桂枝茯苓胶囊联合戈舍瑞林对子宫肌瘤大鼠模型醛酮还原酶1C3和内分泌的影响

目的观察桂枝茯苓胶囊联合戈舍瑞林对子宫肌瘤大鼠模型醛酮还原酶1C3(AKR1C3)和内分泌的影响。方法将36只7周龄雌性白细胞介素-2受体共同Υ链(IL2RG)大鼠随机分为空白对照组、模型对照组和联合治疗组,每组各12只。模型对照组和联合治疗组通过雌孕激素药物建立子宫肌瘤模型。造模结束后第2天,空白对照组和模型对照组予蒸馏水5 mL灌胃,联合治疗组予桂枝茯苓胶囊混悬液0.70 g/(kg·d)+戈舍瑞林1.25 mg/(kg·d)灌胃,连续6周。采用酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清雌二醇、孕酮和催乳素水平,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测AKR1C3 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测Ⅰ型胶原、转化生长因子β(TGF-β)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果与空白对照组相比,模型对照组雌二醇、孕酮和催乳素含量均升高(P<0.05);与模型对照组相比,联合治疗组雌二醇、孕酮和催乳素含量降低(P<0.05)。与空白对照组相比,模型对照组AKR1C3 mRNA表达含量升高(P<0.05);与模型对照组相比,联合治疗组AKR1C3 mRNA表达含量降低(P<0.05)。与空白对照组相比,模型对照组Ⅰ型胶原、PAI-1和TGF-β蛋白表达均升高(P<0.05);与模型对照组相比,联合治疗组Ⅰ型胶原、PAI-1和TGF-β蛋白表达均降低(P<0.05)。与空白对照组相比,模型对照组Caspase-3和Bax蛋白表达降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);与模型对照组相比,联合治疗组Caspase-3和Bax蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论桂枝茯苓胶囊联合戈舍瑞林能降低子宫肌瘤大鼠雌二醇、孕酮和催乳素水平,抑制AKR1C3表达,具有抗增殖和促凋亡的作用,可抑制子宫肌瘤生长。

醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)通过激活Wnt/β-catenin通路促进乳腺癌细胞增殖

目的探讨醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法在乳腺癌MCF-7细胞过表达AKR1B10、在BT-20细胞敲低AKR1B10,分别建立过表达以及敲低细胞系。利用CCK-8增殖实验检测过表达与敲低AKR1B10对乳腺癌细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织及配对正常组织AKR1B10 mRNA水平,Western blot法检测乳腺癌组织、过表达及敲低AKRB10的乳腺癌细胞AKR1B10、β联蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、存活蛋白(survivin)、c-Myc的蛋白水平。结果乳腺癌组织AKR1B10表达增加。过表达AKR1B10后,MCF-7乳腺癌细胞增殖加快,β-catenin、cyclin D1、c-Myc、survivin蛋白表达增加;敲低AKR1B10后,BT-20乳腺癌细胞增殖变慢,β-catenin、cyclin D1、c-Myc、survivin蛋白表达下降。结论AKR1B10在乳腺癌中高表达并通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞增殖。

醛酮还原酶家族1成员B10过表达的宫颈癌细胞株Hela增殖、周期、侵袭和迁移观察

目的观察醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)过表达的宫颈癌细胞增殖、周期侵袭和迁移情况。方法将Hela细胞分为观察组和对照组,观察组用慢病毒系统转染AKR1B10过表达质粒,对照组转染空质粒。采用Western blotting法检测两组细胞AKR1B10、p53、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、波形蛋白(Vimentin)蛋白;采用MTT法、克隆形成实验观察两组细胞增殖情况,结果分别用OD570、形成细胞克隆数量表示;采用流式细胞术检测两组细胞周期分布;采用划痕实验观察两组细胞迁移情况,结果以划痕愈合百分比表示;采用Transwell小室实验观察两组细胞侵袭情况,结果以穿膜细胞数表示。结果观察组细胞AKR1B10蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05)。MTT法测得继续培养24、48、72 h观察组细胞OD570均低于对照组(P均<0.05),克隆形成实验观察组克隆数量少于对照组(P<0.05)。与对照组相比,观察组G0~G1期细胞比例上升(P<0.05),G2~M期和S期细胞比例下降(P均<0.05)。观察组划痕愈合百分比低于对照组(P<0.05)。观察组穿膜细胞数低于对照组(P<0.05)。观察组p53蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05),MMP-2和Vimentin蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.05)。结论 AKR1B10过表达可抑制宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期于G0~G1期,p53、MMP-2和Vimentin途径可能在其中发挥作用。

