釉基质蛋白衍生物辅助治疗牙龈退缩临床效果的系统评价

目的对釉基质蛋白衍生物(enamel matrix derivative,EMD)辅助结缔组织瓣(connective tissue graft,CTG)治疗牙龈退缩的临床效果进行评价。方法通过检索The Cochrane Library、PubMed、EMbase、Web of Sci⁃ence、万方公共数据库、VIP数据库和中国知网数据库,搜索有关EMD辅助CTG治疗牙龈退缩的随机对照试验(randomized controlled trial,RCT),检索时间由建库至2022年9月23日,试验组为EMD+CTG,对照组为单纯采用CTG。应用Review Manager 5.4.1及Stata12.0软件进行Meta分析。结果Meta分析结果显示,试验组仅在治疗后12个月在探诊深度(probing depth,PD)及临床附着丧失(clinical attachment loss,CAL)这两个结局指标上优于对照组,差异有统计学意义[MD_(PD)=-0.10,95%CI(-0.19,-0.01),P=0.03],[MD_(CAL)=-0.38,95%CI(-0.71,-0.04),P=0.03];其余指标试验组和对照组均无显著差异。结论EMD辅助CTG治疗牙龈退缩对PD及CAL的减少存在益处。

壳聚糖温敏凝胶负载釉基质蛋白对骨髓基质细胞的作用

目的:探讨在壳聚糖温敏凝胶支架材料中釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphate,ALP)活性的影响。方法:合成壳聚糖温敏凝胶并加入适当浓度的EMPs,通过考马斯亮蓝试剂盒检测其对EMPs的缓释作用。用全骨髓培养法获得大鼠BMSCs,含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代培养。含EMPs浓度分别为0、50、100、150μg/mLDMEM培养液培养第3代大鼠BMSCs,MTT法测定各组细胞的增殖活性。MTT法及ALP试剂盒检测大鼠BMSCs在负载100μg/mLEMPs及不负载EMPs的壳聚糖温敏凝胶支架材料中的增殖情况及ALP的活性。采用SPSS11.0软件包对实验数据进行单因素方差分析及两样本t检验。结果:EMPs可在壳聚糖温敏凝胶中持续释放3周以上。DMEM培养液中,50μg/mLEMPs组从实验的第3天开始,显著促进大鼠BMSCs的增殖(P<0.01)。壳聚糖温敏凝胶负载100μg/mLEMPs后,于实验的第3天和第5天明显促进大鼠BMSCs的增殖(P<0.05)并且在实验的第7天(P<0.05)和第9天(P<0.01)显著促进大鼠BMSCsALP水平的提高。结论:壳聚糖温敏凝胶对EMPs具有缓释性,负载EMPs后,可以促进大鼠BMSCs增殖,提高ALP的活性。

釉基质蛋白联合骨髓基质细胞促进牙周再生

目的探讨以骨髓基质细胞(BMSCs)为种子细胞,以釉基质蛋白(EMPs)为生长因子,利用组织工程技术修复牙周骨缺损的可行性。方法选取2只健康雄性恒河猴,体外分离髂骨BMSCs并传代培养,第3代细胞与Bio-oss胶原复合。动物双侧上、下后牙区,分别制备人工水平型牙周骨缺损模型,分为空白对照组、单纯材料组、细胞/材料组和细胞/材料/EMPs组,8周时取材进行组织学和Micro-CT观察分析。结果空白对照组为纤维结缔组织形成;单纯材料组可见牙槽骨新生;细胞/材料组可见牙周再生,但新生的牙骨质较少且不规则;细胞/材料/EMPs组新生牙槽骨较多,有规则且连续的牙骨质形成。结论以BMSCs为种子细胞联合EMPs诱导,能显著促进牙周组织再生。

猪釉基质蛋白的提取及N末端氨基酸序列分析

目的：从猪牙胚提取釉基质蛋白并做氨基酸测序，为进一步研究釉基质蛋白诱导牙周组织再生的生物活性奠定基础。方法：选择乙酸提取法获得釉基质蛋白，采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和印迹膜测序法分析Ｎ末端氨基酸序列。结果：提取的釉基质蛋白分子量条带主要位于２０ＫＤａ以下，优势条带为２０ＫＤａ、１３ＫＤａ、５ＫＤａ。２０ＫＤａ、５ＫＤａ釉基质蛋白Ｎ末端前１０个氨基酸残基均为：Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ。结论：乙酸提取法可获得典型的釉原蛋白。印迹膜测序法简易、快速、敏感。

