釉丛蛋白1表达对结直肠腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探究釉丛蛋白1(TUFT1)表达对结直肠腺癌细胞(HCT-15)增殖、凋亡及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:2019年3月至2021年5月,20例结直肠癌(CRA)患者癌组织及相应癌旁组织。将HCT-15细胞分为对照组、siRNA-NC组、siRNA-TUFT1组、siRNA-TUFT1+IGF-1(PI3K/Akt通路激活剂25 ng/mL)组;实时荧光定量PCR检测组织及细胞中TUFT1表达;CCK-8法、克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;Western blot检测组织及细胞中增殖、凋亡及PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果:与癌组织相比,癌旁组织中TUFT1 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);与对照组相比,siRNA-TUFT1组细胞增殖抑制率、G0/G1期细胞、细胞凋亡率、Caspase-3、Bax表达水平显著增加,而c-Myc、Cyclin D1表达水平、克隆细胞数、S期和G2/M期细胞、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt水平显著降低(P<0.05);IGF-1可逆转TUFT1沉默对上述指标的影响。结论:TUFT1表达沉默可能通过抑制PI3K/Akt通路激活来抑制HCT-15细胞增殖、促进凋亡。

过量氟对大鼠切牙釉丛蛋白表达的影响

目的研究过量氟对大鼠切牙发育过程中釉丛蛋白表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法选择20只Wistar大鼠,随机分成两组:对照组(蒸馏水组)和实验组(100mg/LF-)。复制大鼠氟斑牙模型。饲养8周处死动物,利用免疫组化和实时荧光定量PCR(Real-TimePCR)方法观察过量氟对大鼠切牙中釉丛蛋白表达的影响。结果免疫组化结果显示釉丛蛋白在分泌前期和分泌期的成釉细胞中呈阳性表达。实验组釉丛蛋白的表达明显弱于对照组,存在显著性差异(P<0.01)。Real-TimePCR结果显示釉丛蛋白mRNA在对照组表达明显高于在实验组表达水平(P<0.01)。结论过量氟可能通过抑制釉丛蛋白的表达,从而影响釉质的矿化,导致釉质发育障碍。

小鼠釉丛蛋白成熟肽编码区cDNA克隆

目的 :克隆小鼠釉丛蛋白 (tuftelin)成熟肽编码区基因。方法 :设计引物 ,以小鼠牙胚cDNA文库为模板 ,利用PCR方法 ,扩增出小鼠釉丛蛋白成熟区的基因片段 (约 12 0 0bp) ,将所得基因片段插入pBS质粒载体 ,转化到大肠杆菌XL - 1-Blue后挑选阳性克隆 ,提取重组质粒DNA ,通过限制性酶切和部分核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果 :重组质粒pBS -tuftelin的酶切图谱和序列分析结果与国外文献报道一致。结论 :克隆到小鼠釉丛蛋白成熟肽编码区基因。

小鼠釉丛蛋白在大肠杆菌中的表达,纯化及抗血清的制备

目的 :以大肠杆菌为工程菌制备釉丛蛋白 ,纯化并免疫制备抗血清。方法 :用酶切、连接的方法将已克隆至 pBluescriptKS +载体中的TuftelincDNA片段 (编码 36 5个氨基酸 )用T4DNA连接酶连入载体pPRoEXTMHTc中 ,转化大肠杆菌 ,IPTG诱导。收集菌体 ,裂解后SDS -PAGE电泳 ,表达出分子量Mr 4 2×10 3 的融合蛋白。割胶后免疫新西兰大白兔 ,制备抗体。结果 :表达出分子量Mr 4 2× 10 3 的融合蛋白与预期一致。 8周以后 ,Western检测抗原抗体特异性及抗体效价达 1:10 0 0 0 0。结论 :认为成功的表达出釉丛蛋白并制备出了高效价多克隆抗体。

小鼠釉丛蛋白基因不同mRNA剪接体的克隆

目的 :克隆小鼠釉丛蛋白基因不同mRNA剪接体 ,分析小鼠釉丛蛋白的多态性。方法 :采用异硫酸氰胍一步法从新生小鼠磨牙牙胚组织中提取总RNA ,反转录成cDNA第一链 ,经PCR扩增出小鼠釉丛蛋白基因特异片段 ,插入pBS质粒 ,筛选阳性克隆 ,并经酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果 :克隆T1序列与已发表的完整釉丛蛋白mRNA序列一致。克隆T2序列与完整釉丛蛋白mRNA序列比较 ,缺失序列的 84～15 8的 75个碱基片段。结论 :小鼠釉丛蛋白基因在转录mRNA时 ,可产生不同的剪接体。

