A1(ALDH1A1)调控Notch1信号通路在多发性骨髓瘤干细胞(MMSCs)“干性”维持中的作用和机制。方法选用人MMSCs CD138-B细胞和人正常干细胞QSG-7701,用Western blot法检测ALDH1A1在CD138-B细胞和QSG-7701细胞中的表达情况。将CD138-B细胞分为control组、ALDH1A1敲减组、Notch1通路抑制剂组,control组不作任何处理,ALDH1A1敲减组转染10μg ALDH1A1-shRNA重组慢病毒质粒,Notch1通路抑制剂组加入20μmol/L Notch1通路抑制剂GSI,培养48 h,检测并比较三组ALDH1A1表达量、Notch1通路相关蛋白[Notch1、发状分裂相关增强子1(Hes1)]表达量、增殖率、凋亡率及“干性”相关基因[胚胎干细胞关键蛋白(NANOG)、八聚体结合转录因子4(OCT4)]表达量。结果CD138-B细胞中ALDH1A1蛋白表达量较QSG-7701细胞明显增加(P<0.05);ALDH1A1敲减组ALDH1A1蛋白表达量较control组明显减少(P<0.05);Notch1通路抑制剂组ALDH1A1蛋白表达量与control组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ALDH1A1敲减组和Notch1通路抑制剂组增殖率及Notch1、Hes1蛋白和NANOG、OCT4基因表达量较control组明显减少(P<0.05),凋亡率较control组明显增多(P<0.05);Notch1通路抑制剂组增殖率、凋亡率及Notch1、Hes1蛋白和NANOG、OCT4基因表达量与ALDH1A1敲减组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ALDH1A1在MMSCs中呈高表达,ALDH1A1敲减后可通过阻抑Notch1信号通路下调MMSCs“干性”维持,抑制MMSCs增殖并诱导其凋亡。

利用CRISPR /Cas9技术快速创制香型“秀水134”水稻

以目前上海市主栽的高产常规水稻“秀水134”为材料,利用CRISPR/Cas9技术成功敲除甜菜碱醛脱氢酶2基因,获得了两种类型纯合突变体植株.采用表达载体特异性结合的引物检测T 1代转基因植株,成功获得6株不携带载体骨架的转基因植株.定量PCR分析显示,突变体植株甜菜碱醛脱氢酶2基因表达量极显著低于野生型对照(p<0.01),但突变体植株成熟种子香味物质2-乙酰-1-吡咯啉(2AP)含量极显著高于野生型对照(p<0.01).比较野生型对照与突变体植株的主要农艺性状和产量性状,两者间都没有显著差异(p>0.05).本研究可为加快高产香型水稻在上海及周边地区的推广应用,以及为今后利用CRISPR/Cas9技术快速培育其他高产香型水稻新品种研究奠定基础.

MiR-663b/ALDH6A1轴通过ROS调节口腔鳞状细胞癌细胞增殖

目的 探讨microRNA-663b(miR-663b)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖的调控作用及机制。方法 利用基因表达汇编(GEO)数据库的OSCC组织芯片数据进行差异表达基因分析;采用基因富集分析(GSEA)探寻OSCC与miR-663b相关的生物学功能。将miR-663b mimic以及醛脱氢酶6家族成员A1(ALDH6A1)过表达质粒转染至人OSCC细胞系HSC-3、CAL-27;采用CCK-8实验、克隆形成实验及裸鼠皮下移植瘤实验检测miR-663b对HSC-3、CAL-27细胞体内、外增殖的影响;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-663b与ALDH6A1的靶向关系。结果 GEO数据库组织芯片数据显示,miR-663b在OSCC细胞中表达上调;GSEA发现miR-663b生物学功能与调节细胞增殖、氧化还原反应及活性氧(ROS)相关。功能试验中,过表达miR-663b显著促进HSC-3、CAL-27细胞的体外增殖、克隆形成能力以及裸鼠皮下移植瘤的生长(P <0.05),下调ALDH6A1蛋白表达和ROS水平(P <0.05),升高NADPH/NADP~+比值(P <0.05);而上调ALDH6A1表达则显著抑制HSC-3、CAL-27细胞体外增殖和和克隆形成能力,上调ALDH6A1蛋白表达和ROS水平(P <0.05),降低NADPH/NADP~+比值(P <0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果证实miR-663b能靶向结合ALDH6A1 mRNA的3’UTR区。结论 miR-663b在OSCC细胞中表达上调,并可通过靶向抑制ALDH6A1表达调节ROS水平,进而促进OSCC细胞增殖发挥致癌基因作用。