釉基质蛋白对体外培养的兔骨髓基质细胞生物学功能的影响

目的 :观察釉基质蛋白对兔骨髓基质细胞增殖、碱性磷酸酶活性、总蛋白合成等一般生物学功能的影响。方法 :MTT法检测细胞增殖能力 ,酶动力法检测细胞碱性磷酸酶活性 ,利用Biophotometer生物检测仪检测细胞总蛋白合成能力。结果 :釉基质蛋白可以促进骨髓基质细胞的增殖、提高细胞的碱性磷酸酶活性和总蛋白合成能力 ,以 10 0mg/L釉基质蛋白的促进作用最明显。釉基质蛋白促进细胞增殖、提高细胞碱性磷酸酶活性、促进细胞总蛋白合成的作用分别在 12 0h、72h、16 8h时最明显。结论 :釉基质蛋白对兔骨髓基质细胞增殖、碱性磷酸酶活性。

釉基质蛋白对人牙周膜细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白的影响

目的 :观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白能力的影响。方法 :乙酸法提取猪釉基质蛋白 ,改良组织块法原代培养人牙周膜细胞 ,免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白的能力。结果 :人牙周膜细胞胞浆骨桥蛋白、骨涎蛋白染色阳性 ,2 0 0、10 0、5 0mg/L釉基质蛋白作用下可以使细胞胞浆骨桥蛋白、骨涎蛋白染色不同程度地加深。人牙周膜细胞在釉基质蛋白作用下 ,最早从第 3d开始骨桥蛋白表达增加、从第 7d开始骨涎蛋白表达增加。结论 :一定浓度的釉基质蛋白在特定的时间可以促进牙周膜细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白。

猪釉基质蛋白对MC3T3-E1成骨细胞增殖分化的影响

目的 :探索釉基质蛋白 (EMPs)促进成骨细胞增殖分化的作用 ,为进一步研究提供基本数据。方法 :选择MC3T3 E1成骨细胞株 ,利用体外细胞培养方法 ,分别加入不同浓度的EMPsα MEM培养液 ,于培养 0、1、2、3、4,5、6d进行细胞计数 ,采用SAS软件对细胞计数数据作单因素方差分析。结果 :EMPs各组细胞计数均高于阴性对照 (C)组 (P <0 0 1)。第 2天 ,10 0 μg/ml和 15 0 μg/mlEMPs组的细胞计数高于阳性对照 (T)组 (P <0 0 1) ;第 5天 ,10 0μg/mlEMPs组的细胞计数不但高于C、T组 ,还明显高于其它EMPs浓度组。结论 :釉基质蛋白可明显促进成骨细胞的增殖分化。

釉基质蛋白对人骨髓基质细胞生长和黏附的影响

目的探讨釉基质蛋白(enamelmatrixprotein,EMPs)对人骨髓基质细胞黏附、伸展和增殖的影响。方法用全骨髓培养法获得人骨髓基质细胞,各实验组中EMPs的浓度分别为50、100、200、300μg/ml,以不加EMPs作为空白对照组。细胞计数法测定细胞的黏附能力;通过计数高倍视野中伸展的细胞数,计算骨髓基质细胞在1、3、5和7h的伸展率;MTT法检测各组细胞的增殖活性。采用SAS6.12软件对所得数据进行单因素方差分析。结果体外培养的人骨髓基质细胞生长良好;各实验组间及与对照组比较,对细胞的黏附性的影响无统计学差异;各组细胞的伸展率亦无显著性差异;EMPs对人骨髓基质细胞有较明显的促增殖作用,其中200μg/ml浓度组EMPs对骨髓基质细胞的促增殖作用显著(P<0.05)。结论EMPs对体外培养的人骨髓基质细胞的黏附性和伸展率无影响,但可明显促进其增殖。

釉基质蛋白对猪骨髓基质细胞增殖和根面附着生长的影响

目的:研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对体外培养的猪骨髓基质细胞(bone marrowstrom alcells,BMSCs)增殖和在根面附着生长的影响,为EMPs联合应用BMSCs修复牙周组织缺损提供理论依据。方法:抽取猪髂骨骨髓,全血培养法获得骨髓基质细胞。培养液中EMPs的浓度分别为25、50、100、200μg/ml,以不加EMPs为对照。MTT法测定各组细胞的增殖活性。对实验数据行单因素方差分析和SNK法组间比较,检验水准为α=0.05。制备猪自体牙根片,以200μg/mlEMPs处理组为实验组,对照组不用EMPs处理。接种BMSCs后培养7d,HE染色和扫描电镜观察。选取800倍下标准视野,计数每个视野中的细胞数,取4个视野均值。采用配对t检验法作统计学分析,检验水准为α=0.05。结果:猪BMSCs在含有EMPs的培养液中生长良好。EMPs对BMSCs的促增殖作用呈浓度和时间依赖性,200μg/ml浓度的EMPs从实验的第3天开始显著促进猪BMSCs增殖。HE染色显示BMSCs在根片表面附着良好。扫描电镜观察表明实验组附着生长的BMSCs数量较多,与对照组相比具有显著差异。结论:EMPs在200μg/ml浓度时可显著促进猪BMSCs增殖,并促进其在根面的附着生长,提示EMPs和BMSCs可以联合应用以修复牙周组织缺损。

