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重叠延伸聚合酶链反应克隆大鼠Foxo3a基因及序列测定 被引量:1
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作者 代婷婷 何援利 《南昌大学学报(医学版)》 CAS 2010年第1期21-24,共4页
目的获得大鼠Foxo3a基因全长编码区基因。方法运用重叠延伸PCR方法从大鼠脾脏总RNA中扩增Foxo3a编码区基因全长,将其插入pMD19-T载体中进行酶切及测序鉴定。结果Foxo3a编码区基因全长2019bp,与GenBank中大鼠Foxo3a基因同源性为99.9%。... 目的获得大鼠Foxo3a基因全长编码区基因。方法运用重叠延伸PCR方法从大鼠脾脏总RNA中扩增Foxo3a编码区基因全长,将其插入pMD19-T载体中进行酶切及测序鉴定。结果Foxo3a编码区基因全长2019bp,与GenBank中大鼠Foxo3a基因同源性为99.9%。结论运用重叠延伸PCR技术可成功克隆高GC含量大鼠Foxo3a的cDNA,为进一步研究该基因奠定了基础。 展开更多
关键词 Foxo3a基因 克隆 重叠延伸聚合酶链反应
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基于改进的重叠延伸聚合酶链式反应技术快速制备DNA分子质量标准
2
作者 张圆圆 颜焰 +2 位作者 金玉兰 董伟仁 周继勇 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期272-277,共6页
采用改进的重叠延伸聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,简便、快速地制备DNA分子质量标准。首先,利用普通PCR技术扩增5 和3 两端序列一致的DNA片段。随后,在重叠延伸PCR的变性和退火过程中,2个单链的3 端互补序列可形... 采用改进的重叠延伸聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,简便、快速地制备DNA分子质量标准。首先,利用普通PCR技术扩增5 和3 两端序列一致的DNA片段。随后,在重叠延伸PCR的变性和退火过程中,2个单链的3 端互补序列可形成双链,且这些单链片段可同时作为模板和引物,在PCR延伸过程中延长片段。随着反应循环数的增加,小片段产物逐渐减少,大片段产物逐渐增多。取不同循环数的重叠延伸PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,根据电泳结果选择最佳的PCR循环数或不同循环数的最佳组合,无须回收纯化,即可得到分子质量相差100bp的DNA分子质量标准。经琼脂糖凝胶电泳检测,所制备的DNA分子质量标准条带清晰、分子质量准确、条带均一性好,可用于标记DNA分子质量大小。总之,本研究用于DNA分子质量标准制备的方法操作简单,周期短,成本低,无副产物,且能够根据具体需求定制DNA分子质量标准的大小。 展开更多
关键词 DNA分子质量标准 重叠延伸聚合酶链式反应 DNA电泳
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重叠延伸PCR方法的建立与应用 被引量:6
3
作者 曹阳 李冬田 +1 位作者 尹冰楠 佟惠春 《河北医药》 CAS 2005年第11期803-804,共2页
目的建立一种新型PCR技术(重叠延伸PCR)并用于腺病毒早期基因E1A与内核蛋白体进入位点IRES(internalribosomeentrysite)的直接连接,为构建复制型腺病毒载体作准备。方法以PcAE1A质粒与PIRES-EGFP质粒为模板,通过引物设计,使E1A基因3’端... 目的建立一种新型PCR技术(重叠延伸PCR)并用于腺病毒早期基因E1A与内核蛋白体进入位点IRES(internalribosomeentrysite)的直接连接,为构建复制型腺病毒载体作准备。方法以PcAE1A质粒与PIRES-EGFP质粒为模板,通过引物设计,使E1A基因3’端与IRmES基因5’端具有相互重叠的一段序列,用该组引物行PCR分别扩增E1A基因与IRES基因,再以这两种PCR产物的混合物作为模板,进行重叠延伸PCR扩增E1A-IRES基因片段。结果经酶切及测序鉴定重叠延伸PCR方法成功构建了E1A-IRES基因片段。结论重叠延伸PCR法能将任意两段DNA序列连接起来,其在分子生物学的领域中具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 重叠延伸聚合酶链式反应 腺病毒载体
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重叠延伸PCR构建EB病毒BMRF1-BZLF1N融合基因 被引量:1
4
作者 伊强 陈丹 +1 位作者 杨滨 欧启水 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期279-281,共3页