醛酮还原酶家族1成员B10的功能及在肿瘤中的作用研究进展

醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)是一种醛酮还原酶,主要功能是还原醛酮类羰基化合物、促进脂质合成和调节视黄酸代谢。AKR1B10主要在小肠和结肠中表达,在其他正常组织中低表达或不表达。近年来研究表明AKR1B10与肿瘤关系密切,在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用,并且AKR1B10可能成为肿瘤诊断非常有价值的分子标记物以及靶向治疗肿瘤的新靶点。本文就AKR1B10的分子结构、功能、与肿瘤的关系以及在临床的应用等相关最新研究作一综述。

兔抗醛-酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备兔抗醛-酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法应用逆转录PCR法扩增AKR1B10全基因,将扩增产物连接到原核表达载体p ET-15b上,构建重组质粒p ET-15b-AKR1B10,将其转化至大肠杆菌E.coli DH5α中。用异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,表达产物经SDS-PAGE分析鉴定出阳性者进行克隆,扩大培养,提取重组蛋白,用His-tag纯化柱纯化重组蛋白。将纯化的重组蛋白皮下注射到新西兰白兔,加强免疫得到抗血清。用AKR1B10重组蛋白制备抗体纯化柱,从抗血清中纯化出抗AKR1B10多克隆抗体,并进行SDS-PAGE、ELISA、Western blot法鉴定。结果成功构建了重组质粒p ET-15b-AKR1B10,并获得高纯度的重组蛋白His-Tag-AKR1B10,制备的多克隆抗体相对特异性地识别AKR1B10。结论兔抗AKR1B10多克隆抗体制备成功,特异性较好。

醛酮还原酶1C3促进肿瘤发生发展与耐药的研究进展

醛酮还原酶1C3(Aldo-Keto Reductase Family 1 Member C3,AKR1C3)是可溶性NADPH还原酶,兼具有3α-羟基类固醇脱氢酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase,3α-HSD)、3β-HSD、17β-HSD和11-酮前列腺素还原酶活性,能催化雌激素、孕酮、雄激素和前列腺素代谢。AKR1C3在肿瘤组织中存在异常表达和单核苷酸多态性,与多种激素相关性肿瘤的发生、发展及耐药密切相关。研究显示,AKR1C3能够与雌激素受体(ER)、孕酮受体(PR)、雄激素受体(AR)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)等核受体结合,间接调控这些核受体的反式激活,影响细胞的活性。为了进一步了解AKR1C3对肿瘤发生发展的影响及其与肿瘤耐药的关系,本文对近年与AKR1C3相关肿瘤的研究进行综述。

醛酮还原酶AKR1C3介导乳腺癌阿霉素耐药的作用及其机制

为了探讨醛酮还原酶AKR1C3在乳腺癌阿霉素耐药中的作用,成功建立了阿霉素耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7/DOX以及AKR1C3稳定过表达和敲低的乳腺癌细胞株。Western blot发现MCF-7/DOX细胞内AKR1C3的表达水平明显高于敏感株MCF-7细胞。CCK-8细胞药物敏感实验和DAPI染色实验发现在AKR1C3高表达的细胞中,阿霉素的细胞毒性明显降低(IC50增加了6倍);集落形成实验也证实AKR1C3过表达细胞中,集落形成能力增高。进一步实验证实,AKR1C3介导的β-catenin入核增多是导致乳腺癌细胞阿霉素耐药的原因之一。应用β-catenin抑制剂XAV939,能够逆转AKR1C3诱导的阿霉素耐药。上述结果提示,AKR1C3可以作为逆转阿霉素耐药的潜在治疗靶标。

