桂枝茯苓胶囊联合戈舍瑞林对子宫肌瘤大鼠模型醛酮还原酶1C3和内分泌的影响

目的观察桂枝茯苓胶囊联合戈舍瑞林对子宫肌瘤大鼠模型醛酮还原酶1C3(AKR1C3)和内分泌的影响。方法将36只7周龄雌性白细胞介素-2受体共同Υ链(IL2RG)大鼠随机分为空白对照组、模型对照组和联合治疗组,每组各12只。模型对照组和联合治疗组通过雌孕激素药物建立子宫肌瘤模型。造模结束后第2天,空白对照组和模型对照组予蒸馏水5 mL灌胃,联合治疗组予桂枝茯苓胶囊混悬液0.70 g/(kg·d)+戈舍瑞林1.25 mg/(kg·d)灌胃,连续6周。采用酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清雌二醇、孕酮和催乳素水平,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测AKR1C3 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测Ⅰ型胶原、转化生长因子β(TGF-β)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果与空白对照组相比,模型对照组雌二醇、孕酮和催乳素含量均升高(P<0.05);与模型对照组相比,联合治疗组雌二醇、孕酮和催乳素含量降低(P<0.05)。与空白对照组相比,模型对照组AKR1C3 mRNA表达含量升高(P<0.05);与模型对照组相比,联合治疗组AKR1C3 mRNA表达含量降低(P<0.05)。与空白对照组相比,模型对照组Ⅰ型胶原、PAI-1和TGF-β蛋白表达均升高(P<0.05);与模型对照组相比,联合治疗组Ⅰ型胶原、PAI-1和TGF-β蛋白表达均降低(P<0.05)。与空白对照组相比,模型对照组Caspase-3和Bax蛋白表达降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);与模型对照组相比,联合治疗组Caspase-3和Bax蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论桂枝茯苓胶囊联合戈舍瑞林能降低子宫肌瘤大鼠雌二醇、孕酮和催乳素水平,抑制AKR1C3表达,具有抗增殖和促凋亡的作用,可抑制子宫肌瘤生长。

醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)通过激活Wnt/β-catenin通路促进乳腺癌细胞增殖

目的探讨醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法在乳腺癌MCF-7细胞过表达AKR1B10、在BT-20细胞敲低AKR1B10,分别建立过表达以及敲低细胞系。利用CCK-8增殖实验检测过表达与敲低AKR1B10对乳腺癌细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织及配对正常组织AKR1B10 mRNA水平,Western blot法检测乳腺癌组织、过表达及敲低AKRB10的乳腺癌细胞AKR1B10、β联蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、存活蛋白(survivin)、c-Myc的蛋白水平。结果乳腺癌组织AKR1B10表达增加。过表达AKR1B10后,MCF-7乳腺癌细胞增殖加快,β-catenin、cyclin D1、c-Myc、survivin蛋白表达增加;敲低AKR1B10后,BT-20乳腺癌细胞增殖变慢,β-catenin、cyclin D1、c-Myc、survivin蛋白表达下降。结论AKR1B10在乳腺癌中高表达并通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞增殖。

醛酮还原酶1C2在肿瘤中的研究进展

醛酮还原酶1C2(AKR1C2)是一种依赖还原型辅酶Ⅱ(NADPH)将醛和酮的羟基还原为相应的醇的醛酮还原酶(AKRs),其具备3-α-羟基类固醇脱氢酶活性,能够以高亲和力结合胆汁酸。在三磷酸吡啶核苷酸存在的情况下,可将二氢睾酮还原成3α-二醇(3α-diol);但在氧化因子NAD+存在的情况下,又可将3α-二醇氧化为5α-二氢睾酮。AKR1C2在正常组织中含量极低,但在恶性肿瘤组织中表达异常,且与癌症患者的肿瘤特征和长期生存高度相关。AKR1C2作为对人体药物代谢和毒素解毒至关重要的一种酶,在化疗药物耐受性的敏感性方面具有重要作用。然而,以前关于AKR1C2在不同恶性肿瘤中的确切意义的研究结果不一致且存在争议,甚至不知道其是促癌因子或抑癌因子。因此本文主要就AKR1C2的功能,在肿瘤发生发展及在肿瘤化疗药物耐受性等方面进行综述。