目的构建EB病毒BMRF1-BZLF1N融合基因,并分析其克隆表达。方法用重叠延伸PCR将EB病毒的BMRF1基因和BZLF1N基因通过多肽接头(Gly4Ser)2的DNA序列进行连接,构建BMRF1-BZLF1N融合基因,并进行核苷酸序列测定。结果 DNA序列分析结果表明,该... 目的构建EB病毒BMRF1-BZLF1N融合基因,并分析其克隆表达。方法用重叠延伸PCR将EB病毒的BMRF1基因和BZLF1N基因通过多肽接头(Gly4Ser)2的DNA序列进行连接,构建BMRF1-BZLF1N融合基因,并进行核苷酸序列测定。结果 DNA序列分析结果表明,该融合基因BMRF1-Linker-BZLF1N的连接顺序、方向及序列完全正确。结论成功构建了EB病毒BMRF1-BZLF1N融合基因,为该融合基因克隆表达产物的应用研究提供了依据。 展开更多
关键词 EB病毒 融合基因 重叠延伸聚合酶链反应
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利用重叠延伸PCR和同源重组克隆技术制备HLA-A* 0201/HBc18-27单链三分子复合体
5
作者 许涛 李晓娥 +4 位作者 吴优 Khawar Ali Shahzad 王伟 张雷 沈传来 《东南大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2016年第6期825-831,共7页
目的:构建和表达HLA-A*0201/HBc18-27单链三分子复合体。方法:利用重叠延伸PCR将HBc18-27、(Gly4Ser)3、β2m、(Gly4Ser)4和HLA-A*0201胞外区依次串联为单链三聚体(single-chain trimer,SCT)融合基因,通过同源重组克隆技术插... 目的:构建和表达HLA-A*0201/HBc18-27单链三分子复合体。方法:利用重叠延伸PCR将HBc18-27、(Gly4Ser)3、β2m、(Gly4Ser)4和HLA-A*0201胞外区依次串联为单链三聚体(single-chain trimer,SCT)融合基因,通过同源重组克隆技术插入到pET28a原核表达载体,用异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,采用金属螯合亲和层析法纯化目的蛋白,通过稀释复性法折叠成HLA-A*0201/HBc18-27的复合单体,并生物素化,将单体包被到直径4.5μm的磁性微球,用构象特异性单抗(W6/32)进行荧光染色,流式细胞术分析其空间构象。结果:pET28a-HLA-A*0201/HBc18-27基因序列和蛋白大小与预测一致;纯化后融合蛋白纯度约93%;流式细胞术分析显示pET28a-HLA-A*0201/HBc18-27单体具有正确的空间构象。结论:利用重叠延伸PCR和同源重组克隆技术成功制备了HLA-A*0201/HBc18-27的单链复合体,无需限制性内切酶和连接酶,发展了主要组织相容性单链复合体技术,有效简化了pMHCⅠ类分子的制备过程。 展开更多
关键词 重叠延伸聚合酶链式反应 同源重组 主要组织相容性复合体
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黄曲霉基因敲除体系的构建及其RNA依赖的RNA聚合酶1基因在生长发育中的作用 被引量:1
6
作者 刘翔 杨碧 +4 位作者 田询 周建鸿 禹文峰 齐晓岚 江银辉 《贵州医科大学学报》 CAS 2023年第11期1282-1291,共10页
目的探讨黄曲霉(A.flavus)基因敲除体系的构建和RNA依赖的RNA聚合酶1(RDRP1)基因在A.flavus生长发育中的作用。方法通过National Center for Biotechnology Information网址查找RDRP1基因,设计上下游序列引物,引入融合片段20 bp,采用重... 目的探讨黄曲霉(A.flavus)基因敲除体系的构建和RNA依赖的RNA聚合酶1(RDRP1)基因在A.flavus生长发育中的作用。方法通过National Center for Biotechnology Information网址查找RDRP1基因,设计上下游序列引物,引入融合片段20 bp,采用重叠PCR(overlap PCR)法融合RDRP1基因上下游片段和嘧啶磺胺抗性基因(ptrA);采用聚乙二醇(PEG)介导方法将该融合片段导入A.flavus的原生质体中获得RDRP1阳性转化子(ptrA抗性),采用Sourthern blot鉴定筛选RDRP1基因突变菌株;对RDRP1基因突变菌株,采用十字交叉法测定生长速率、血细胞计数板统计产孢量,手动计数Wickerham Medium(WKM)+尿嘧啶尿苷(UU)培养基上产生的菌核数量。结果获得ptrA抗性转化子13个;Sourthern blot鉴定4个为RDRP1基因缺失菌株,效率30.8%;与CA14相比,RDRP1基因突变菌株在表型、生长率、产孢量及菌核发育上差异无统计学意义(P>0.05)。结论overlap PCR结合PEG介导转化的方式可短时间内获得A.flavus基因敲除突变菌株,RDRP1基因不参与A.flavus表型、生长率、产孢量及菌核发育的调控作用。 展开更多