低剂量BPA和DEHP对成年大鼠前列腺AKR1C3的影响

目的 明确低剂量BPA和DEHP对成年大鼠前列腺AKR1C3的影响。方法 56只成年雄性SD大鼠随机分成7组,每组8只,分别灌胃给予BPA(10、30和90μg/kg),DEHP(30、90和270μg/kg)和溶媒,连续4周。动物于末次给药24 h后,麻醉后采血,剖取前列腺并分叶,利用ELISA法检测血清和前列腺中AKR1C3水平,利用免疫组化法分析各叶前列腺中AKR1C3的表达情况。结果 给予BPA后,腹侧前列腺90μg/kg剂量组AKR1C3表达显著性高于对照组(P<0.05);背侧前列腺10μg/kg剂量组AKR1C3水平和蛋白表达均显著性高于对照组(P<0.01,P<0.001)。给予DEHP后,270μg/kg剂量组血清AKR1C3水平显著性高于对照组(P<0.001),腹侧前列腺各组AKR1C3水平均显著性高于对照组(P<0.05,P<0.01),270μg/kg剂量组AKR1C3蛋白表达显著性高于对照组(P<0.05);背侧前列腺30μg/kg和90μg/kg剂量组AKR1C3表达显著性高于对照组(P<0.001,P<0.05)。结论 低剂量BPA和DEHP均能促进成年大鼠前列腺AKR1C3表达,但各叶前列腺对BPA和DEHP的敏感度有所不同。

染料木黄酮抑制AKR1C3抗去势抵抗前列腺癌的生长及其机制研究

目的:研究植物雌激素染料木黄酮(GEN)抑制AKR1C3的表达,进而抑制去势抵抗前列腺癌(CRPC)的生长,为染料木黄酮临床治疗CRPC提供理论依据。方法:在无激素的血清环境下培养22RV1、VCaP、RWPE-1细胞,以不同浓度(0、12.5、25、50、100μmol/L)的GEN处理48 h。利用CCK-8检测细胞增殖活性。通过AKR1C3 siRNA、AKR1C3抑制剂(ASP-9521)分别与GEN联合干扰22RV1、VCaP细胞,用Western blot检测细胞中PSA及AKR1C3蛋白的表达水平。结果:染料木黄酮能抑制去势抵抗前列腺癌的生长。Western blot结果显示,GEN能够抑制PSA、AKR1C3蛋白的表达,且与AKR1C3 siRNA、AKR1C3抑制剂(ASP-9521)联合作用时,对AKR1C3的抑制效果更为显著。结论:染料木黄酮可能通过抑制去势抵抗前列腺癌细胞中AKR1C3的表达,进而抑制CRPC细胞的增殖。

基于醛酮还原酶1C3的抗肿瘤药物研究进展

醛酮还原酶(aldo-keto reductase,AKR)1C3是AKR超家族的成员之一,在多种恶性实体瘤和血液肿瘤细胞中的表达水平高于正常细胞,并与癌症的发生和发展以及肿瘤对化疗/免疫疗法的耐药性和对放疗的抵抗性密切相关。研究已证明,AKR1C3既可以作为生物标志物,用于肿瘤病人筛选、指导用药和预后诊断,也可作为抗肿瘤药物的新靶标,用于药物设计和研发。基于AKR1C3的抗肿瘤药物有望为临床用药提供新的解决方案。回顾了近年来基于AKR1C3的抗肿瘤药物的研究进展,并对该研究领域进行了展望。

