随机引物引导的乙型肝炎病毒DNA探针标记和重复杂交

随机引物引导的探针标记足一种比切中移位更为有效的探针标记方法,作者应用这种方法制备^(32)P标记的乙型肝炎病毒(HBV)DNA探针。经液闪测定,探什比放射性为lxl0^(9)cpm/ug,(32)P掺入率为71.43％,均比切口移位有关参数上限高出数倍。将这种探针用于尼龙膜载样杂交,在每100cm^(2)的样膜所加探针放射性强度为5 x10^(6)cpm、浓度为20ug/L条件下,放射自显影24小时即可出示清晰结果。并且检出HBV DNA灵敏度达0.1Pg,检测HBSAg和HBCAg双阳性血清,HBVDNA阳性率达87％(26/30)。用这种方法还制备地高辛素标记的HBV DNA探针,并在探针浓度为20 ug/L条件下,对^(32)p探针杂交过的样膜重复杂交。结束检出HBV DNA灵敏度为0.05 Pg,检测HBsAg和HBeAg双阳性血清,HBV DNA阳性率为73％(22/30)。上述结果表明随机引物引导标记可用于制备高比放同位素探针和高敏感性非同位索探针。前者对研究微量基因必不可少,后者对基层单位常规开展检测非常重要。

多次重复荧光原位杂交制片技术在淋巴瘤诊疗中的应用研究

目的建立多次重复荧光原位杂交制片技术,用以在切片不足的情况下辅助淋巴瘤诊疗。方法收集20例包含不同程度的基因断裂、基因扩增情况且诊断为淋巴瘤的石蜡组织,每例连续切片4张。将杂交分为三组:第一次杂交组(FHG):第一次分别杂交C-MYC基因断裂探针、BCL-2基因断裂探针和BCL-6基因断裂探针;第二次杂交组(SHG):取FHG杂交C-MYC基因断裂探针切片,使用重复荧光原位杂交技术再次杂交BCL-2基因断裂探针;第三次杂交组(THG):在第二次杂交基础上再次使用该技术杂交BCL-6基因断裂探针。观察FHG组,SHG组,THG组镜下红绿信号的表达情况:包括红绿信号是否表达及信号的表达模式。记录结果后对三组中孵育相同探针的切片的信号情况进行对比。并且观察三组切片是否保持完整。结果SHG组镜下出现有效荧光信号比率为100%(R1=20/20×100%),THG组在镜下出现有效荧光信号比率为100%(R2=20/20×100%)。在本次实验中多次重复荧光原位杂交制片技术的成功率为100%(R=R1×R2)。在符合率方面,BCL-2基因断裂探针在FHG组和SHG组具有相同的信号模式和阳性比率;同时BCL-6基因断裂探针在FHG组和THG组也具有相同的信号模式和阳性比率;三组FISH杂交染色中只有两张切片具有部分掉片的情况,但不影响信号判读。证明在该方法下切片具有较好的完整性;该多次重复荧光原位杂交技术具有可行性。结论多次重复荧光原位杂交制片技术可以在一张切片上重复杂交不同探针,且每次均可获得信号清晰、形态较好、背景清晰的FISH染色结果。可以在切片不足的情况下,满足临床诊断、治疗需求。

端粒重复扩增-微孔板杂交法检测妇科肿瘤端粒酶活性的研究

目的 :探讨妇科几种常见恶性肿瘤与端粒酶活性的关系。方法 :采用端粒重复扩增 (TRAP)扩增端粒酶产物 ,通过生物素 -亲和素将扩增产物结合于微孔板 ,并与荧光素 (FITC)标记的特异性探针杂交 ,经酶标抗荧光素抗体结合而显色。结果 :妇科恶性肿瘤端粒酶活性检出 2 5例 (89.3% ) ,而肿瘤边缘组织检出 14例 (5 0 .0 % ) ,正常对照组织检出 10例 (35 .7% )。恶性肿瘤端粒酶活性显著高于肿瘤远端组织和正常对照组织 (P<0 .0 5 )。结论 :端粒酶激活可能在妇科恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。 TRAP-微孔板杂交法是检测端粒酶活性灵敏而特异的一种方法。

间隔臂和探针长度与寡核苷酸芯片重复性相关性研究

研究寡核苷酸芯片的重复性与间隔臂(spacer)和探针长度之间的相关性。设计12条不同长度的带有不同spacer的探针,与749bp荧光标记靶序列杂交。扫描分析三次杂交结果,用Quantarray定量分析软件进行分析。随探针长度的延长,杂交信号的变异系数逐步降低。15mer的探针杂交的信号较弱,杂交不够稳定,重复性也相对较差。20mer、25mer、30mer的探针的变异系数逐渐降低。spacer为15时变异系数最小。说明选择spacer为poly(dT)15的25mer和30mer的探针可以获得较好的重复性。

黑色玉米的表现及应用

玉米是一种高光效作物,适应性广,营养成分全面。特别是维生素含量丰富,而倍受人们的青睐。为了进一步提高玉米的品质,增强玉米的保健功能,我们经过重复杂交和多代定向选择,培育了一种适口性好、产量高的黑色玉米品系。这在当前盛行的“黑色食品”潮流中,无疑有着广泛的发展前景。