关键词 基因敲除技术 原生质体 黄曲霉 重叠延伸聚合酶链式反应 聚乙二醇 RNA依赖的RNA聚合酶1
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用基因组DNA剪接技术克隆SIgA相关基因 被引量:2
7
作者 张宝中 安小平 +4 位作者 张昕 刘大斌 单云竹 周育森 童贻刚 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1-6,共6页
目的:克隆分泌型IgA(SIgA)相关基因——J链基因(IgJ)、多聚免疫球蛋白受体基因(pIgR)和IgA重链恒定区基因(IGHA),为进一步构建SIgA真核表达质粒奠定基础。方法:采用"基因组DNA剪接"技术,根据已发表的IgJ、pIgR和IGHA的核苷酸... 目的:克隆分泌型IgA(SIgA)相关基因——J链基因(IgJ)、多聚免疫球蛋白受体基因(pIgR)和IgA重链恒定区基因(IGHA),为进一步构建SIgA真核表达质粒奠定基础。方法:采用"基因组DNA剪接"技术,根据已发表的IgJ、pIgR和IGHA的核苷酸序列,通过计算机软件分别设计各个基因片段外显子的优化引物,从人外周血基因组DNA中直接扩增各基因的外显子序列;然后人工设计融合相邻外显子的融合引物,采用重叠PCR技术,把各基因片段的外显子串联起来形成全长编码序列,完成基因组DNA的体外剪接。扩增的PCR产物纯化后克隆到pGEM-T Easy Vector中,通过DNA测序对阳性克隆进行分析鉴定。结果:PCR扩增的IgJ、pIgR和IGHA基因与预期大小一致;测序结果表明实验获得的上述基因与GenBank中的目标基因序列完全一致。结论:通过基因组DNA剪接技术成功克隆人类SIgA3个相关基因,提示此技术是合成多外显子cDNA的有效手段。 展开更多
关键词 分泌型IGA 基因组DNA剪接 重叠延伸聚合酶链式反应
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小鼠2型金属硫蛋白基因的克隆 被引量:1
8
作者 修佳祺 李云 +4 位作者 张云建 陈强 李鹏 凌翎 任淑萍 《中国实验诊断学》 2007年第8期1091-1094,共4页
目的构建含有小鼠Ⅱ型金属硫蛋白(MT)基因的真核表达载体,为进行MT抗氧化作用的体内功能实验奠定基础。方法采用重叠延伸PCR技术设计两对引物,利用引物间的互补序列作为模板合成小鼠Ⅱ型MT基因。结果将PCR产物经连接反应,连接产物转化JM... 目的构建含有小鼠Ⅱ型金属硫蛋白(MT)基因的真核表达载体,为进行MT抗氧化作用的体内功能实验奠定基础。方法采用重叠延伸PCR技术设计两对引物,利用引物间的互补序列作为模板合成小鼠Ⅱ型MT基因。结果将PCR产物经连接反应,连接产物转化JM109,摇菌后提取质粒,质粒的酶切鉴定及最后的测序结果均表明本实验所获得的小鼠Ⅱ型MT基因与GENEBANK中的目标基因序列完全一致。结论本实验通过重叠PCR技术成功构建了小鼠Ⅱ型MT编码基因,重叠PCR技术是合成目的基因片段的有效的手段。 展开更多
关键词 金属硫蛋白 基因 重叠延伸聚合酶链反应
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人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白表达载体的构建及其表达 被引量:1
9
作者 熊敏 杨敬宁 +1 位作者 李青 吴雄文 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-4,共4页
目的构建并表达了人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP(scHLA-A2)融合蛋白表达载体,为进一步制备HLA-A2四聚体及其功能研究奠定了基础。方法应用重叠延伸PCR(overlap-PCR)对编码HLA-A2的cDNA序列进行一个碱基的同义突变,并将β2m和HLA-A2胞外... 目的构建并表达了人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP(scHLA-A2)融合蛋白表达载体,为进一步制备HLA-A2四聚体及其功能研究奠定了基础。方法应用重叠延伸PCR(overlap-PCR)对编码HLA-A2的cDNA序列进行一个碱基的同义突变,并将β2m和HLA-A2胞外段亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行前后拼接,并利用引物所带的BSP编码序列,构建单链β2m-HLA-A2-BSP融合基因,将测序正确的β2m-HLA-A2-BSP融合基因插入原核表达载体pET-22b中,转化BL21(DE3)细菌,SDS-PAGE检测其表达,融合蛋白于体外抗原肽存在条件下稀释复性后由Western blot鉴定其空间构象。结果经DNA序列分析表明:同义突变与预期结果一致,β2m和HLA-A2-BSPl、inker的连接顺序、方向及序列完全正确,表达载体转化BL21(DE3)细菌后可表达β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白,SDS-PAGE显示该融合蛋白分子量为45 kD,与理论值一致,将融合蛋白与特异性抗原肽在体外进行稀释复性后经Western blot鉴定表明该复合物能与HLA-Ⅰ类分子特异性结合的单克隆抗体W6/32结合。结论人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白的构建及其表达获得成功,经体外复性可获得HLA-Ⅰ类分子天然构象。 展开更多