非小细胞肺癌组织中AKR1C3水平及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中醛酮还原酶1 C3(AKR1C3)表达及其临床意义。方法收集2013年1月至2016年3月88例手术切除的NSCLC组织及83例癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测上述组织中的AKR1C3表达水平,分析AKR1C3表达与NSCLC临床病理参数(性别、年龄、TNM分期、肿瘤大小、组织学类型及淋巴结转移)的关系;根据随访资料分析AKR1C3表达与预后的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)评价AKR1C3表达在NSCLC早期诊断中的效能。结果 NSCLC组AKR1C3表达水平为0.187±0.175,低于癌旁正常组织的1.079±0.384,差异有统计学意义(P<0.05);AKR1C3诊断NSCLC的曲线下面积为0.982(95%CI:0.966~0.998)。AKR1C3表达与NSCLC性别、年龄、组织学类型及淋巴结转移无关,与肿瘤大小及TNM分期有关。肿瘤大小>3 cm的AKR1C3表达量为0.095±0.055,低于肿瘤大小≤3 cm的0.340±0.201,而Ⅲ、Ⅳ期的AKR1C3表达量为0.094±0.058,低于Ⅰ、Ⅱ期的0.265±0.202,差异有统计学意义(P<0.05)。全组NSCLC患者的中位总生存期(OS)为17.60个月。AKR1C3高表达者的中位OS为20.60个月,高于低表达者的11.90个月,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅰ+Ⅱ期患者的中位OS为21.65个月,高于Ⅲ+Ⅳ期的16.20个月,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤大小≤3 cm者的中位OS为18.40个月,高于>3 cm者的15.70个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AKR1C3在NSCLC组织中表达降低,且与TNM分期、肿瘤大小及预后有关,可能与NSCLC发生发展有关,在NSCLC诊断及病情评估有一定价值。

不同分期前列腺癌组织中AKR1C3的表达

目的检测不同分期前列腺癌组织中AKR1C3的表达,分析AKR1C3表达水平与前列腺癌进展之间的关系。方法收集46例人前列腺良性增生及前列腺癌穿刺组织样本,免疫组织化学染色方法检测AKR1C3的表达,以Gleason评分分析AKR1C3表达平与前列腺癌进程的关系。结果在正常前列腺上皮、和良性前列腺增生组织内AKR1C3呈低表达,在前列腺癌组织内随着Gleason评分的升高,AKR1C3表达逐渐升高。结论 AKR1C3的表达水平与Gleason评分呈正相关性,提示AKR1C3可作为评价前列腺癌恶性程度的指标。

MicroRNA-6852靶向调控LEF1/AKR1C3轴对结肠癌细胞SW480放疗敏感性的影响

目的探究microRNA-6852(miR-6852)对结肠癌细胞SW480放疗敏感性的作用及其可能的作用机制。方法体外培养人正常结肠上皮细胞HCoEpiC和人结肠癌细胞SW480,X射线满射野照射细胞。使用miRNA阴性对照(miR-NC)、过表达载体阴性对照(oe-NC)、shRNA阴性对照(sh-NC)、miR-6852-mimic、淋巴细胞增强因子(LEF1)过表达载体(oe-LEF1)和醛酮还原酶1C3(AKRIC3)特异性shRNA(sh-AKR1C3)转染细胞。qRT-PCR和Western blot检测细胞miR-6852、LEF1和AKR1C3表达;荧光素酶报告基因实验检测miR-6852和LEF1、LEF1和AKR1C3的靶向结合;5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(EdU)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;染色质免疫沉淀技术-聚合酶链式反应(ChIP-PCR)检测LEF1对AKR1C3启动子区域的靶向结合。结果与HCoEpiC组相比,SW480组细胞中miR-6852表达明显降低(P<0.05),LEF1mRNA和蛋白表达、AKR1C3mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。与空白对照组相比,2Gy组、4Gy组和6Gy组SW480细胞中miR-6852表达明显降低(P<0.05),LEF1mRNA和蛋白表达、AKR1C3mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。与miRNC+oe-NC+6Gy组相比,miR-6852-mimic+oe-NC+6Gy组SW480细胞EdU阳性细胞数明显降低(P<0.05),而凋亡率明显升高(P<0.05);与miR-6852-mimic+oe-NC+6Gy组相比,miR-6852-mimic+oe-LEF1+6Gy组EdU阳性细胞数明显升高(P<0.05),而细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与oe-NC+sh-NC+6Gy组相比,oeLEF1+sh-NC+6Gy组SW480细胞EdU阳性细胞数明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与oe-LEF1+sh-NC+6Gy组相比,oe-LEF1+sh-AKR1C3+6Gy组EdU阳性细胞数明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论miR-6852靶向调控LEF1/AKR1C3轴,增加结肠癌细胞SW480对放疗的敏感性。