醛酮还原酶家族1成员B10过表达的宫颈癌细胞株Hela增殖、周期、侵袭和迁移观察

目的观察醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)过表达的宫颈癌细胞增殖、周期侵袭和迁移情况。方法将Hela细胞分为观察组和对照组,观察组用慢病毒系统转染AKR1B10过表达质粒,对照组转染空质粒。采用Western blotting法检测两组细胞AKR1B10、p53、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、波形蛋白(Vimentin)蛋白;采用MTT法、克隆形成实验观察两组细胞增殖情况,结果分别用OD570、形成细胞克隆数量表示;采用流式细胞术检测两组细胞周期分布;采用划痕实验观察两组细胞迁移情况,结果以划痕愈合百分比表示;采用Transwell小室实验观察两组细胞侵袭情况,结果以穿膜细胞数表示。结果观察组细胞AKR1B10蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05)。MTT法测得继续培养24、48、72 h观察组细胞OD570均低于对照组(P均<0.05),克隆形成实验观察组克隆数量少于对照组(P<0.05)。与对照组相比,观察组G0~G1期细胞比例上升(P<0.05),G2~M期和S期细胞比例下降(P均<0.05)。观察组划痕愈合百分比低于对照组(P<0.05)。观察组穿膜细胞数低于对照组(P<0.05)。观察组p53蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05),MMP-2和Vimentin蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.05)。结论 AKR1B10过表达可抑制宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期于G0~G1期,p53、MMP-2和Vimentin途径可能在其中发挥作用。

醛酮还原酶家族1成员B10的功能及在肿瘤中的作用研究进展

醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)是一种醛酮还原酶,主要功能是还原醛酮类羰基化合物、促进脂质合成和调节视黄酸代谢。AKR1B10主要在小肠和结肠中表达,在其他正常组织中低表达或不表达。近年来研究表明AKR1B10与肿瘤关系密切,在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用,并且AKR1B10可能成为肿瘤诊断非常有价值的分子标记物以及靶向治疗肿瘤的新靶点。本文就AKR1B10的分子结构、功能、与肿瘤的关系以及在临床的应用等相关最新研究作一综述。

兔抗醛-酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备兔抗醛-酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法应用逆转录PCR法扩增AKR1B10全基因,将扩增产物连接到原核表达载体p ET-15b上,构建重组质粒p ET-15b-AKR1B10,将其转化至大肠杆菌E.coli DH5α中。用异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,表达产物经SDS-PAGE分析鉴定出阳性者进行克隆,扩大培养,提取重组蛋白,用His-tag纯化柱纯化重组蛋白。将纯化的重组蛋白皮下注射到新西兰白兔,加强免疫得到抗血清。用AKR1B10重组蛋白制备抗体纯化柱,从抗血清中纯化出抗AKR1B10多克隆抗体,并进行SDS-PAGE、ELISA、Western blot法鉴定。结果成功构建了重组质粒p ET-15b-AKR1B10,并获得高纯度的重组蛋白His-Tag-AKR1B10,制备的多克隆抗体相对特异性地识别AKR1B10。结论兔抗AKR1B10多克隆抗体制备成功,特异性较好。