关键词 重叠延伸聚合酶链式反应 β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白 同义突变
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变形链球菌耐氟菌株gtfB基因失活菌株的构建 被引量:1
10
作者 李文月 高爽 +6 位作者 张志鹰 张红 超博 武玉凤 李贺 王春萌 张志民 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2018年第5期490-494,共5页
目的:构建变形链球菌(S.mutans)耐氟菌株UA159-FR中gtfB基因失活株,为研究耐氟菌株gtfB基因的功能奠定基础。方法:培养UA159-FR并以其为模板扩增gtfB基因上游、下游同源臂片段,以质粒pEGFP-N1为模板扩增kan基因;通过重叠延伸聚合酶链反... 目的:构建变形链球菌(S.mutans)耐氟菌株UA159-FR中gtfB基因失活株,为研究耐氟菌株gtfB基因的功能奠定基础。方法:培养UA159-FR并以其为模板扩增gtfB基因上游、下游同源臂片段,以质粒pEGFP-N1为模板扩增kan基因;通过重叠延伸聚合酶链反应法(overlap extension polymerase chain reaction,OE-PCR)获取上述3个片段的同源重组片段;与pEASY-Blunt Cloning Vector连接形成重组质粒后,进行PCR鉴定和测序鉴定;将重组片段电转化入UA159-FR感受态细胞中得到gtfB基因失活菌株,并进行PCR鉴定。结果:经PCR鉴定和测序鉴定,含有gtfB基因重组片段的重组质粒构建成功;经PCR鉴定,UA159-FR的gtfB基因失活株构建成功。结论:成功构建了含有gtfB基因重组片段的重组质粒和S.mutans耐氟菌株UA159-FR的gtfB基因失活株,可用于gtfB基因功能的研究。 展开更多
关键词 变形链球菌耐氟菌株 gtfB基因 重叠延伸聚合酶链反应 同源重组 基因失活
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口蹄疫病毒单链抗体基因的构建及其推导蛋白三维结构的分子模拟
11
作者 刘涛 周广青 +4 位作者 马军武 林密 祁淑芸 冯霞 马明仁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1035-1040,共6页
用口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株灭活抗原免疫家兔,从兔脾细胞中提取RNA作为模板,通过PCR及重叠PCR方法构建出FMDV的单链抗体基因。测序结果显示,序列中有重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因,经Blast比较,发现VH、VL的相似性... 用口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株灭活抗原免疫家兔,从兔脾细胞中提取RNA作为模板,通过PCR及重叠PCR方法构建出FMDV的单链抗体基因。测序结果显示,序列中有重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因,经Blast比较,发现VH、VL的相似性最高分别可达81.0%和93.0%,且在序列中有连接VH及VL的柔性接头(Gly4Ser)3。用EXPASY软件包预测了推导蛋白的特性。运用Swiss-pdb viewer软件的SWISS-Model处理器对构建的单链抗体基因推导的蛋白序列进行了三维结构的分子模拟。拉马钱德兰图证明,所模拟的单链抗体的三维结构较为合理。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 单链抗体 重叠聚合酶链反应 序列分析 三维结构 分子模拟
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利用Gateway克隆技术构建人Hiwi腺病毒载体
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作者 马宁 董晓燕 +2 位作者 姜艳芳 刘蒙蒙 刘子玲 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期898-903,I0004,共7页
