长期小剂量铁螯合剂治疗对高量输血重型β地贫患儿铁负荷的影响研究

目的：探讨长期小剂量铁螯合剂治疗对高量输血重型β地贫患儿铁负荷的影响研究。方法：回顾性分析本院2014年2月-2015年2月因高量输血治疗后铁负荷过量的重型β地贫患儿80例,按照其用小剂量铁螯合剂治疗的时间长短分为A组、B组和C组,A组30例患儿治疗时间为〉20 d,B组30例患儿治疗时间为10~20 d,C组20例患儿治疗时间为〈10 d,比较三组患儿治疗前后血清铁（SI）、铁蛋白（SF）及尿SF水平的变化及发生不良反应的情况。结果：高量输血后三组患儿的铁负荷均处于较高水平,三组患儿比较差异无统计学意义（P〉0.05）;用小剂量铁螯合剂治疗后,三组患儿的SI、SF均有所下降,尿SF均有所升高,且A组患儿铁负荷的变化程度大于B组和C组患儿,差异均有统计学意义（P〈0.05）;A组患儿不良反应的发生率（6.67%）低于B组患儿（36.67%）与C组患儿（40.00%）,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：使用小剂量铁螯合剂治疗高量输血重型β地贫患儿铁负荷过重,应坚持长期治疗,才能明显改善铁负荷过重的问题,且长期治疗能够减少不良反应的发生,有利于患儿的治疗。

广东地区HbH病合并β地贫及中重型β地贫合并α地贫患者的血液学特征分析

目的对2005年5月至2020年4月来广东省妇幼保健院就诊且血红蛋白电泳和基因诊断确诊的血红蛋白H病(HbH病)合并β地贫及中重型β地贫合并α地贫患者进行血液学特征分析,为临床遗传咨询及产前诊断提供指导意义。方法采用血常规检测及血红蛋白电泳方法分别获得HbH病合并β地贫及中重型β地贫合并α地贫患者的红细胞参数及各类型血红蛋白的含量,使用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结合反向点杂交(reverse dot blot,RDB)、gap-PCR等方法进行地中海贫血基因检测。结果在近5年来就诊于本院的患者中,HbH病合并β地贫的患者有19例(男性7例、女性12例),其血红蛋白(hemoglobin,Hb)的平均水平为(103.32±16.66)g/L,男性为(120.57±9.82)g/L,女性为(93.25±10.41)g/L;男性与女性的Hb平均水平比较,差别有统计学意义(P<0.01)。HbA2的平均水平为(4.55±0.94)%;男性为(4.33±1.32)%,女性为(4.68±0.58)%,男性与女性的HbA2平均水平比较,差别没有统计学意义(P>0.05)。中重型β地贫合并α地贫的患者有19例(男性8例,女性11例),Hb的平均水平为(91.89±16.44)g/L,男性为(97.88±12.85)g/L,女性为(87.55±17.37)g/L;HbA2的平均水平为(4.94±2.62)%,男性为(3.85±1.84)%,女性为(5.74±2.80)%,男性与女性的Hb及HbA2平均水平比较,差别均没有统计学意义(P>0.05)。结论在38例病例中,患者的血常规结果及临床表现均显示为轻中度贫血。