醛酮还原酶1成员B1(AKR1B1)激活NF-κB通路诱导小鼠BV-2小胶质细胞活化抑制视网膜神经节细胞活性

目的探讨醛酮还原酶1成员B1(AKR1B1)在调控小胶质细胞极化中的机制及其对视网膜神经节细胞(RGC)活性的影响。方法利用脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞极化,分别利用AKR1B1小干涉RNA(siRNA)和抑制剂泊那司他(ponalrestat/Statil)作用BV-2细胞;实时定量PCR检测BV-2小胶质细胞AKR1B1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、环加氧酶2(COX2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表达,ELISA检测BV-2小胶质细胞培养上清液TNF-α、IL-1β含量。采用BV-2条件培养基处理原代RGC,免疫荧光细胞化学染色检测RGC脑特异性同源盒蛋白3a(Brn-3a)的表达以确定RGC活性,TUNEL染色检测RGC凋亡;Western blot法检测RGC核因子κBp65(NF-κBp65)、核因子κB抑制物激酶(IKK)蛋白磷酸化情况。结果LPS诱导BV-2细胞中TNF-α、IL-1β、COX2和iNOS的mRNA表达增加,培养液上清中TNF-α、IL-1β含量增加。BV-2细胞条件培养基导致RGC活力降低、凋亡增加;敲低AKR1B1后,可阻断BV-2细胞M1型极化,恢复RGC活力;敲低AKR1B1可阻断LPS诱导的IKK磷酸化和NF-κBp65的入核。结论AKR1B1可通过激活NF-κB通路诱导小胶质细胞的活化,进而降低RGC的活力并促进其凋亡。

醛酮还原酶1C3促进肿瘤发生发展与耐药的研究进展

醛酮还原酶1C3(Aldo-Keto Reductase Family 1 Member C3,AKR1C3)是可溶性NADPH还原酶,兼具有3α-羟基类固醇脱氢酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase,3α-HSD)、3β-HSD、17β-HSD和11-酮前列腺素还原酶活性,能催化雌激素、孕酮、雄激素和前列腺素代谢。AKR1C3在肿瘤组织中存在异常表达和单核苷酸多态性,与多种激素相关性肿瘤的发生、发展及耐药密切相关。研究显示,AKR1C3能够与雌激素受体(ER)、孕酮受体(PR)、雄激素受体(AR)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)等核受体结合,间接调控这些核受体的反式激活,影响细胞的活性。为了进一步了解AKR1C3对肿瘤发生发展的影响及其与肿瘤耐药的关系,本文对近年与AKR1C3相关肿瘤的研究进行综述。

醛酮还原酶AKR1C3介导乳腺癌阿霉素耐药的作用及其机制

为了探讨醛酮还原酶AKR1C3在乳腺癌阿霉素耐药中的作用,成功建立了阿霉素耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7/DOX以及AKR1C3稳定过表达和敲低的乳腺癌细胞株。Western blot发现MCF-7/DOX细胞内AKR1C3的表达水平明显高于敏感株MCF-7细胞。CCK-8细胞药物敏感实验和DAPI染色实验发现在AKR1C3高表达的细胞中,阿霉素的细胞毒性明显降低(IC50增加了6倍);集落形成实验也证实AKR1C3过表达细胞中,集落形成能力增高。进一步实验证实,AKR1C3介导的β-catenin入核增多是导致乳腺癌细胞阿霉素耐药的原因之一。应用β-catenin抑制剂XAV939,能够逆转AKR1C3诱导的阿霉素耐药。上述结果提示,AKR1C3可以作为逆转阿霉素耐药的潜在治疗靶标。

