银染端粒重复扩增法的建立及初步应用

目的 建立检测端粒酶活性的银染端粒重复扩增法。方法 以银染替代放射性核素分析结果 ,加入内标防止假阴性结果出现而建立银染端粒重复扩增技术 ,并运用此法检测 36例乳腺癌组织和 2 4例乳腺良性病变组织标本端粒酶活性 ,同时与溴乙锭染色的端粒重复扩增法进行比较。结果 36例乳腺癌组织中 33例阳性 (91.7% ) ,2 4例乳腺良性病变组织无 1例阳性。与溴乙锭染色端粒重复扩增技术相比 ,银染端粒重复扩增技术可见到更多更清晰的带形。结论 实验结果表明本法与放射性同位素显影的端粒重复扩增技术相比是 1种更为简便、安全、可靠的端粒酶活性检测方法。

检测端粒酶活性的端粒重复序列扩增法的初步建立

端粒是真核线性染色体末端结构,人端粒DNA由(TTAGGG)n重复序列组成.端粒酶是核糖核酸蛋白酶,具有RNA依赖的DNA合成酶活性,可重新合成端粒的重复序列.最近研究证实端粒及端粒酶与细胞衰老及肿瘤相关,是近年来生物学研究的热点.检测端粒酶活性是研究端粒酶的基本方法,同时具有潜在的临床诊断价值.本文拟应用最新的端粒重复序列扩增法(Telomeric Repeat AmplificationProtocal,TRAP),检测肝癌细胞端粒酶活性.

银染端粒重复序列扩增法检测肺癌端粒酶活性

目的 评价端粒酶能否作为肺癌诊断的一个肿瘤标志物。方法 采用改良的银染端粒重复序列扩增法 (TRAP)检测 34例人肺癌手术标本 (包括癌组织、相应癌旁组织与正常组织标本各 34份 ,2 8个相应淋巴结 )的端粒酶活性。另有肺囊肿、肺炎性假瘤各 3例作为对照。结果 88.3% (30 / 34 )的肺癌癌组织端粒酶阳性 ,正常组织全部阴性。结论 端粒酶可以作为肺癌诊断的一个肿瘤标志物 ,改良的银染TRAP法成本低、污染少 。

应用端粒重复序列扩增法检测原发性肝癌组织端粒酶活性的研究

目的:检测原发性肝癌及癌旁组织端粒酶活性并探讨端粒酶活性在原发性肝癌中的临床意义。方法:应用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测36例原发性肝癌及癌旁组织和3例正常肝组织端粒酶活性。结果:36例原发性肝癌组织有29例(80.6%)阳性。而36例癌旁组织只有4例(11.1%)阳性。3例正常肝组织均阴性。4例癌旁组织端粒酶阳性的患者均于术后半年内复发。结论:原发性肝癌癌旁组织端粒酶活性可望成为预测原发性肝癌术后复发的重要指标,对患者术后治疗方案的选择以及术后随访观察具有一定的指导意义。

银染端粒重复序列扩增法检测端粒酶活性及其临床应用

目的 建立银染端粒重复序列扩增法(TRAP)测定肿瘤细胞的端粒酶活性.方法:将银染与TRAP相结合,测定了人肿瘤细胞株及穿刺细胞标本的端粒酶活性.结果:人肿瘤细胞株端粒酶活性为阳性,35例病理诊断为恶性肿瘤的穿刺标本中,33例端粒酶活性阳性,12例良性病变均为阴性.结论:银染TRAP法是特异,敏感及快速的端粒酶活性的检测方法,提示该方法可成为恶性肿瘤的诊断指标之一.

