中国成都汉族及泰国群体D7S2846基因座的遗传多态性

研究STR基因座D7S2 846的遗传多态性 ,为法科学应用提供基础数据。应用PCR及PAG电泳技术 ,对376名中国成都汉族无关个体及 131名泰国无关个体进行了调查。两群体分别检出 8个和 7个等位基因 ,首次获得该基因座基因在两群体中的频率分布。两群体基因型频率分布均符合Hardy Weinberg平衡。家系调查证实了等位基因的传递遵循孟德尔遗传规律。该基因座在两群体中的个人识别能力 (Dp)分别为 0 85 70、 0 86 0 2 ,杂合度 (H )分别为0 6 915、 0 6 870 ,多态性信息含量 (PIC)分别为 0 6 445、 0 6 5 5 3 ,非父排除率 (PE )分别为 0 415 2、 0 40 85。D7S2 846基因座在法医学个人识别及亲子鉴定中具有较高的实用价值。

广东汉族人群D7S1517等12个STR基因座的遗传多态性

目的调查广东汉族人群12个短串联重复序列(STR)基因座(D7S1517、D3S1744、D12S391、D2S1360、D6S474、D4S2366、D8S1132、D5S2500、D18S51、D21S2055、D10S2325、SE33)的遗传多态性。方法采用德国Qiagen公司的HD-plex试剂盒复合扩增181个广东汉族个体的12个STR基因座。扩增产物经美国ABI公司的3100型遗传分析仪电泳分析其基因型,在各基因座均符合Hardy-Weinberg平衡的基础上计算其遗传学参数:基因频率、杂合度(H)、多态信息含量(PIC)、个体识别能力(DP)和非父排除率(PE)。

人特异性CHRFAM7A基因抑制小鼠肾缺血再灌注损伤炎症反应

本研究探讨人特异性CHRFAM7A基因抑制小鼠肾缺血再灌注损伤早期炎症作用及其机制。12只野生型(wild type,WT) C57BL/6成年雄性小鼠随机分为2组:野生型假手术组(WT Sham)和野生型肾缺血再灌注损伤(WT RIRI)组。12只性别、年龄匹配的CHRFAM7A转基因(transgenic mice,GT)小鼠也随机分组为:转基因型假手术组(GT Sham)和转基因型肾缺血再灌注损伤(GT RIRI)组,每组各6只。除WT和GT假手术组仅行剖腹手术外,所有小鼠均夹闭双侧肾蒂40 min,再灌注24 h后,留取各组小鼠血清及肾组织标本。生化分析仪检测血清中的尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)水平; ELISA法检测白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和胱天蛋白酶7水平;免疫组织化学染色法检测高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达水平;苏木-伊红(HE)染色和原位末端标记法(TUNEL)染色观察肾组织病理损伤;流式检测HK-2细胞凋亡率。结果显示,与WT Sham组对比,WT RIRI组血清中,BUN、Scr、IL-8和TNF-α含量增加(P <0. 0001);肾组织中,胱天蛋白酶7水平增高(P<0. 001),HMGB1平均光密度值增加(P<0. 0001),肾组织细胞凋亡指数(AI%)增高(P<0. 0001)。与GT Sham组对比,GT RIRI组血清BUN、Scr、IL-8和TNF-α含量增加(P <0. 05,P <0. 0001,P<0. 01,P<0. 01);肾组织中,胱天蛋白酶7水平明显增高(P<0. 01),HMGB1平均光密度值增加(P<0. 0001),肾组织细胞AI%增高(P=0. 0005)。与WT RIRI组对比,GT RIRI组血清中的BUN、Scr水平降低(P<0. 0001),IL-8、TNF-α、HMGB1和胱天蛋白酶7的水平明显下降(P<0. 01,P<0. 0001,P<0. 0001,P<0. 01),肾组织细胞凋亡指数(AI%)下降(P=0. 0003).与pLVX空载质粒+氯化钴组相比,pLVX-CHRFAM7A+氯化钴组的凋亡率(19. 31%±1. 45 vs 34. 92%±4. 21,P <0. 001)明显下降。上述结果表明,人特异性CHRFAM7A基因在小鼠肾缺血再灌注损伤中,通过抑制早期的炎症反应,对肾组织发挥保护作用。

小鼠视网膜内Spata7基因敲除模型构建及其光感受器细胞凋亡机制的研究

目的构建小鼠Spata7基因视网膜内敲除模型,探讨Spata7基因突变导致光感受器细胞凋亡的机制。方法以腺相关病毒(AAV)为载体搭载CRISPR/Cas9系统,注射1μL AAV病毒混合液(3×1013 vg/mL)于出生14 d小鼠视网膜中,对Spata7基因进行视网膜内特异性敲除。1个月后行视网膜眼底照相观察AAV感染效率;定量PCR测定敲除效率;视觉电生理检测光感受器细胞功能;免疫荧光实验探究Spata7基因功能。结果AAV有效搭载CRISPR/Cas9系统进入视网膜内并对Spata7基因进行敲除,敲除效率为54%。小鼠光感受器细胞大量死亡,导致整体光感受器细胞功能明显下降。敲除后,视紫红质无法被转运到光感受器细胞外节,引起明显的内质网应激。结论Spata7基因敲除导致视紫红质蛋白运输到外节受阻而停留在内质网,并造成内质网应激,是导致光感受器细胞大量死亡的重要原因。