低剂量BPA和DEHP对成年大鼠前列腺AKR1C3的影响

目的 明确低剂量BPA和DEHP对成年大鼠前列腺AKR1C3的影响。方法 56只成年雄性SD大鼠随机分成7组,每组8只,分别灌胃给予BPA(10、30和90μg/kg),DEHP(30、90和270μg/kg)和溶媒,连续4周。动物于末次给药24 h后,麻醉后采血,剖取前列腺并分叶,利用ELISA法检测血清和前列腺中AKR1C3水平,利用免疫组化法分析各叶前列腺中AKR1C3的表达情况。结果 给予BPA后,腹侧前列腺90μg/kg剂量组AKR1C3表达显著性高于对照组(P<0.05);背侧前列腺10μg/kg剂量组AKR1C3水平和蛋白表达均显著性高于对照组(P<0.01,P<0.001)。给予DEHP后,270μg/kg剂量组血清AKR1C3水平显著性高于对照组(P<0.001),腹侧前列腺各组AKR1C3水平均显著性高于对照组(P<0.05,P<0.01),270μg/kg剂量组AKR1C3蛋白表达显著性高于对照组(P<0.05);背侧前列腺30μg/kg和90μg/kg剂量组AKR1C3表达显著性高于对照组(P<0.001,P<0.05)。结论 低剂量BPA和DEHP均能促进成年大鼠前列腺AKR1C3表达,但各叶前列腺对BPA和DEHP的敏感度有所不同。

染料木黄酮抑制AKR1C3抗去势抵抗前列腺癌的生长及其机制研究

目的:研究植物雌激素染料木黄酮(GEN)抑制AKR1C3的表达,进而抑制去势抵抗前列腺癌(CRPC)的生长,为染料木黄酮临床治疗CRPC提供理论依据。方法:在无激素的血清环境下培养22RV1、VCaP、RWPE-1细胞,以不同浓度(0、12.5、25、50、100μmol/L)的GEN处理48 h。利用CCK-8检测细胞增殖活性。通过AKR1C3 siRNA、AKR1C3抑制剂(ASP-9521)分别与GEN联合干扰22RV1、VCaP细胞,用Western blot检测细胞中PSA及AKR1C3蛋白的表达水平。结果:染料木黄酮能抑制去势抵抗前列腺癌的生长。Western blot结果显示,GEN能够抑制PSA、AKR1C3蛋白的表达,且与AKR1C3 siRNA、AKR1C3抑制剂(ASP-9521)联合作用时,对AKR1C3的抑制效果更为显著。结论:染料木黄酮可能通过抑制去势抵抗前列腺癌细胞中AKR1C3的表达,进而抑制CRPC细胞的增殖。

基于醛酮还原酶1C3的抗肿瘤药物研究进展

醛酮还原酶(aldo-keto reductase,AKR)1C3是AKR超家族的成员之一,在多种恶性实体瘤和血液肿瘤细胞中的表达水平高于正常细胞,并与癌症的发生和发展以及肿瘤对化疗/免疫疗法的耐药性和对放疗的抵抗性密切相关。研究已证明,AKR1C3既可以作为生物标志物,用于肿瘤病人筛选、指导用药和预后诊断,也可作为抗肿瘤药物的新靶标,用于药物设计和研发。基于AKR1C3的抗肿瘤药物有望为临床用药提供新的解决方案。回顾了近年来基于AKR1C3的抗肿瘤药物的研究进展,并对该研究领域进行了展望。

非小细胞肺癌组织中AKR1C3水平及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中醛酮还原酶1 C3(AKR1C3)表达及其临床意义。方法收集2013年1月至2016年3月88例手术切除的NSCLC组织及83例癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测上述组织中的AKR1C3表达水平,分析AKR1C3表达与NSCLC临床病理参数(性别、年龄、TNM分期、肿瘤大小、组织学类型及淋巴结转移)的关系;根据随访资料分析AKR1C3表达与预后的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)评价AKR1C3表达在NSCLC早期诊断中的效能。结果 NSCLC组AKR1C3表达水平为0.187±0.175,低于癌旁正常组织的1.079±0.384,差异有统计学意义(P<0.05);AKR1C3诊断NSCLC的曲线下面积为0.982(95%CI:0.966~0.998)。AKR1C3表达与NSCLC性别、年龄、组织学类型及淋巴结转移无关,与肿瘤大小及TNM分期有关。肿瘤大小>3 cm的AKR1C3表达量为0.095±0.055,低于肿瘤大小≤3 cm的0.340±0.201,而Ⅲ、Ⅳ期的AKR1C3表达量为0.094±0.058,低于Ⅰ、Ⅱ期的0.265±0.202,差异有统计学意义(P<0.05)。全组NSCLC患者的中位总生存期(OS)为17.60个月。AKR1C3高表达者的中位OS为20.60个月,高于低表达者的11.90个月,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅰ+Ⅱ期患者的中位OS为21.65个月,高于Ⅲ+Ⅳ期的16.20个月,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤大小≤3 cm者的中位OS为18.40个月,高于>3 cm者的15.70个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AKR1C3在NSCLC组织中表达降低,且与TNM分期、肿瘤大小及预后有关,可能与NSCLC发生发展有关,在NSCLC诊断及病情评估有一定价值。