癌胚性TUFT1异常表达与HBV相关肝细胞癌的研究进展

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的预防、早期诊断及精准治疗仍是亟需攻克的难题。肝炎病毒(HBV or HCV)慢性持续性感染、化学致癌物摄入和非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)等与HCC进展密切相关。最新发现,在牙釉质发育和矿化中起重要作用的釉丛蛋白(Tuftelin,TUFT1)异常转录,在人体组织中广泛分布。TUFT1作为酸性、磷酸化糖蛋白可促进肿瘤进展与转移。然而,TUFT1表达与HCC的研究报道尚不多见。本文综述了TUFT1基因结构、组织分布与肿瘤的关系,重点分析其在HBV-HCC进展中作用及其应用前景。

宫颈癌组织TUFT1、TRPM7表达及临床意义

目的:探讨宫颈癌组织釉丛蛋白1(TUFT1)、瞬时受体电位M7(TRPM7)的表达及临床意义。方法:收集本院2019年1月至2021年1月间住院手术的110例宫颈癌患者术中切除的宫颈癌组织标本及癌旁组织标本,免疫组化法检测TUFT1、TRPM7的表达;Kaplan-Meier法分析TUFT1、TRPM7表达水平与预后的关系;Spearman相关分析TUFT1、TRPM7表达的相关性;Cox回归分析患者预后的影响因素。结果:宫颈癌组织较癌旁组织中TUFT1、TRPM7阳性率均增加(P<0.05);低分化、肿瘤直径≥4 cm、国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅱ+Ⅲ期的患者TUFT1、TRPM7表达阳性率高于中高分化、肿瘤直径<4 cm、FIGO分期Ⅰ期患者(P<0.05);宫颈癌组织TUFT1与TRPM7的表达水平呈正相关(r=0.445,P<0.05);TUFT1阳性表达患者3年生存率(53.66%,44/82)低于TUFT1阴性表达患者(78.57%,22/28)(χ^(2)=4.679,P=0.031);TRPM7阳性表达患者3年生存率(40.98%,25/61)低于TRPM7阴性表达患者(83.67%,41/49)(χ^(2)=19.290,P<0.001);TUFT1、TRPM7是宫颈癌患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论:TUFT1、TRPM7在宫颈癌组织中高表达,二者与患者3年预后有密切联系,可能成为预后判断的重要生物指标。

癌胚性TUFT1过表达及基因转录干预对肝细胞癌的抑制作用

目的分析肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)釉丛蛋白(tuftelin,TUFT1)表达及基因转录干预的抑制作用。方法收集术后HCC组织和癌旁组织,分析TUFT1表达;从不同肝癌细胞和对照肝LO2细胞株中提取TUFT1,以免疫印迹法筛选TUFT1低或过表达的癌细胞株;将已构建含TUFT1基因或干扰TUFT1-shRNA3的慢病毒质粒,分别转染低或过表达TUFT1的癌细胞株,以CCK-8法、划痕、Transwell法、流式细胞术等分析细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为;将稳定表达TUFT1的两种细胞株皮下接种裸鼠,分析对移植瘤生长的影响。结果肝癌组织TUFT1过表达,主要定位于细胞浆和细胞膜。肝癌组TUFT1阳性率为87.1%,均显著高于癌旁组(χ^(2)=18.563,P<0.001);肝癌细胞株中TUFT1表达明显高于LO2细胞(P<0.001)。体外研究,以有效的TUFT1-shRNA3质粒,转染高TUFT1表达的MHCC-97H细胞,在TUFT1功能丧失后癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著抑制,凋亡率升高;以插入TUFT1基因的质粒,转染低TUFT1表达的Hep3B细胞,在TUFT1功能获得后癌细胞增殖、侵袭和迁移能力均显著增强。体内研究,将功能丧失的MHCC-97H细胞于裸鼠皮下接种,移植瘤中TUFT1下调,并显著抑制瘤体生长(Z=12.000,P<0.01)。结论TUFT1为癌胚性蛋白,对其干预有望成为潜在的HCC治疗的分子靶目标。