醛酮还原酶AKR1C3基因的原核表达及其生物学活性

目的原核表达醛酮还原酶AKR1C3基因,并探讨其生物学活性。方法经人工合成醛酮还原酶AKR1C3基因,克隆至质粒p ET-15b中,构建重组表达质粒p ET-15b-AKR1C3,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析镍柱纯化。采用荧光分光法检测酶活性,确定AKR1C3的最适底物,并检测金属离子对酶活的影响。用纯化蛋白分别免疫BALB/c小鼠和新西兰大耳白兔,ELISA法检测动物血清中抗体水平,并对免疫后的兔进行血常规和生化检验,对兔和小鼠进行病理学检查。采用MTT法进行细胞毒理试验。结果重组质粒p ET-15b-AKR1C3经双酶切及PCR鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约36 000,可溶性蛋白占菌体总蛋白的27%,纯化后纯度达95%以上。睾丸酮为AKR1C3最适底物,酶活为100.086 U;金属离子Cu2+、K+可提高AKR1C3酶活;小鼠血清中最高效价为5×104,兔血清中最高效价为6.25×104。AKR1C3对动物肝、肾等器官均有损害。AKR1C3对癌细胞生长抑制作用低于正常细胞。结论醛酮还原酶AKR1C3在E.coli BL21(DE3)中成功表达,并获得高纯度、高活性的酶,对细胞生长有抑制作用,对动物肝、肾等器官均有损害,为诊断及治疗多种癌症提供实验依据。

miR-185-5p靶向AKR1C1抑制肺癌细胞的迁移和侵袭

目的观察miR-185-5p对肺癌细胞迁移、侵袭的影响,分析酮还原酶1家族成员C1(AKR1C1)在miR-185-5p调控肺癌细胞迁移和侵袭中的作用。方法RT-qPCR检测miR-185-5p在组织样本(人肺癌及对应癌旁组织)、细胞系(人肺上皮细胞系BEAS-2B和肺癌细胞系A549、H460)中的表达。按照处理方式不同将A549细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-185-5p组(转染miR-185-5p)、miR-185-5p+pcDNA组(共转染miR-185-5p和pcDNA)、miR-185-5p+pcDNA-AKR1C1组(共转染miR-185-5p和pcDNA-AKR1C1);Transwell和划痕实验检测各组A549细胞迁移和侵袭;在线预测网站Starbase预测miR-185-5p的下游靶基因;双荧光素酶报告基因实验检测A549细胞荧光素酶活性;蛋白免疫印迹实验检测各组A549细胞中AKR1C1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的蛋白表达。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-185-5p的表达显著降低(P<0.001);与BEAS-2B细胞比较,A549和H460细胞中miR-185-5p的表达亦显著降低(均P<0.001);与miR-NC组比较,miR-185-5p组A549细胞的miR-185-5p表达显著升高,迁移和侵袭细胞数及划痕愈合率均显著降低(均P<0.001),MMP-2、MMP-9蛋白的表达均显著降低(均P<0.001)。Starbase预测显示miR-185-5p与AKR1C1之间存在连续的互补结合序列;与miR-NC组比较,miR-185-5p组AKR1C1-WT细胞的荧光素活性显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-185-5p组细胞中AKR1C1蛋白表达显著降低(P<0.05);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-185-5p组细胞中AKR1C1蛋白表达显著升高(P<0.05)。与癌旁组织比较,肺癌组织中AKR1C1 mRNA和蛋白表达均显著升高(均P<0.001);与BEAS-2B细胞比较,A549细胞中AKR1C1 mRNA和蛋白表达均显著升高(均P<0.001)。与miR-185-5p+pcDNA组比较,miR-185-5p+pcDNA-AKR1C1组miR-185-5p表达显著降低(P<0.001)、迁移和侵袭细胞数及划痕愈合率均显著升高(均P<0.001)、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均显著升高(均P<0.001)。结论miR-185-5p可抑制肺癌细胞的迁移、侵袭,该作用与miR-185-5p靶向负性调控AKR1C1有关。