miR-185-5p靶向AKR1C1抑制肺癌细胞的迁移和侵袭

目的观察miR-185-5p对肺癌细胞迁移、侵袭的影响,分析酮还原酶1家族成员C1(AKR1C1)在miR-185-5p调控肺癌细胞迁移和侵袭中的作用。方法RT-qPCR检测miR-185-5p在组织样本(人肺癌及对应癌旁组织)、细胞系(人肺上皮细胞系BEAS-2B和肺癌细胞系A549、H460)中的表达。按照处理方式不同将A549细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-185-5p组(转染miR-185-5p)、miR-185-5p+pcDNA组(共转染miR-185-5p和pcDNA)、miR-185-5p+pcDNA-AKR1C1组(共转染miR-185-5p和pcDNA-AKR1C1);Transwell和划痕实验检测各组A549细胞迁移和侵袭;在线预测网站Starbase预测miR-185-5p的下游靶基因;双荧光素酶报告基因实验检测A549细胞荧光素酶活性;蛋白免疫印迹实验检测各组A549细胞中AKR1C1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的蛋白表达。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-185-5p的表达显著降低(P<0.001);与BEAS-2B细胞比较,A549和H460细胞中miR-185-5p的表达亦显著降低(均P<0.001);与miR-NC组比较,miR-185-5p组A549细胞的miR-185-5p表达显著升高,迁移和侵袭细胞数及划痕愈合率均显著降低(均P<0.001),MMP-2、MMP-9蛋白的表达均显著降低(均P<0.001)。Starbase预测显示miR-185-5p与AKR1C1之间存在连续的互补结合序列;与miR-NC组比较,miR-185-5p组AKR1C1-WT细胞的荧光素活性显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-185-5p组细胞中AKR1C1蛋白表达显著降低(P<0.05);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-185-5p组细胞中AKR1C1蛋白表达显著升高(P<0.05)。与癌旁组织比较,肺癌组织中AKR1C1 mRNA和蛋白表达均显著升高(均P<0.001);与BEAS-2B细胞比较,A549细胞中AKR1C1 mRNA和蛋白表达均显著升高(均P<0.001)。与miR-185-5p+pcDNA组比较,miR-185-5p+pcDNA-AKR1C1组miR-185-5p表达显著降低(P<0.001)、迁移和侵袭细胞数及划痕愈合率均显著升高(均P<0.001)、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均显著升高(均P<0.001)。结论miR-185-5p可抑制肺癌细胞的迁移、侵袭,该作用与miR-185-5p靶向负性调控AKR1C1有关。

不同分期前列腺癌组织中AKR1C3的表达

目的检测不同分期前列腺癌组织中AKR1C3的表达,分析AKR1C3表达水平与前列腺癌进展之间的关系。方法收集46例人前列腺良性增生及前列腺癌穿刺组织样本,免疫组织化学染色方法检测AKR1C3的表达,以Gleason评分分析AKR1C3表达平与前列腺癌进程的关系。结果在正常前列腺上皮、和良性前列腺增生组织内AKR1C3呈低表达,在前列腺癌组织内随着Gleason评分的升高,AKR1C3表达逐渐升高。结论 AKR1C3的表达水平与Gleason评分呈正相关性,提示AKR1C3可作为评价前列腺癌恶性程度的指标。