HBV相关肝癌组织中釉丛蛋白表达及其临床价值

目的分析肝细胞癌(HCC)组织中釉丛蛋白(TUFT1)表达及其临床意义。方法分析TCGA数据库和Oncomine数据库中,有关肝癌及非癌组织TUFT1 mRNA表达的生物信息资料。经伦理委员会批准以自身配对法收集2009年1月至2014年12月住院的132例HCC患者术后癌及癌旁组织,用组织芯片和免疫组织化学法(IHC)分析肝组织中TUFT1表达情况。按IHC染色强弱程度将肝癌分为高TUFT1表达组和低/不表达组,结合临床资料进行组内及组间统计学分析临床病理特征,以及对5年总体生存期(OS)和无病生存期(DFS)进行相关性分析。对数据进行U检验、单因素与多因素回归分析及Kaplan-Meier生存分析。结果IHC染色显示癌组织TUFT1定位于细胞质中和细胞膜上,其表达阳性率在肝癌组为87.1%,显著高于癌旁组的64.4%(χ^(2)=18.563,P<0.001)。肝癌患者TUFT1表达强度与HBeAg阳性(χ^(2)=4.080,P=0.043)、瘤体大小(χ^(2)=9.388,P=0.002)、伴有血管侵犯(χ^(2)=14.885,P<0.001)、TNM分期(χ^(2)=13.516,P<0.001)及患者伴腹水(χ^(2)=5.940,P=0.015)等显著相关;高TUFT1表达与患者的OS和DFS均呈负相关(P<0.001)关系。结论TUFT1过表达与HBV复制、血管侵犯及预后差密切相关,有望成为肝癌诊断与预后的有用标志物。

直肠癌组织中miR-128-3p、TUFT1表达与患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨直肠癌组织中微小RNA-128-3p(miR-128-3p)、釉丛蛋白1(TUFT1)的表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取102例直肠癌患者,实时荧光定量PCR法检测癌组织和癌旁组织中miR-128-3p、TUFT1 mRNA表达。Pearson相关法分析直肠癌组织中miR-128-3p与TUFT1 m RNA表达的相关性,并分析二者与患者病理特征的关系。随访3年,统计患者生存情况,根据直肠癌组织中miR-128-3p、TUFT1 mRNA表达均值将患者分为高、低表达组,用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,比较累积生存率;用多因素Cox回归分析直肠癌患者死亡的影响因素。结果与癌旁组织比较,直肠癌组织中miR-128-3p表达低,TUFT1 mRNA表达高(P均<0.05)。直肠癌组织中miR-128-3p与TUFT1 mRNA表达呈负相关(r=-0.752,P<0.05)。直肠癌组织中miR-128-3p、TUFT1 mRNA表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤最大径无关(P均>0.05)。102例直肠癌患者随访3年,死亡30例。miR-128-3p高表达组3年累积生存率高于其低表达组(P<0.05),TUFT1 mRNA高表达组3年累积生存率低于其低表达组(P<0.05)。直肠癌患者死亡的独立危险因素为低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、TUFT1 mRNA高表达,独立保护因素为miR-128-3p高表达(P均<0.05)。结论直肠癌组织中miR-128-3p低表达,TUFT1 mRNA高表达,二者表达变化与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关。

TUFT1在直肠癌组织中表达及其临床诊断和预后价值

目的探究釉丛蛋白1(TUFT1)在直肠癌组织中的表达水平及其对直肠癌的诊断和预后价值。方法利用Ualcan数据库分析TUFT1 mRNA在正常直肠组织及直肠癌组织中的表达水平;选取2014年12月~2018年4月新乡市第一人民医院诊治的77例直肠癌患者为研究对象,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定直肠癌组织、癌旁正常组织TUFT1 mRNA表达水平;分析直肠癌组织TUFT1 mRNA表达水平与直肠癌患者临床病理特征的关系;受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价直肠组织TUFT1 mRNA表达水平对直肠癌的诊断价值;Kaplan-Meier生存曲线分析直肠癌组织TUFT1 mRNA表达水平与直肠癌患者预后的关系;COX回归分析影响直肠癌患者预后的因素。结果Ualcan数据库分析显示,直肠癌组织TUFT1 mRNA表达水平高于正常直肠组织(P<0.05);qRT-PCR法检测显示,直肠癌组织TUFT1 mRNA表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05);直肠癌组织TUFT1 mRNA表达水平与直肠癌患者淋巴结转移、TNM分期、分化程度相关(P<0.05);直肠组织TUFT1 mRNA表达水平诊断直肠癌的曲线下面积(AUC)为0.889,其截断值为1.59,此时敏感度为83.1%,特异性为87.0%;TUFT1 mRNA低表达组直肠癌患者总生存率高于TUFT1 mRNA高表达组(P<0.05);淋巴结转移、TNM分期、TUFT1 mRNA是影响直肠癌不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论直肠癌患者癌组织中TUFT1 mRNA表达水平较高,均与淋巴结转移、TNM分期、分化程度及预后相关,TUFT1 mRNA可作为诊断直肠癌、评估患者预后的潜在指标。