miR-568通过下调AKR1B10表达影响胶质母细胞瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨微小RNA-568(miR-568)对胶质母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法 培养正常星形胶质细胞HA1800及胶质母细胞瘤细胞系(U251、T98G和SHG44)购自中国科学院上海细胞库,qRT-PCR检测细胞中miR-568和醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)mRNA表达,蛋白质印迹法(Western blotting)检测AKR1B10蛋白表达。以U251细胞为研究对象,构建上调miR-568或下调AKR1B10的U251细胞,MTT、流式细胞仪和Western blotting实验检测细胞增殖、凋亡及细胞中CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-568与AKR1B10调控关系。结果 胶质母细胞瘤细胞系(U251、T98G和SHG44)及HA1800细胞中miR-568表达分别为(1.01±0.09)、(0.39±0.03)、(0.58±0.05)及(0.46±0.04),AKR1B10 mRNA表达分别为(0.98±0.08)、(2.45±0.2)、(2.16±0.21)及(2.37±0.23),AKR1B10蛋白表达分别为(0.12±0.03)、(0.61±0.05)、(0.51±0.04)及(0.59±0.05),胶质母细胞瘤细胞系(U251、T98G和SHG44)中miR-568表达低于HA1800细胞(P<0.05),AKR1B10 mRNA和蛋白表达高于HA1800细胞(P<0.05)。上调miR-568或下调AKR1B10后,U251细胞增殖活性[(0.61±0.06)、(0.69±0.06)]、CyclinD1[(0.32±0.03)、(0.35±0.03)]和Bcl-2蛋白表达[(0.29±0.03)、(0.32±0.03)]降低(P<0.05),U251细胞凋亡率[(22.41±2.15)%、(21.26±2.14)%]、p21[(0.58±0.05)、(0.56±0.05)]和Bax蛋白表达[(0.72±0.07)、(0.67±0.07)]升高(P<0.05)。miR-568靶向结合并负调控AKR1B10。上调AKR1B10逆转了上调miR-568对U251细胞增殖和凋亡的影响。结论 上调miR-568通过靶向负调控AKR1B10抑制胶质母细胞瘤细胞增殖,并促进其凋亡。

AKR1B10表达与乳腺癌新辅助化疗的关系

目的检测AKR1B10在乳腺癌新辅助化疗前后的表达情况,分析其表达水平与新辅助化疗疗效的相关性,探讨AKR1B10蛋白是否与阿霉素类化疗药物耐药性相关,评价AKR1B10是否可以作为乳腺癌个体化化疗方案制定的预测指标。方法回顾性分析在郴州市第一人民医院确诊为乳腺癌并接受阿霉素类药物新辅助化疗的71例乳腺癌患者的临床资料。免疫组化检测新辅助化疗前、后AKR1B10蛋白的表达情况。对比分析AKR1B10与乳腺患者临床病理资料、新辅助化疗疗效的关系,MTT法检测阿霉素类药物处理对MCF-7/Vector和MCF-7/AKR1B10细胞增殖的抑制率。结果 (1)在71例乳腺癌患者新辅助化疗前组织样本中,AKR1B10的阳性表达率达到90.1%。化疗前AKR1B10的表达水平与肿块大小、淋巴结转移存在相关性(P<0.05),与年龄、远处转移之间不存在相关性(P>0.05);(2)盐酸吡柔比星对稳定表达AKR1B10的乳腺癌细胞系MCF-7/AKR1B10与对照组细胞增殖的抑制作用无显著差异。结论乳腺癌患者的AKR1B10表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移存在相关性,与乳腺癌患者接受阿霉素类药物新辅助化疗的疗效之间无相关性。