醛酮还原酶1C2和组织蛋白酶D在膀胱移行细胞癌中的超表达及意义

目的:探讨醛酮还原酶1C2(AKR1C2)和组织蛋白酶D(cathepsinD)在膀胱移行细胞癌中的表达及其与膀胱癌病理分级、临床分期的关系。方法:应用免疫组织化学的方法检测AKR1C2和cathepsinD在40例膀胱癌组织和5例正常膀胱组织中的表达,并对比两者表达相关性。结果:40例膀胱癌中AKR1C2阳性表达率为80%,cathepsinD阳性表达率为90%,cathepsinD蛋白表达与膀胱癌病理分级、临床分期呈正相关(r=0.308),AKR1C2蛋白表达在不同膀胱癌病理分级中差异有统计学意义(P<0.05)。AKR1C2蛋白在不同临床分期之间表达差异无统计学意义。结论:结论:AKR1C2和cathepsinD表达特征可以作为膀胱移行细胞癌的诊断和判断预后的参考指标。

MicroRNA-6852靶向调控LEF1/AKR1C3轴对结肠癌细胞SW480放疗敏感性的影响

目的探究microRNA-6852(miR-6852)对结肠癌细胞SW480放疗敏感性的作用及其可能的作用机制。方法体外培养人正常结肠上皮细胞HCoEpiC和人结肠癌细胞SW480,X射线满射野照射细胞。使用miRNA阴性对照(miR-NC)、过表达载体阴性对照(oe-NC)、shRNA阴性对照(sh-NC)、miR-6852-mimic、淋巴细胞增强因子(LEF1)过表达载体(oe-LEF1)和醛酮还原酶1C3(AKRIC3)特异性shRNA(sh-AKR1C3)转染细胞。qRT-PCR和Western blot检测细胞miR-6852、LEF1和AKR1C3表达;荧光素酶报告基因实验检测miR-6852和LEF1、LEF1和AKR1C3的靶向结合;5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(EdU)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;染色质免疫沉淀技术-聚合酶链式反应(ChIP-PCR)检测LEF1对AKR1C3启动子区域的靶向结合。结果与HCoEpiC组相比,SW480组细胞中miR-6852表达明显降低(P<0.05),LEF1mRNA和蛋白表达、AKR1C3mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。与空白对照组相比,2Gy组、4Gy组和6Gy组SW480细胞中miR-6852表达明显降低(P<0.05),LEF1mRNA和蛋白表达、AKR1C3mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。与miRNC+oe-NC+6Gy组相比,miR-6852-mimic+oe-NC+6Gy组SW480细胞EdU阳性细胞数明显降低(P<0.05),而凋亡率明显升高(P<0.05);与miR-6852-mimic+oe-NC+6Gy组相比,miR-6852-mimic+oe-LEF1+6Gy组EdU阳性细胞数明显升高(P<0.05),而细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与oe-NC+sh-NC+6Gy组相比,oeLEF1+sh-NC+6Gy组SW480细胞EdU阳性细胞数明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与oe-LEF1+sh-NC+6Gy组相比,oe-LEF1+sh-AKR1C3+6Gy组EdU阳性细胞数明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论miR-6852靶向调控LEF1/AKR1C3轴,增加结肠癌细胞SW480对放疗的敏感性。