银染端粒重复序列扩增法检测肝癌模拟肝穿组织端粒酶活性的研究

目的:探讨细针穿刺肝活检组织行端粒酶活性检测用于肝细胞癌(HCC)诊断的可行性。方法:HCC共28例,每例HCC肿瘤切除后立即行肝肿瘤模拟细针穿刺。应用非放射性同位素银染的端粒重复序列扩增法(TRAP),分别对28例模拟肝穿组织和28例肿瘤切取组织行端粒酶活性检测。结果:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织的端粒酶检测结果完全一致,阳性率均为82%(23/28)。结论:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织在HCC端粒酶活性检测方面具有同等的效果。该结果提示,B超引导下经皮肝穿刺活检行端粒酶活性检测在HCC的诊断、治疗效果评价和预后的判断方面具有一定的应用前景。

端粒重复序列扩增法结合微孔板杂交法定量检测端粒酶活性

目的探讨定量检测端粒酶活性的非放射性检测方法。方法将端粒重复序列扩增测定法（ＴＲＡＰ）与微孔板杂交 相结合建立了非放射性检测方法，对３例正常肝组织和４例肝癌患者治疗前后的肝癌组织、瘤旁组织、肝癌凋亡组织 进行检测。结果肝癌组织具有比较高的端粒酶活性，而正常肝组织和瘤旁组织无此酶活性，肝癌凋亡组织端粒酶活性 显著降低。结论 该定量分析方法简单、灵敏、特异性强，可以比较准确地反映组织的端粒酶活性状态。

端粒重复序列扩增法检测胃癌组织中端粒酶活性研究

目的 :研究胃癌组织、癌旁及远端正常胃组织中的端粒酶活性 ,探讨其作为胃癌肿瘤标记物的可能性。方法 :采用TRAP-ELISA法检测了 5 1例胃癌组织、癌旁及远端正常胃组织的端粒酶活性表达。结果 :5 1例胃癌组织中端粒酶阳性表达 48例( 94.1%) ,癌旁组织为 17例 ( 3 3 .3 %) ,远端正常胃组织未检测出端粒酶活性。结论 :端粒酶是特异性较强的恶性肿瘤基因标志 ,有可能成为胃癌早期诊断和治疗的理想标记物。

端粒重复扩增-微孔板杂交法检测妇科肿瘤端粒酶活性的研究

目的 :探讨妇科几种常见恶性肿瘤与端粒酶活性的关系。方法 :采用端粒重复扩增 (TRAP)扩增端粒酶产物 ,通过生物素 -亲和素将扩增产物结合于微孔板 ,并与荧光素 (FITC)标记的特异性探针杂交 ,经酶标抗荧光素抗体结合而显色。结果 :妇科恶性肿瘤端粒酶活性检出 2 5例 (89.3% ) ,而肿瘤边缘组织检出 14例 (5 0 .0 % ) ,正常对照组织检出 10例 (35 .7% )。恶性肿瘤端粒酶活性显著高于肿瘤远端组织和正常对照组织 (P<0 .0 5 )。结论 :端粒酶激活可能在妇科恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。 TRAP-微孔板杂交法是检测端粒酶活性灵敏而特异的一种方法。

检测人结肠癌组织端粒酶活性的TRAP方法研究

对检测人结肠癌组织端粒酶活性的端粒酶重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）进行了研究．当Ｍｇ２＋浓度为１８ｍｍｏｌ／Ｌ、退火温度为５５℃时，能得到可靠的检测结果．影响检测结果可靠性的另两个因素是抽提物的反应用量和阳性片段的污染．

微孔板杂交法检测端粒酶活性

目的 利用微孔板反向杂交法对端粒酶重复序列扩增法加以改进 ,建立一种快速、简便、量化的端粒酶活性检测方法。方法 将端粒重复序列扩增法 (TRAP)与微孔板杂交法相结合 ,并采用蜡珠包埋活性酶及引物的方法 ,使TRAP反应单管一次完成。结果 与TRAP法相比 ,该方法检测鼠骨髓瘤细胞株的敏感性为 10个细胞 ,检测肝癌标本为阳性 ,经RNase处理及加热处理的细胞和标本及正常细胞均呈阴性。结论 应用该方法可简便、快速检测端粒酶活性 ,1日内完成并可单人份操作 ,对临床试剂的建立具有一定的参考价值。