AKR1B10基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探索肝细胞癌(HCC)中醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)的生物学功能和相关的病理机制。方法通过CCLE数据库分析正常肝细胞与HCC细胞系中AKR1B10 mRNA的表达,UALCAN以及Oncomine数据库分析癌旁组织与HCC组织中AKR1B10 mRNA的表达,Western Blot法验证HCC患者癌组织与癌旁组织中AKR1B10蛋白表达差异。使用慢病毒分别敲减HepG2及Huh7细胞中的AKR1B10,分为对照组和AKR1B10敲减组(shAKR1B101#、shAKR1B102#)。采用AnnexinV-APC/PI双染法、细胞克隆实验、皮下移植肿瘤的方法检测敲减AKR1B10后HCC细胞凋亡、克隆形成、皮下成瘤体积的变化。过氧化物敏感性荧光探针DCFH-DA以及Western Blot检测敲减AKR1B10后HCC细胞内活性氧(ROS)以及p-ATMser1981、γ-H2AX、c-Caspase-3和c-RARP等蛋白的变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果CCLE数据库提示AKR1B10 mRNA在HCC细胞中的表达明显高于正常肝细胞;Oncomine数据库显示,与癌旁组织相比,HCC组织中AKR1B10 mRNA的表达增加了10倍以上;UALCAN数据库提示AKR1B10基因在HCC组织中高表达;本研究的6例HCC患者中AKR1B10在HCC组织中的表达高于癌旁组织。与对照组相比,AKR1B10敲减组中HCC细胞的克隆形成能力明显下降(P值均<0.001),细胞凋亡率明显增加(P值均<0.001)。与对照组相比,AKR1B10敲减组ROS的水平升高,DNA损伤指标p-ATMser1981、γ-H2AX蛋白,细胞凋亡指标c-Caspase-3和c-RARP蛋白增加。此外,在BALB-c/Nude小鼠模型中,从异体移植后第13天开始,与对照组相比,AKR1B10敲减组肿瘤体积明显缩小(P值均<0.05)。结论AKR1B10可能是治疗HCC的有效治疗靶标。