醛酮还原酶AKR1C3基因的原核表达及其生物学活性

目的原核表达醛酮还原酶AKR1C3基因,并探讨其生物学活性。方法经人工合成醛酮还原酶AKR1C3基因,克隆至质粒p ET-15b中,构建重组表达质粒p ET-15b-AKR1C3,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析镍柱纯化。采用荧光分光法检测酶活性,确定AKR1C3的最适底物,并检测金属离子对酶活的影响。用纯化蛋白分别免疫BALB/c小鼠和新西兰大耳白兔,ELISA法检测动物血清中抗体水平,并对免疫后的兔进行血常规和生化检验,对兔和小鼠进行病理学检查。采用MTT法进行细胞毒理试验。结果重组质粒p ET-15b-AKR1C3经双酶切及PCR鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约36 000,可溶性蛋白占菌体总蛋白的27%,纯化后纯度达95%以上。睾丸酮为AKR1C3最适底物,酶活为100.086 U;金属离子Cu2+、K+可提高AKR1C3酶活;小鼠血清中最高效价为5×104,兔血清中最高效价为6.25×104。AKR1C3对动物肝、肾等器官均有损害。AKR1C3对癌细胞生长抑制作用低于正常细胞。结论醛酮还原酶AKR1C3在E.coli BL21(DE3)中成功表达,并获得高纯度、高活性的酶,对细胞生长有抑制作用,对动物肝、肾等器官均有损害,为诊断及治疗多种癌症提供实验依据。

miR-568通过下调AKR1B10表达影响胶质母细胞瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨微小RNA-568(miR-568)对胶质母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法 培养正常星形胶质细胞HA1800及胶质母细胞瘤细胞系(U251、T98G和SHG44)购自中国科学院上海细胞库,qRT-PCR检测细胞中miR-568和醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)mRNA表达,蛋白质印迹法(Western blotting)检测AKR1B10蛋白表达。以U251细胞为研究对象,构建上调miR-568或下调AKR1B10的U251细胞,MTT、流式细胞仪和Western blotting实验检测细胞增殖、凋亡及细胞中CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-568与AKR1B10调控关系。结果 胶质母细胞瘤细胞系(U251、T98G和SHG44)及HA1800细胞中miR-568表达分别为(1.01±0.09)、(0.39±0.03)、(0.58±0.05)及(0.46±0.04),AKR1B10 mRNA表达分别为(0.98±0.08)、(2.45±0.2)、(2.16±0.21)及(2.37±0.23),AKR1B10蛋白表达分别为(0.12±0.03)、(0.61±0.05)、(0.51±0.04)及(0.59±0.05),胶质母细胞瘤细胞系(U251、T98G和SHG44)中miR-568表达低于HA1800细胞(P<0.05),AKR1B10 mRNA和蛋白表达高于HA1800细胞(P<0.05)。上调miR-568或下调AKR1B10后,U251细胞增殖活性[(0.61±0.06)、(0.69±0.06)]、CyclinD1[(0.32±0.03)、(0.35±0.03)]和Bcl-2蛋白表达[(0.29±0.03)、(0.32±0.03)]降低(P<0.05),U251细胞凋亡率[(22.41±2.15)%、(21.26±2.14)%]、p21[(0.58±0.05)、(0.56±0.05)]和Bax蛋白表达[(0.72±0.07)、(0.67±0.07)]升高(P<0.05)。miR-568靶向结合并负调控AKR1B10。上调AKR1B10逆转了上调miR-568对U251细胞增殖和凋亡的影响。结论 上调miR-568通过靶向负调控AKR1B10抑制胶质母细胞瘤细胞增殖,并促进其凋亡。

醛酮还原家族1B10蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:研究醛酮还原家族1B10(AKR1B10)蛋白在非小细胞肺癌中的表达情况及其与患者临床病理特征间的关系。方法:应用免疫组化法检测90例非小细胞肺癌组织及其配对的癌旁组织中AKR1B10的表达。结果:AKR1B10在肺鳞状细胞癌(鳞癌)组织中的阳性表达率为60.5%(23/38),在腺癌组织中阳性表达率为4.3%(2/46),而在癌旁非肿瘤组织中无表达。肿瘤组织中,AKR1B10蛋白表达情况与患者的性别及肿瘤病理类型有关(P<0.05),而与患者的年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移及肿瘤分期等临床病理特征间无相关性(P>0.05)。结论:AKR1B10蛋白在肺鳞癌组织中呈高表达,考虑其可能在肺鳞癌的发生和发展中起重要作用,可作为支气管肺鳞癌潜在的诊断标志物及治疗靶点。