广东省清远地区地中海贫血基因分型情况分析

目的了解和分析本地区地贫基因型的分布情况,为临床提供依据,防止和降低重型地贫儿的出生率。方法α-地中海贫血基因分型检测应用跨跃断裂点PCR(GAP-PCR)的技术原理进行检测,即在待检的缺失基因片段两端设计引物进行扩增,再通过琼脂糖凝胶电泳,根据电泳片段大小判断检测样品的基因型。β-地中海贫血基因检测采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术,按照碱基互补配对原则,通过分子杂交和显色反应,从而确定待检样品的基因型。结果 778例疑为地中海贫血患者标本,共检出地贫731例,检出率为94%。其中α-地贫基因缺失539例,占73.7%,缺失类型主要以αα/--SEA(--SEA缺失杂合子)为主,共检出485例,占阳性率的66%;-α3.7/αα(-α3.7缺失杂合子)检出27例,占阳性率的3.7%;αα/-α4.2(-α4.2缺失杂合子)检出8例;-α3.7/--SEA(-α3.7、--SEA双重缺失杂合子)检出8例,其他基因型较少检出;β-地贫基因突变192例,占26.3%,突变类型主要以CD41-42位点的单突变杂合子为主,检出87例,占阳性率的11.9%,单突变纯合子2例;其次为IVS-Ⅱ-654位点的单突变杂合子,检出53例,占阳性率的7.3%;其余突变类型依次为CD17、-28、CD71-72、CD43的单突变杂合子,双突变杂合子8例。患者中婴幼儿225人次,检出地贫186例,检出率82.6%;婚检和孕检553人次,检出地贫545例,检出率98.6%。结论本地区的地贫检出率较高,主要以α-地贫基因缺失为主,其中又以婚、孕检人群为主。由此可见对婚、孕检人群进行地贫基因检测可以更好的防止和降低重型地贫儿的出生率,从而减轻社会和家庭的负担,实现优生优育。

β地中海贫血患者1 331例出生年份及基因突变类型分析

目的分析广西籍β地中海贫血(以下简称β地贫)患者出生年份及基因突变类型特点,探讨地贫防控政策进一步完善的方向。方法回顾分析2007年1月至2020年12月就诊的资料完整的1331例广西籍重型(TM)β地贫和中间型β地贫(TI)患者的出生年份和基因突变类型特点。结果1331例患者中1987年出生的为10例,此前均为个位数,此后逐年增加,2009年达到顶峰为103例,2010年开始下降,2018年降至18例,2020例降至2例。1331例患者中1293例(97.15%)通过常规基因分析明确基因型,其中β^(0)/β^(0)纯合子344例(26.6%),β^(0)/β^(0)双重杂合子380例(29.4%),β^(0)/β^(+)双重杂合子370例(28.6%),β^(+)/β^(+)纯合子22例(1.7%),β^(+)/β^(+)双重杂合子31例(2.4%),β/HbE 146例(11.3%),有176例(13.6%)患者复合了α地贫。最常见的4种基因型是CD41-42/CD17(205例,15.9%)、CD41-42/CD41-42(197例,15.2%)、CD41-42/-28(96例,7.4%)和CD17/CD17(92例,7.1%)。1331例患者中38例(2.85%)临床诊断TM或TI的患者常规试剂盒只能检出是β地贫杂合子,不能检出完整的基因突变类型,其中26例通过测序明确基因型,检出8种β地贫基因突类型和2种α三联体,出现频率最高的是IVS-Ⅱ-5(10例)和IVS-Ⅰ-2(5例)。结论“广西地贫防治计划”效果显著,未来地贫防控需要重点关注TI和罕见基因突变类型地贫。

Alpha珠蛋白基因片段表达载体的构建

目的 :构建alpha珠蛋白基因片段反义表达载体 ,抑制重型beta地贫患者alpha珠蛋白基因的过量表达 ,为重型beta地贫基因治疗打下基础。方法 :采用PCR扩增alpha珠蛋白基因片段 80 7bp,反应条件 94℃ 30s ,6 8℃ 1min ,72℃ 2min,35个循环 ,然后将所扩增片段用Klenow大片段酶补平PCR产物末端 ,另外用HindⅢ酶切pLNSX ,用Klenow补平后 ,与补平末段的PCR产物平端连接 ,转化用CaCl2 制备的感受态细菌受体DH5α,用碱法提取所得克隆子质粒 ,电泳比较质粒大小 ,再用PCR初筛 ,最后用双酶切进行鉴定。结果 :经过质粒大小比较 ,PCR初筛 ,双酶切鉴定 ,得到 6个正向插入重组子。