PI3K/AKT信号通路及AKR1C3在人瘢痕疙瘩形成中的作用机制研究

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路、活性氧簇(ROS)、醛酮还原酶家族1成员C3(AKR1C3)在瘢痕疙瘩形成中的可能作用及机制。方法从昆明医科大学第一附属医院皮肤科收集9例瘢痕疙瘩组织标本(男6例,女3例,年龄24~40岁),以及6例进行其他手术的志愿者正常皮肤组织标本(男4例,女2例,年龄20~45岁),部分行组织包埋,部分行成纤维细胞原代培养。(1)免疫组织化学检测瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中AKT(丝氨酸磷酸化位点473)[p-AKT(S473)]、AKT(苏氨酸磷酸化位点308)[p-AKT(T308)]和AKR1C3的蛋白相对表达量。(2)CCK-8法检测不同浓度(0、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50 mmol/L)PI3K特异性抑制剂2-吗啉代-8-苯基色酮(LY294002)对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制作用,并筛选出LY294002最佳的实验浓度。(3)以ROS检测试剂盒分别检测不同浓度(0、4、6、8、10、12 mmol/L)ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)和15 mmol/L LY294002对瘢痕疙瘩成纤维细胞内ROS水平的影响。(4)将瘢痕疙瘩或正常皮肤成纤维细胞分为对照组(正常培养不进行任何处理)、二甲基亚砜(DMSO)组(0.002%DMSO处理)、LY294002组(15 mmol/L LY294002处理)和NAC组(6 mmol/L NAC处理),定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法分别检测成纤维细胞中AKT mRNA、AKR1C3 mRNA及p-AKT(S473)、p-AKT(T308)和AKR1C3蛋白的表达水平。采用SPSS 20.0软件进行统计学分析,数据以±s表示,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两多重比较采用SNK-q检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果(1)免疫组织化学检测结果显示,瘢痕疙瘩组织中p-AKT(S473)、p-AKT(T308)和AKR1C3的蛋白表达水平分别为16.75±3.30、16.20±1.56、26.69±2.50,均显著高于正常皮肤组织的4.02±1.50、1.82±0.50、1.47±1.07(P<0.01)。(2)瘢痕疙瘩成纤维细胞经不同浓度LY294002干预24 h后,15~50 mmol/L LY294002组成纤维细胞增殖抑制率显著高于对照组(0 mmol/L组)(P<0.01)。LY294002最佳实验浓度为15 mmol/L。(3)不同浓度NAC作用于瘢痕疙瘩成纤维细胞1 h后,各组间ROS水平差异有统计学意义(P<0.01),且6 mmol/L NAC组ROS水平(0.72±0.03)最低。15 mmol/L LY294002组ROS水平显著低于对照组(0 mmol/L组)(0.80±0.01 vs.0.86±0.01,P<0.01)。(4)qPCR检测结果表明,瘢痕疙瘩成纤维细胞对照组中AKT、AKR1C3 mRNA表达量分别为1.38±0.09、1.40±0.05,明显高于正常皮肤成纤维细胞的0.97±0.10、0.98±0.03(P<0.01);经15 mmol/L LY294002处理后,瘢痕疙瘩成纤维细胞AKT mRNA表达量明显低于正常皮肤(0.73±0.05 vs.0.89±0.06,P<0.01);经6 mmol/L NAC处理后,瘢痕疙瘩成纤维细胞AKR1C3 mRNA低于正常皮肤(0.43±0.05 vs.0.86±0.03,P<0.01)。蛋白质印迹法检测结果显示,瘢痕疙瘩成纤维细胞中p-AKT(S473)、p-AKT(T308)、AKR1C3蛋白表达量分别为1.19±0.21、0.92±0.04、0.73±0.08,明显高于正常皮肤的0.24±0.06、0.33±0.05、0.31±0.05(P<0.01);经15 mmol/L LY294002和6 mmol/L NAC处理后,瘢痕疙瘩成纤维细胞中p-AKT(S473)蛋白表达量分别为0.92±0.04、0.80±0.20,p-AKT(T308)蛋白表达量分别为0.42±0.04、0.81±0.05,均明显高于正常皮肤(0.23±0.03、0.22±0.05,0.30±0.06、0.32±0.05),但瘢痕疙瘩成纤维细胞AKR1C3蛋白表达量(0.23±0.05)在15 mmol/L LY294002处理后低于正常皮肤(0.30±0.07),在6 mmol/L NAC处理后(0.33±0.07)高于正常皮肤(0.28±0.06)(P>0.05)。结论活化的PI3K/AKT信号通路和AKR1C3促进了瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及瘢痕疙瘩形成。同时,瘢痕疙瘩成纤维细胞内AKR1C3的升高可加速ROS升高。

AKR1B10蛋白在口腔癌中的研究进展

醛酮还原酶家族1成员B10 (AKR1B10)是一种在口腔癌组织中高表达,且与其不良预后相关的氧化还原酶。AKR1B10在正常胃肠道上皮组织中高表达,在其他正常组织中低表达,生理状态下具有解毒作用。有研究发现AKR1B10在乳腺癌、鼻咽癌、肝癌中表达上调,而在结直肠癌、胃癌中表达下调,且与其不良预后相关。口腔癌是全球最流行的恶性肿瘤之一,其预后差。局部晚期口腔癌极易发生局部复发及远处转移。该文就AKR1B10蛋白在口腔癌中作用的研究进展做一综述。