肝癌组织TPX2、TUFT1、Vimentin表达与癌细胞恶性生物学行为的关系及预测远处转移的价值研究

目的:探讨肝癌组织爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)、釉丛蛋白1(TUFT1)、波形蛋白(Vimentin)表达与癌细胞恶性生物学行为的关系及预测远处转移的价值。方法:选取2018年1月~2020年4月收治的51例肝癌远处转移患者为观察组,51例肝癌无远处转移患者为对照组,比较两组患者一般资料、TPX2 mRNA、TUFT1和Vimentin蛋白、癌细胞恶性生物学行为指标[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA、survivin mRNA、Bax mRNA、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA],分析TPX2 mRNA、TUFT1和Vimentin蛋白之间及与癌细胞恶性生物学行为指标、病理特征的相关性,并分析TPX2 mRNA、TUFT1和Vimentin蛋白预测远处转移的价值。结果:观察组患者TPX2 mRNA、TUFT1和Vimentin蛋白表达高于对照组患者(P<0.05)。TPX2 mRNA与TUFT1、Vimentin蛋白呈正相关,TUFT1蛋白与Vimentin蛋白呈正相关(P<0.05)。TPX2 mRNA、TUFT1蛋白、Vimentin蛋白与Bcl-2 mRNA、survivin mRNA均呈正相关,与Bax mRNA、caspase-3 mRNA均呈负相关(P<0.05)。TPX2 mRNA、TUFT1蛋白、Vimentin蛋白与肿瘤T、N分期呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05)。TPX2 mRNA、TUFT1、Vimentin联合预测肝癌远处转移的AUC最大,为0.932。结论:肝癌组织TPX2、TUFT1、Vimentin表达与癌细胞恶性生物学行为存在一定相关性,早期采用三者联合检测方式,有望成为临床预测肝癌远处转移、制定恰当治疗方案的新途径。

TUFT1在恶性肿瘤中的研究进展

釉丛蛋白1(TUFT1)作为一种多功能的牙釉质相关蛋白质,最早发现其在牙釉质的结构形成和矿化过程中起主要作用,随后发现其也参与体内多种生理和病理过程。其中,TUFT1在多种恶性肿瘤中表达上调,能作为一种癌基因促进恶性肿瘤增殖和转移、抑制细胞凋亡,在恶性肿瘤的发生发展过程发挥重要作用。靶向TUFT1可抑制恶性肿瘤进展以及逆转化疗耐药性。此外,TUFT1在恶性肿瘤预后评估中也显示出潜在的应用价值,有望成为新的潜在治疗靶点以及预后评估的分子标志物。

怎样突破带分数减法中的教学难点

在考试和平时的练习中,有关退位带分数减法的计算出现较多的错误.怎样突破这一教学难点?可分三步进行.第一步:做好铺垫,分散难点.1 1=2/2=3/3=4/4……提问:1化成假分数,它的个数是有限的还是无限的?1化成的假分数有什么特点?2、4=3(()/4),7=6(()/5),6=4(()/7).3、7(3/8)=6(()/8),5(5/9)=4(()/9),4(7/10)=2(()/10),2(1/4)=1(()/12)提问:等号右边是带分数吗?这是一种什么形式?第二步:注重过程,口答算理.1、整数减带分数的式题计算.出示例3:计算5-2(1/3).(发散思维训练)师问:谁能说出计算的思考过程?甲生:因为减数2(1/3)是由2和1/3组成,先从5里减去2得3,再从3里减去1/3得2(2/3).具体算式:5-2(1/3)=5-2-1/3=3-1/3=2(2/3).乙生:把被减数5看作4+1,具体算式:5-2(1/3)=(4-2)+(1-1/3)=2+2/3=2(2/3).