目的:获得人的全长Hiwi编码区基因,构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的人Hiwi腺病毒载体,为进一步研究Hiwi诱导白血病干细胞分化和凋亡的作用和机制奠定基础。方法:运用重叠延伸PCR方法扩增Hiwi编码区基因全长;利用Gateway克隆技术将Hiwi编码... 目的:获得人的全长Hiwi编码区基因,构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的人Hiwi腺病毒载体,为进一步研究Hiwi诱导白血病干细胞分化和凋亡的作用和机制奠定基础。方法:运用重叠延伸PCR方法扩增Hiwi编码区基因全长;利用Gateway克隆技术将Hiwi编码区基因全长插入带有GFP的载体Flag-IRES-hrGFP中构建成为pDown-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP,再将克隆载体pDown-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP与表达载体pAV.Des1d进行同源重组反应,得到重组腺病毒载体pAV.Ex1d-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP。经PCR筛选阳性克隆提取重组腺病毒质粒,包装成重组Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP腺病毒。结果:人Hiwi全长编码区基因克隆成功,经酶切及基因测序鉴定证实重组Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP腺病毒质粒构建成功。采用Lipofectamine法将Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP转染入HEK293A细胞中,在荧光显微镜下,可以观察到转染细胞中的绿色荧光。结论:成功构建重组Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP腺病毒质粒,其可在HEK293A细胞内表达。 展开更多
关键词 Hiwi基因 腺病毒 重叠延伸聚合酶链反应 Gateway克隆技术
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大鼠细胞色素P450-2J3基因的克隆及其在293细胞中的表达
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作者 闫哲 王明太 +1 位作者 李仁立 汪道文 《中原医刊》 2006年第7期6-9,共4页
目的克隆大鼠CYP2 J3基因并构建pcDNA 3.1(+)-CYP2 J3真核表达载体,检测其在293细胞中的表达。方法提取大鼠肝脏组织总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和重叠延伸聚合酶链反应(OE-PCR)扩增大鼠CYP2 J3基因,克隆入真核表达载体pcDNA ... 目的克隆大鼠CYP2 J3基因并构建pcDNA 3.1(+)-CYP2 J3真核表达载体,检测其在293细胞中的表达。方法提取大鼠肝脏组织总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和重叠延伸聚合酶链反应(OE-PCR)扩增大鼠CYP2 J3基因,克隆入真核表达载体pcDNA 3.1(+)。脂质体转染293细胞,用W estern b lotting鉴定其在293细胞表达。结果运用RT-PCR和OE-PCR获得CYP2 J3基因开放读码框架(ORF)全长序列,经酶切鉴定正确。测序结果与基因Gen Bank提交序列完全一致并成功构建真核表达载体pcDNA 3.1(+)-CYP2 J3。W estern b lotting结果显示,转染pcD-NA 3.1(+)-CYP2 J3后的293细胞能稳定有效表达CYP2 J3蛋白。结论大鼠CYP2 J3基因的成功克隆以及pcDNA3.1(+)-CYP2 J3载体的成功构建,为CYP2 J3基因的功能研究和相关疾病的研究提供了可行的工具。 展开更多
关键词 CYP2J3 基因克隆 聚合酶链反应 转染 基因表达 重叠延伸聚合酶链反应
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炭疽毒素保护性抗原第四结构域在大肠杆菌中的可溶性表达 被引量:2
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作者 余燕 孙志伟 +2 位作者 沈应柏 俞炜源 陈学英 《生物技术通讯》 CAS 2005年第4期389-391,共3页
人工优化设计并合成炭疽毒素保护性抗原第四结构域基因,并与噬菌体gⅢ蛋白N端结构域基因融合,在大肠杆菌中可溶性表达融合蛋白。结果表明合成了炭疽毒素保护性抗原第四结构域基因,并在大肠杆菌中获得了高效可溶性融合表达,可溶性表达产... 人工优化设计并合成炭疽毒素保护性抗原第四结构域基因,并与噬菌体gⅢ蛋白N端结构域基因融合,在大肠杆菌中可溶性表达融合蛋白。结果表明合成了炭疽毒素保护性抗原第四结构域基因,并在大肠杆菌中获得了高效可溶性融合表达,可溶性表达产物占细菌总蛋白量的36%左右;经亲和层析纯化获得了重组蛋白;Western印迹分析表明,表达产物能与His单抗(重组蛋白羧基端带有6×His)发生特异性结合反应。以上结果表明获得了炭疽毒素保护性抗原第四结构域,为利用人抗体库进行筛选抗炭疽毒素的人源性中和抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 炭疽毒素 保护性抗原 重叠延伸多聚酶链式反应 中和抗体
