小鼠A20RS样细胞模型的初步建立

目的:研究EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)转染小鼠 B淋巴瘤细胞A20能否诱导出霍奇金淋巴瘤H/R S样细胞. 方法:采用RT PCR方法获得LMP1全外显子片段,使之克隆 到真核表达载体PLXSN中,限制性酶切、PCR扩增和测序鉴 定重组载体;运用脂质体介导转染技术,将LMP1的真核表达 重组质粒和空载体质粒导入A20细胞.结果:扩增的 LMP1cDNA长度为1.1kb,测序结果与已知序列吻合,重组真 核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子;经G418筛选获 得稳定整合了LMP1和空载体的亚克隆细胞,WesternBlot印迹 鉴定PLXSN LMP1组有LMP1蛋白的表达,出现了H/R S样细 胞形态改变.结论:建立了小鼠A20RS样细胞模型,为下一步 建立霍奇金淋巴瘤动物模型,研究其发病机制奠定了基础.

Septin2在霍奇金淋巴瘤细胞株L428细胞中的表达及其在促进细胞再分化中的作用

目的探索GTP结合蛋白氯苄乙胺2（Septin2）在霍奇金淋巴瘤细胞株L428细胞中的表达及其在H／RS（Hodgkin／Reed—Sternberg）细胞向B细胞再分化中的作用。方法采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、Westernblot、激光共聚焦显微镜、免疫细胞化学法检测霍奇金淋巴瘤细胞株L428细胞过表达CD99前后Septin2在mRNA和蛋白水平的表达；采用RT-qPCR和Westernblot检测L428细胞转染Septin2干扰片段（Septin2-siRNA）后Septin2的表达；采用激光共聚焦显微镜、CCK8法和流式细胞术检测干扰Septin2基因对L428细胞骨架蛋白、细胞增殖活性和免疫表型的影响。结果与L428细胞空白对照组比较，L428细胞Septin2mRNA表达水平在CD99过表达后（O．329±0．019对1．000，P=0．001）和转染Septin2-0siRNA后（0．276±0．025对1．000，P=0．000）均下降，蛋白表达水平也下降。与转染空载体组比较，转染Septin2-siRNA后的L428细胞较前者胞体缩小，细胞增殖活性下降（F=204．927，P〈0．001），细胞中的微丝骨架发生了重建，CD30和CD15表达下降，CD19、CD10、CD38表达增高。结论Septin2在L428细胞中高表达，干扰Septin2可促进H／RS细胞向B细胞方向再分化。

CD137在北方地区经典型霍奇金淋巴瘤中的表达及辅助病理鉴别诊断价值探讨

目的明确CD137在北方地区经典型霍奇金淋巴瘤（cHL）中的表达，探讨其作为cHL辅助病理鉴别诊断新指标的可能应用价值。方法收集54例CHL患者资料，以55例伴有“HRS样细胞”的非cHL患者为对照。在病理组织标本中选取“HRS细胞”或“HRS样细胞”丰富的区域制作组织芯片；以“HRS细胞”或“HRS样细胞”为观察对象，cHL组应用CD30、CD15、CD20、PAX5、CD3免疫组织化学染色；同时对两组患者标本进行CD137（BBK-2）抗体免疫组织化学染色及采用EBV编码的小RNA（EBER）原位杂交法检测EBV感染状态。结果54例cHL患者均为淋巴结内原发，中位年龄45．5（22．0～68．0）岁；男女比例1．7：1；对照组患者结内54例，结外（皮肤）1例，中位年龄50．0（12．0～81．0）岁；男女比例1．9：1。54例cHL患者均表达CD30，HRS细胞主要诊断相关免疫标志物CD30、CD15、CD20、CD3阳性表达率依次为100．0％、70．4％、18．5％和0，可见PAX5弱至中等强度表达，阳性率70．4％；EBV感染阳性率25．9％（对照组阳性率21．8％）。cHL组CD137阳性率57．4％，对照组阳性率14．5％，差异有统计学意义（P〈0．001）。将cHL组及对照组按照患者年龄（≥60≤60岁）、性别、有无EBV感染、组织学亚型以及主要诊断相关标志物的表达与否进行分组，CD137阳性率差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。以2013年为界进行分组，2013年前后两组cHL患者的CD137阳性率差异有统计学意义（39．4％对85．7％，P=0．001），对照组差异无统计学意义（12．5％对16．1％，P=0．705）；2013以后存档的标本中cHL组与对照组患者CD137阳性率差异有统计学意义（85．7％对16．1％，P〈0．001）。结论通过研究初步证实北方地区大多数cHL患者的HRS细胞表达CD137，而对照组患者“HRS样细胞”CD137阳性率较低。保存期3年以内较保存期3年以上的cHL患者标本CD137阳性率高，更适于进行CD137免疫组织化学染色检测。CD137有望作为辅助cHL病理鉴别诊断的新指标。