端粒酶活性表达及p53异常在非小细胞肺癌中表达及临床意义

目的：研究端粒酶活性及 p53异常在非小细胞肺癌 (nonsmall cell lung cancer, NSCLC)中的表达及其相互关系。方法：用端粒重复扩增（ telomeric repeat amplification protocol, TRAP）法检测 NSCLC组织、癌旁非癌肺组织、肺良性病变组织端粒酶活性，用 Western blot印迹法检测 NSCLC组织 p53蛋白表达。结果：端粒酶活性表达率为： NSCLC 93.02％ (80/86)，癌旁非癌肺组织 9.33％ (7/75)，肺良性病变组织 27.27％ (3/11)， NSCLC组织端粒酶活性表达率显著高于癌旁非癌肺组织及肺良性病变，端粒酶活性表达率在不同组织类型、细胞分化、肿瘤大小、病理分期间差别不显著； NSCLC p53异常为 51.42％（ 36／ 70）， p53异常在Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期之间，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级之间差异有统计学意义；端粒酶活性表达与 p53异常无显著关联（ P >0.05）；结论： NSCLC标记物中，端粒酶活性表达较 p53敏感， p53对 NSCLC分期分级有帮助，端粒酶活性表达与 p53异常在 NSCLC发生发展中可能是两个独立的因素。

端粒酶活性在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨端粒酶活性在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其作为NSCLC肿瘤标记物和治疗靶点的可能性。方法：采用端粒重复扩增法（TRAP）研究了74例NSCLC组织及周围非癌组织、10例肺良性病变组织端粒酶活性表达。结果：74例NSCLC组织69例（93．24％）有端粒酶活性表达，74例周围非癌组织有9例（12．16％）表达阳性，10例良性病变中2例（20．00％）表达阳性，而相应的病变旁正常组织无端粒酶活性表达，端粒酶活性表达率与肿瘤组织类型、分化程度、肿瘤大小、病理分期无明显相关性。结论：端粒酶活性较普遍存在于NSCLC中，有可能成为NSCLC诊断和判断疗效的标记物和治疗新靶点。

Bcl-2,p53表达及端粒酶活性三者在非小细胞肺癌发生中的相关性

目的 :研究Bcl 2 ,p5 3及端粒酶异常在非小细胞肺癌 (nonsmallcelllungcancer,NSCLC)中的表达及相互关系并探讨其与NSCLC临床病理特征的关系 .方法 :用改良的端粒重复扩增法 (telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP) .方法 :(TRAP PCR ELISA)检测NSCLC组织端粒酶表达 ,用免疫组织化学法检测NSCLC组织Bcl 2和 p5 3蛋白表达 .结果 :在 6 2例NSCLC中 ,Bcl 2及p5 3蛋白阳性表达率分别为4 5 .2 %和 5 3.2 % .无淋巴结转移者Bcl 2表达明显高于有淋巴结转移者 (5 9.4 %vs2 4 .0 % ,P <0 .0 5 ) ;Ⅱ +Ⅲ期Bcl 2表达阳性率为 2 0 % ,明显低于Ⅰ期 (P <0 .0 5 ) .p5 3表达与肿瘤的类型、大小及 pTNM分期显著相关 (P <0 .0 5 ) .Bcl 2与p5 3表达活性无明显相关性 (P >0 .0 5 ) .端粒酶活性阳性率为 89.6 % ,端粒酶活性与肿瘤大小 (P <0 .0 1 ) ;淋巴结有无转移 (P <0 .0 5 )显著相关 .不同pTNM分期端粒酶活性阳性率差异有显著性 (P <0 .0 5 ) .端粒酶活性与Bcl 2表达无相关性(P >0 .0 5 ) ,而端粒酶活性与p5 3蛋白表达有显著相关性 ,在p5 3阳性组织中端粒酶活性较高 (P <0 .0 1 ) .结论 :p5 3,Bcl 2及端粒酶异常参与了NSCLC的发生、发展 。