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人类PU.1cDNA的克隆及表达产物的生物活性 被引量:2
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作者 范春 中村三千男 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2000年第11期17-19,共3页
目的 :重叠聚合酶链反应 (OverlappingPolymeraseChainReactionPCR)法是在上下游引物之间设计一对碱基互补的嵌套引物 ,第一轮PCR分别扩增 5’端和 3’端片段 ,第二轮PCR以第一轮PCR的 5’端和 3’端片段混和物为模板 ,用上下游引物扩... 目的 :重叠聚合酶链反应 (OverlappingPolymeraseChainReactionPCR)法是在上下游引物之间设计一对碱基互补的嵌套引物 ,第一轮PCR分别扩增 5’端和 3’端片段 ,第二轮PCR以第一轮PCR的 5’端和 3’端片段混和物为模板 ,用上下游引物扩增出全长片段。该文用逆转录 -OverlappingPCR法快速高效地从前骨髓干细胞中扩增到人类PU .1全长cDNA为 44 2bp ,酶切和测序证实完全与前人报道一致。构建的真核表达质粒pcDNA3.1-hPU .1可以被特异的抗体识别 ,体外细胞株转染证实具有特异的激活启动子活性的功能。 展开更多
关键词 重叠聚合酶链反应 CDNA PU.1 生物活性
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Thermal decomposition kinetics of basic carbonate cobalt nanosheets obtained from spent Li-ion batteries:Deconvolution of overlapping complex reactions 被引量:3
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作者 Hossein EBRAHIMZADE Gholam Reza KHAYATI Mahin SCHAFFIE 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 SCIE EI CAS CSCD 2018年第6期1265-1274,共10页
A new non-isothermal method of kinetic analysis was employed to investigate the thermal decomposition kinetic modeling of the basic carbonate cobalt nanosheets(n-BCoC) synthesized from spent lithium-ion batteries(L... A new non-isothermal method of kinetic analysis was employed to investigate the thermal decomposition kinetic modeling of the basic carbonate cobalt nanosheets(n-BCoC) synthesized from spent lithium-ion batteries(LIBs). Fraser–Suzuki function was applied to deconvoluting overlapping complex processes from the overall differential thermal curves obtained under the linear heating rate conditions, followed by the kinetic analysis of the discrete processes using a new kinetic analysis method. Results showed that the decomposition of n-BCo C in air occurred through two consecutive reactions in the 136-270 ℃ temperature intervals. Decomposition started by hydroxide component(Co(OH)2) decomposition until to 65% and simultaneously