釉基质蛋白对猪骨髓基质细胞黏附、伸展及增殖的影响

目的:研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对体外培养的猪骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)黏附、伸展和增殖活性的影响。方法:抽取猪髂骨骨髓,全血培养法获得骨髓基质细胞。培养液中EMPs的浓度分别为25、50、100、200μg/ml,以不加EMPs为对照。用比色法检测不同浓度EMPs对BMSCs黏附的影响。通过计数预定视野中伸展的细胞数,计算BMSCs在培养1h、3.5h、6.5h后的伸展率。MTT法测定各组细胞的增殖活性。对实验数据行单因素方差分析和SNK法组间比较。结果:猪BMSCs在含有EMPs的培养液中生长良好。对照组以及不同浓度EMPs实验组对细胞黏附的影响无统计学差异。在1h、3.5h、6.5h,各组细胞的伸展率无显著不同。EMPs对BMSCs的促增殖作用呈浓度和时间依赖性,200μg/ml浓度的EMPs从实验的第3天开始,显著促进猪BMSCs的增殖。结论:EMPs对体外培养的猪BMSCs的黏附和伸展无显著影响,200μg/ml浓度的EMPs可显著促进猪BMSCs增殖,为联合应用EMPs和BMSCs修复牙周组织缺损提供了理论依据。

釉基质蛋白诱导牙周组织再生的量效实验研究

目的 :探索釉基质蛋白 (EnamelMatrixProteins,EMPs)应用的最佳剂量和甲壳质作为载体的可行性。方法 :采用乙酸提取法获得猪釉基质蛋白 ,选用甲壳质作为载体膜 ,分别选择 4种剂量的釉基质蛋白做猴牙周骨缺损的再生实验研究。结果 :15mg剂量组可获得高达 78.33%的牙骨质再生和 75 %的牙槽骨再生 ,明显高于 5、10和 2 0mg组。结论 :15mg的EMPs为诱导牙周组织再生的最佳剂量 。

釉基质蛋白对人牙周膜细胞粘附、伸展的影响

目的 :了解釉基质蛋白对人牙周膜细胞黏附、伸展的影响。方法 :改良组织块法培养人牙周膜细胞 ,固相结合分析方法观察釉基质蛋白对人牙周膜细胞黏附、伸展的影响。结果 :实验组PDLC黏附率与对照组无差别 ,实验组PDLC伸展率高于对照组。结论 :EMPs对PDLC黏附无影响 ,但可促进其伸展。

釉基质蛋白对人牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的影响

目的 :观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的影响。方法 :改良组织块法培养人牙周膜细胞 ,免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的能力。结果 :5 0、10 0、2 0 0mg/L的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原 ,其中 ,以 10 0mg/L釉基质蛋白的促Ⅰ型胶原合成作用最明显 ,5 0mg/L釉基质蛋白的促Ⅲ型胶原合成作用最明显。但是 ,这种促进作用有一定的时间性。结论 :一定浓度的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原。

釉基质蛋白对人牙龈上皮细胞增殖的影响

目的:研究釉基质蛋白(enamelmatrixproteins,EMPs)对体外培养的人牙龈上皮细胞增殖活性的影响。方法:乙酸提取法获取EMPs,取龈切术中切除的牙龈组织,采用酶消化法培养牙龈上皮细胞。将第1代牙龈上皮细胞按照22500个/孔接种,分为4组:对照组(不加EMPs)及EMPs分别为50、100、200μg/ml的实验组。采用MTT法检测各组细胞数量,对每个时间点的各组实验数据进行方差分析。结果:人牙龈上皮细胞能在EMPs覆盖的平皿上生长。统计学分析表明,不同浓度的EMPs在早期对牙龈上皮细胞的增殖无显著影响;从第3天开始,当培养液中EMPs浓度为200μg/ml时,牙龈上皮细胞增殖显著受抑。结论:EMPs影响牙龈上皮细胞的增殖,并存在剂量和时间依赖性。