鸭疫里默氏杆菌三磷酸甘油醛脱氢酶与鸭血浆蛋白的结合作用

为了探讨鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer)感染引起鸭炎性渗出反应的分子基础及可能机制,阐明R.anatipestifer感染致病的分子机理,本研究采用Dot-ELISA、Western blot和质谱技术分析R.anatipestifer分泌的三磷酸甘油醛脱氢酶(RaGAPDH)与鸭血浆蛋白成分的结合作用,以及R.anatipestifer感染鸭血浆蛋白成分的变化。结果显示,重组RaGAPDH可与鸭血浆中的纤溶酶原和富组氨酸糖蛋白(histidine-rich glycoprotein, HRG)结合,R.anatipestifer感染鸭血浆α2-巨球蛋白(α2-macroglobulin,α2-M)和α1酸性糖蛋白(α1 acidglycoprotein,α1-AG)含量显著增高(P<0.05), HRG含量显著下降(P<0.05)。推测R.anatipestifer产生的具有酶活性的GAPDH同源体RaGAPDH能与动物血浆纤溶酶原和HRG发生结合,这种结合可能导致其血液凝固系统/纤溶系统的平衡紊乱和抗凝血机能下降;R.anatipestifer感染可引发动物肝脏急性炎性反应和严重损伤,血浆α2-M、α1-AG含量显著增高和HRG含量显著下降(P<0.05),可能导致动物血液凝固系统/纤溶系统平衡的自我调节能力下降。但RaGAPDH能否引发动物弥漫性血管内凝血和微血栓的形成,以及R.anatipestifer感染引发的HRG含量水平显著下降是否与其分泌表达的RaGAPDH有关,还有待进一步研究证实。

乳腺癌中ALDH1的表达与其分子亚型及ABCG2的关系

目的探讨乙醛脱氢酶1(ALDH1)表达在乳腺癌中的表达及与各分子亚型、ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2(ABCG2)的关系。方法根据免疫学标志物(ER,PR,HER2,CK5/6)把179例乳腺癌标本分为5类分子亚型:管腔A型,管腔B型,HER2过表达型,基底样型和正常乳腺样型。应用免疫组织化学检测ALDH1及ABCG2表达情况,并分析两者之间的相互关系以及两者与乳腺癌各临床病理因素之间的关系。结果 179例乳腺癌中43例(24.0%)呈ALDH1阳性表达。ALDH1的表达率在乳腺癌各分子亚型有明显差异(P=0.003),在管腔A型,管腔B型,HER2过表达型,基底样型和正常乳腺样型中的阳性表达率分别为16.7%(17/102),21.4%(3/14),54.5%(13/22),33.3%(8/24)和17.6%(3/17)。ALDH1阳性表达与ABCG2的表达之间无明显关系(P=0.052)。ALDH1和ABCG2的表达均与术前化疗与否有关(P=0.027和P=0.033),ALDH1的表达与HER2表达有关(P=0.006)。结论小部分乳腺癌呈ALDH1阳性表达,且ALDH1表达率在乳腺癌各分子亚型中表达具有差异性。ALDH1阳性表达与ABCG2无明显关系。

ABCG2和ALDH1在卵巢子宫内膜异位症恶变中的表达和影响研究

目的探讨三磷酸腺苷结合盒超家族G家族成员2(ABCG2)、乙醛脱氢酶1(ALDH1)在卵巢子宫内膜异位症恶变中的表达和意义。方法采用免疫组织化学法检测38例卵巢子宫内膜异位症恶变患者(EMs恶变组),35例卵巢子宫内膜异位囊肿患者(EMs组),30例正常子宫内膜患者(对照组)中ABCG2、ALDH1蛋白的表达。结果 ABCG2、ALDH1在EMs恶变组中的阳性表达率明显高于EMs组及对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。EMs恶变组中ABCG2、ALDH1的表达与患者年龄、痛经史及病理学类型无明显相关性,与血清CA125水平、病理分化程度及分期呈明显相关性(P<0.05);ABCG2的表达与ALDH1的表达无明显相关性(P>0.05)。结论 ABCG2、ALDH1可能与卵巢子宫内膜异位症恶变的发生、发展有关。

线粒体DNA3243、3316点突变与2型糖尿病

目的 研究2型糖尿病患者中线粒体t RNAL eu( UUR)基因32 4 3A/ G突变和NADH脱氢酶亚单位1基因(ND1)基因3316 G/ A突变的发生频率及其与2型糖尿病的相关性。方法 应用聚合酶链反应及限制性片段长度多态性技术检测2 2 5例中国云南2型糖尿病患者和195名无糖尿病家族史的健康对照者有无32 4 3A/ G突变和3316 G/ A突变,并经DNA直接测序确证。结果 2型糖尿病患者中3316 G/ A突变者5例(2 .2 2 % ) ,195例对照者中突变者2例(1.0 3% ) ,突变发生率在两组间差异无统计学意义(P=0 .4 5 76 ) ;两组中无线粒体32 4 3A/ G突变。结论 线粒体t RNALeu( UUR) 基因32 4 3A/ G突变在中国云南2型糖尿病人群中发生频率低,可能不是云南人群中2型糖尿病的常见病因。线粒体ND1基因3316 G/ A突变可能仅为人群中线粒体基因组的正常多态。其他的遗传、环境及子宫内因素需要进一步研究。