carbonate phase decarbonation began. The process was continued by CO2 evolution and finally carbonate cobalt nanosheets have been produced. The reaction mechanism of the whole process can be kinetically characterized by two successive reactions: a phase boundary contracting reaction followed by an Avrami-Erofeev equation. Mechanistic information obtained by the kinetic study was in good agreement with FT-IR(Fourier transform infrared spectroscopy) and SEM(scanning electron microscopy) results. 展开更多
关键词 kinetic modeling basic carbonate cobalt nanosheets (n-BCoC) overlapping reactions spent lithium-ion battery
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重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβCTP^(109~145)的构建 被引量:1
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作者 李伟涛 潘善培 +2 位作者 谢琪旋 肖銮娟 芦春斌 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2002年第3期100-106,共7页
目的 :为发展多特异性避孕疫苗 ,制备重组抗原pZP3α -hCGβCTP10 9~ 14 5,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβCTP10 9~ 14 5.方法 :根据pZP3α全长和hCGβCTP10 9~ 14 5编码的DNA列设计两对引物 ,通过部分重叠聚合酶... 目的 :为发展多特异性避孕疫苗 ,制备重组抗原pZP3α -hCGβCTP10 9~ 14 5,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβCTP10 9~ 14 5.方法 :根据pZP3α全长和hCGβCTP10 9~ 14 5编码的DNA列设计两对引物 ,通过部分重叠聚合酶链式反应 (overlappingPCR) ,扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9~ 14 5DNA片断 ,克隆到载体质粒pPIC9K中 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒 ,并用DNA测序仪对重组质粒测序 .结果 :3步PCR扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9~ 14 5DNA片段 ,插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点 ,获得重组pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9~ 14 5表达质粒 ,测序结果显示插入序列与设计预期完全一致 .结论 :重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9~ 14 5构建成功 ,为表达重组抗原pZP3α -hCGβ -CTP10 9~ 14 5。 展开更多
关键词 重组质粒 PPIC9K pZP3α HCGΒ CTP^109-145 猪卵透明带 人绒毛膜促性腺激素 部分重叠聚合酶链式反应 避孕疫苗 重组抗原
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OE-PCR法扩增获得犬瘟热病毒缺失疏水区的融合蛋白基因片段
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作者 乌仁高娃 杨敬 陈振文 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期585-587,共3页