利用CRISPR-Cas9编辑蒺藜苜蓿串联重复基因

DWF7基因编码Δ7甾醇C5去饱和酶,参与植物油菜素甾醇的合成。在豆科模式植物蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)中,MtDWF7基因位于6号染色体,具有3个串联重复的拷贝。本研究利用CRISPR-Cas9技术,针对蒺藜苜蓿DWF7基因的3个拷贝,通过序列比对在3个基因外显子的同源区段设计两个编辑靶点,构建基因表达载体,转化野生型蒺藜苜蓿并产生毛根,提取转基因毛根DNA进行检测。经PCR鉴定,35份转基因毛根DNA样品中,靶位点1对3个基因的编辑效率分别为44.43%、5.71%和34.29%,3个基因在靶位点1同时发生编辑的概率为5.71%,而靶位点2未检测到基因编辑。本研究在毛根中实现了对MtDWF7串联重复的3个基因的同时编辑,证明选择合适的靶点可同时编辑3个基因,为串联重复基因功能的研究提供了新的思路。

武汉汉族人群短串联重复序列D5S818,D7S820位点多态性研究

目的研究Ｄ５Ｓ８１８，Ｄ７Ｓ８２０的多态性及法医学应用价值。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离及银染显带技术对武汉地区汉族２３２例无关个体作Ｄ５Ｓ８１８，Ｄ７Ｓ８２０位点分型调查。结果Ｄ５Ｓ８１８和Ｄ７Ｓ８２０位点分别检出８个和６个等位基因，获汉族人群基因频率分布。二位点基因型频率分布符合ＨａｒｄｙＷｅｉｎｂｅｒｇ平衡。位点杂合度分别为０８１２１和０７９３４，个人识别能力分别为０９４１６和０９２５５，非父排除率分别为０５８４２和０５８１６。结论Ｄ５Ｓ８１８和Ｄ７Ｓ８２０ＳＴＲ位点均是高杂合度、高鉴别能力的遗传标记系统。

人乳头状瘤病毒16型E7基因重组腺相关病毒载体的构建及E7 mRNA和蛋白在真核细胞中的表达

目的构建含人乳头状瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,并验证HPV16E7mRNA和蛋白在真核细胞中的表达。方法将含腺相关病毒(AAV)末端反向重复序列及HPV16E7基因的重组质粒pAAVMCSE7、含rep/cap基因的质粒pAAVRC及辅助质粒pAAVhelper共同转染胚胎肾细胞系HEK293细胞,回收、纯化病毒颗粒并鉴定,斑点杂交法测定病毒滴度,RTPCR技术、蛋白印迹法验证HPV16E7mRNA和蛋白在真核细胞中的表达。结果电镜鉴定结果显示真核细胞中有病毒颗粒存在,斑点杂交法测定病毒滴度为1×1011/ml。含HPV16E7基因的rAAV载体转染真核细胞后,在细胞内可检测到HPV16E7mRNA和蛋白的表达。结论本实验成功构建了含HPV16E7基因的rAAV载体,经验证HPV16E7mRNA和蛋白在真核细胞内有表达。

贵州汉族群体D16S539、D7S820、D13S317基因座遗传多态性研究

目的 了解贵州汉族人群 D16 S5 39、D7S82 0、D13S317基因座的遗传多态性分布。方法 应用聚合酶链反应复合扩增技术 ,对 15 4名无血缘关系的汉族个体进行 D16 S5 39、D7S82 0、D13S3173个短串联重复序列 (short tandem repeats,STR)基因座等位基因频率进行了调查分析 ,并与其他汉族人群进行了比较。结果 3个 STR基因座基因频率的分布均符合 Hardy- Weinberg平衡 ,3个 STR基因座总个体识别率为 0 .996 2 ,累积多态信息量为 0 .9879,获得了贵州汉族人群这 3个位点等位基因频率数据 ,且不同地区汉族人群中的分布无明显差异。结论 所得到的等位基因频率数据可为贵州汉族人群法医个体识别、亲子鉴定及遗传学研究提供更多依据。

Dandy-Walker综合征与7号染色体微缺失

目的应用微阵列比较基因组杂交技术探讨Dandy-Walker综合征的遗传学病因。方法选取8例经产前超声检查提示发生Dandy-Walker畸形且常规G显带染色体核型分析未发现异常的胎儿病例，按照标准的Affymetrixcytogenetic2．7M微阵列芯片的操作手册进行杂交、洗涤及全基因组扫描，并应用相应的计算机软件分析结果。结果微阵列比较基因组杂交技术检测提示3例Dandy-Walker畸形胎儿的染色体7p21．3区DNA拷贝数发生了缺失或重复，异常片段中包含与脊髓小脑疾病相关的NDUFA4和PHn4基因。结论染色体7p21．3区DNA拷贝数的异常改变是Dandy-Walker综合征的病因之一，其发病机制可能与NDuFA4和PHF／4基因的表达异常有关。