牙釉基质蛋白诱导牙釉质的再矿化研究

目的研究牙釉基质蛋白对牙釉质再矿化的影响。方法将利于与蛋白结合的羧基基团,通过紫外光辐射接枝在牙釉质缺损表面,加入到含SD大鼠牙釉基质蛋白的磷酸盐琼脂-醋酸钙溶液体系中,应用扫描电镜观察牙釉质表面经处理后的形态学改变,进而分析牙釉基质蛋白对羟基磷灰石晶体的组成和形貌的调控作用。结果在添加牙釉基质蛋白的凝胶体系中,牙釉质缺损表面可以见到羟基磷灰石生长晶体,晶体表现出了良好的结晶度,组成上为含有少量CO32-取代的羟基磷灰石晶体。结论在37℃恒温水浴,添加牙釉基质蛋白的凝胶体系中,牙釉基质蛋白对羟基磷灰石晶体的成核及生长有重要模板作用,证明牙釉基质蛋白能够诱导牙釉质再矿化。

釉基质蛋白对牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨釉基质蛋白对于牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶 (ALP)活性的影响。方法 :采用细胞培养技术 ,噻唑盐比色测定 (MTT)法和酶动力学方法 ,观察釉基质蛋白对牙周膜细胞的作用。结果 :釉基质蛋白组的牙周膜细胞 ,其增殖活性显著提高 ,以 5 0mg/L浓度为最佳 ;其ALP活性也较对照组明显增加 ,以 2 0 0mg/L浓度的效果最佳 ,且有一个合适的剂量范围。结论

釉基质蛋白对骨髓基质细胞分泌TGF-β1的影响

目的 :探讨釉基质蛋白 (EMPs)对大鼠骨髓基质细胞 (rMSCs)分泌内源性转化生长因子 β1(TGF - β1)的影响。 方法 :采用全骨髓法培养rMSCs ,通过酶联免疫测定法 (ELISA)测定EMPs对rMSCs分泌TGF - β1的浓度效应和时间效应。 结果 :EMPs作用后 ,实验组rMSCs分泌TGF - β1明显高于对照组 ,且有浓度依赖性。结论 :EMPs能有效促进rMSCs分泌TGF - β1。

釉基质蛋白对成骨细胞碱性磷酸酶和I型胶原合成的影响

目的 :观察釉基质蛋白 (EMPs)对成骨细胞碱性磷酸酶和I型胶原合成的影响 ,进一步探讨EMPs促进牙槽骨再生的机制。方法 :体外培养MC3T3 E1成骨细胞 ,在培养液中加入不同浓度的EMPs ,用酶动力学方法和MTT法作碱性磷酸酶 (ALP)比活性测定 ,同位素掺入结合细菌胶原酶消化法测定I型胶原的合成。结果 :EMPs能明显促进MC3T3 E1成骨细胞的碱性磷酸酶合成以及I型胶原合成。结论 :EMPs对成骨细胞的生物学活性有明显促进作用 。

釉基质蛋白各组成成分及其作用

釉基质蛋白(EMD)为发育期牙釉质中的一系列釉基质物质及其衍生物,具有促进牙周组织再生和生物矿化以及骨诱导等生物学活性。EMD富含牙釉蛋白、釉蛋白和成釉蛋白等多种蛋白质成分,在诱导成骨和促进血管形成等方面都有一定的作用。随着检测技术水平的不断提高,类生长因子活性在EMD中也被检测到,即以EMD代替生长因子应用于组织工程研究是可行的。本文就牙釉蛋白、釉蛋白和成釉蛋白以及蛋白酶和类生长因子物质等EMD的组成和作用等研究进展作一综述,以期为EMD的广泛应用提供一定的参考。

釉基质蛋白对牙周细胞覆盖体外创面的影响

目的:评价体外创面模型环境中,釉基质蛋白对牙周膜细胞、牙龈成纤维细胞覆盖创面能力的影响。方法:利用在盖玻片上形成的人牙周膜和牙龈成纤维细胞的融合培养物,以机械方法去除7mm宽的细胞层条带,形成体外创面模型。受损培养物在含有10%胎牛血清的培养液中继续培养2、6、9d,同时以100μg/ml的釉基质蛋白分别刺激牙周膜、牙龈成纤维细胞,并与不加釉基质蛋白者作对照。玻片经固定后作甲紫染色。以计算机辅助图像分析系统对细胞覆盖体外创面的面积进行百分比定量,采用SAS6.12软件包进行样本均数的t检验。结果:对照组组内牙周膜、牙龈成纤维细胞覆盖创面的面积存在差异,牙龈成纤维细胞覆盖创面面积在创面形成后第9天显著高于牙周膜细胞,差异有显著性(P<0.05)。在加用100μg/ml釉基质蛋白的条件下,牙周膜细胞覆盖体外创面的面积较对照组明显增加,创面形成后第6、9天,牙周膜、牙龈成纤维细胞覆盖体外创面面积均无显著差异(P>0.05)。结论:牙龈成纤维细胞覆盖创面的能力高于牙周膜细胞。釉基质蛋白有增进创面愈合,特别是牙周膜细胞创面覆盖的作用。