根据犬瘟热病毒(CDV)O nderstepoort株的核苷酸序列,设计合成引物,通过RT-PCR,从CDV O nderstepoort株RNA中扩增出2 197 bp的CDV全长融合蛋白(F)基因。将其与pGEM-T easy载体连接,通过软件分析其序列中的疏水区后,以pGEM-T/F为模板,PCR... 根据犬瘟热病毒(CDV)O nderstepoort株的核苷酸序列,设计合成引物,通过RT-PCR,从CDV O nderstepoort株RNA中扩增出2 197 bp的CDV全长融合蛋白(F)基因。将其与pGEM-T easy载体连接,通过软件分析其序列中的疏水区后,以pGEM-T/F为模板,PCR扩增出约254 bp和1 017 bp的F蛋白疏水区外编码序列。以2个扩增产物为模板,以OE-PCR(overlap ex tens ion-PCR)扩增出约1 271 bp的缺失疏水区的F基因(dF),测序结果表明,dF的序列除在疏水区以4个甘氨酸序列替代外,其余部分与F基因的同源性为99.2%。这表明,OE-PCR扩增法已成功地使CDV F基因疏水区缺失。 展开更多
关键词 CDV F基因 疏水区缺失 重叠延伸聚合酶链反应
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猪生长激素促分泌素受体基因真核表达载体的构建及鉴定
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作者 石琳 蔺帅 +2 位作者 周东庆 孙艳君 王志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期43-46,共4页
本试验旨在构建猪生长激素促分泌素受体(pGHS-R)真核表达系统,并瞬时转染人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察其表达情况。以猪基因组为模板,通过剪接重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)克隆出pGHS-R的编码区序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中... 本试验旨在构建猪生长激素促分泌素受体(pGHS-R)真核表达系统,并瞬时转染人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察其表达情况。以猪基因组为模板,通过剪接重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)克隆出pGHS-R的编码区序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/pGHS-R,酶切鉴定并测序,加myc标签,瞬时转染HEK293T细胞,用Western blotting鉴定该重组质粒是否能在真核细胞中表达相应的目的蛋白。结果显示,本试验成功扩增出pGHS-R编码序列,酶切和测序结果表明pcDNA3.1(+)-myc/pGHS-R构建正确,Western blotting方法证实转染的该质粒能在HEK293T细胞中正确表达目的蛋白。结果表明,本试验成功构建了pGHS-R真核表达载体,并正确表达蛋白,为进一步研究GHS-R的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 生长激素促分泌素受体 真核表达 剪接重叠延伸聚合酶链式反应 人源胚胎肾细胞
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SynGAP(1-700aa)中670-685aa缺失突变质粒的构建及表达 被引量:1
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作者 张清秀 魏秀娥 +1 位作者 高红 荣良群 《东南大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2016年第6期832-835,共4页
目的:缺失突变SynGAP(1-700aa)-Flag中的670-685aa片段,为后续实验中新的药物靶点的鉴定提供可靠理论依据。方法:以前期构建好的p CMV-SynGAP(1-700aa)-Flag质粒为模板,重叠延伸PCR技术缺失突变670-685aa片段,扩增出目的片段;限制性内... 目的:缺失突变SynGAP(1-700aa)-Flag中的670-685aa片段,为后续实验中新的药物靶点的鉴定提供可靠理论依据。方法:以前期构建好的p CMV-SynGAP(1-700aa)-Flag质粒为模板,重叠延伸PCR技术缺失突变670-685aa片段,扩增出目的片段;限制性内切酶将载体线性化,然后分别纯化目的片段与线性化载体;利用同源重组技术连接目的片段与线性化载体,获取重组质粒;PCR技术鉴定重组质粒构建成功,测序进一步验证质粒碱基正确;将质粒转入293T细胞,免疫印迹鉴定能否成功表达。结果:重叠PCR成功缺失突变670-685aa片段,成功构建重组质粒,且测序正确。免疫印迹结果表明,SynGAP(1-700aa)缺失突变670-685aa片段后仍可成功表达。结论:成功缺失突变SynGAP(1-700aa)中的670-685aa片段,并且在细胞株中稳定表达。该质粒的成功构建,为我们的后续研究奠定实验基础。 展开更多
关键词 SynGAP 重叠延伸聚合酶链式反应 缺失突变
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