肝癌组织及外周血单核细胞端粒酶异常对肝癌诊断价值的研究

目的探讨肝癌组织及外周血单核细胞中端粒酶表达对肝癌诊断的临床价值。方法以0.05%2-乙基氨基芴(2-FAA)饲料饲养SD大鼠诱发肝癌发生,在肝细胞癌变过程中观察端粒酶的动态变化及与总RNA的关系。并从人肝癌和非癌组织中制备总RNA,采用端粒重复扩增法-ELISA分析肝组织及外周血单核细胞端粒酶活性及其对肝癌的诊断与鉴别价值。结果经大鼠诱癌后,在肝细胞经细胞变性、癌前病变和肝癌形成的过程中,肝内总RNA和端粒酶显著表达,并呈正相关关系(r=0.83,P<0.01);在人肝癌组端粒酶活性明显高于它的非癌组织,而总RNA则是非癌组明显高于癌组;外周血单核细胞中,癌组端粒酶活性明显高于肝硬化组、慢性肝炎组及正常对照(P<0.01);外周血AFP浓度与单核细胞端粒酶活性联合分析,对肝癌具有互补诊断价值。结论肝癌发生过程中端粒酶表达异常,外周血中端粒酶活性检测有助于肝癌的诊断及预后观察。

Bcl-2及端粒酶在非小细胞肺癌组织中的表达

目的研究Bcl-2及端粒酶异常在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及相互关系并探讨其与NSCLC临床病理特征的关系。方法用改良的端粒重复扩增法(telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP)方法(TRAP-PCR-ELISA)检测NSCLC组织端粒酶表达,用免疫组织化学法检测NSCLC组织Bcl-2蛋白表达。结果在84例NSCLC中,Bcl-2蛋白阳性表达率为44.5%。无淋巴结转移者Bcl-2表达明显高于有淋巴结转移者(P<0.05);Ⅰ、Ⅱ期Bcl-2表达阳性率高于Ⅲ期(P<0.05)。端粒酶活性阳性率为86.7%,端粒酶活性与肿瘤大小、淋巴结有无转移显著相关(P<0.01和P<0.05))。此外,不同组织学分级、不同TNM分期端粒酶活性阳性率差异有显著性。端粒酶活性与Bcl-2表达无相关性(P>0.05)。结论对NSCLC组织中Bcl-2及端粒酶同时进行检测,对临床早期诊断及判断预后有重要意义。

正常人白细胞与急性白血病细胞端粒酶分析

目的探讨端粒酶活性检测在白血病临床病情分析中的价值。方法采用改进的端粒重复扩增法（ＴＲＡＰ）分析正常人白细胞和急性白血病细胞的端粒酶活性。结果急性白血病细胞表现出很高的端粒酶活性，并与白血病病情及异常染色体核型密切相关，而正常白细胞活性很低或无。结论分析白血病细胞异常端粒酶活性，对白血病诊断和临床治疗具有一定意义。

脑星形细胞瘤端粒酶活性及其临床意义

目的 检测脑星形细胞瘤组织中端粒酶的活性 ,分析其活性变化在肿瘤不同病理类型之间的关系。方法 选用 76例I～IV级脑星形细胞瘤患者的手术切除标本作为实验标本 ;应用端粒重复扩增法 (TRAP -ELISA)分别定量检测不同病理类型星形细胞瘤组织中端粒酶的活性。另取 1 5例正常脑组织标本作为对照。结果 76例脑星形细胞瘤患者中 ,Ⅰ～Ⅱ级者 38例 ,端粒酶阳性者 3例 (7.9%) ;星形细胞瘤Ⅲ～Ⅳ级者 38例 ,端粒酶阳性者 33例 (86 .6 %)。两组端粒酶阳性率之间有显著 (P <0 .0 1 ) ;两组之间 ,端粒酶活性定量水平之间也有显著性差异 (P <0 .0 5 )。 1 5例正常脑组织中未检测到端粒酶活性。结论 端粒酶的活性在脑星形细胞瘤中随着肿瘤活性程度的增高而增加。说明端粒酶作为肿瘤标志物在星形细胞瘤良恶性鉴别、恶性程度评估方面具有重要意义。

端粒酶活性在大肠息肉组织中的检测及其临床意义

目的:探讨端粒酶在大肠息肉中的检测及临床意义。方法:采集136例患者的病变标本,均在电子内镜下取大肠息肉组织5块,3块送活检,另2块进行端粒酶活性检测。结果:增生性息肉、腺瘤、炎性息肉、幼年性息肉和息肉样大肠癌组织中端粒酶阳性率分别为7%、18%、14%、0和88%。结论:端粒酶活性检测可作为大肠息肉恶变的早期预测指标。