日本血吸虫中国大陆株雌性特异性DNA片段及重复序列的分离与鉴定

目的 分离鉴定日本血吸虫基因组 DNA的雌性特异性片段及 DNA重复序列。方法 分别提取雌、雄日本血吸虫基因组 DNA ,制备检测子和驱动子 ;利用代表性差异分析 (RDA)及 PCR进行扣除杂交 ,获得目的 DNA片段 ;对所获目的 DNA片段用低熔点凝胶回收 ;转质粒载体、重组质粒载体的阳性克隆筛选、测序 ;用 Southern blotting对目的 DNA片段进行鉴定。结果 RDA及 PCR获得 5个目的 DNA片段 ;并转质粒载体测定了 5个目的 DNA片段 (P1～ P5 )的序列。 Southern blotting显示 DNA片段 P1和 P2均与雌、雄基因组 DNA强烈杂交 ;DNA片段 P3与雌性基因组 DNA的杂交强度明显高于与雄性基因组 DNA的杂交强度 ;DNA片段 P4和 P5仅与雌性基因组 DNA杂交 ,但不与雄性基因组 DNA杂交。结论 DNA片段 P1和 P2为日本血吸虫 DNA重复序列 ,并以多拷贝存在于日本血吸虫基因组 DNA中 ;DNA片段 P3存在于日本血吸虫性染色体 W和 Z上 ,在性染色体 W的拷贝数多于在性染色体 Z上的拷贝数 ;DNA片段 P4和 P5仅存在于日本血吸虫性染色体 W上 ,为日本血吸虫雌性特异性片段。

苹果树根际高效解钾菌的筛选及鉴定

为探明苹果树根际解钾菌的种群特征和解钾性能,从苹果树根际土壤中分离获得解钾能力较强的高效解钾菌。本研究以钾长石为唯一钾源,分离获得118株具有解钾活性的菌株,重复片段PCR基因指纹分析(Repetitive-element PCR,rep-PCR)聚为29个类群。利用火焰分光光度法测定菌株解钾能力,获得5株高效解钾菌,平均解钾活性达到41.47mg·L-1,其中K105的解钾能力最强,有效态钾增长23.09%。采用H2O2消煮后测得的K+浓度升高,有效态钾增长最高达31.22%。采用形态特征观察、生理生化特性检测和基于16S r RNA基因序列的系统发育分析对高效解钾菌株进行鉴定。结果表明:K1为不动杆菌属(Acinetobacter sp.)、K98、K105和K115为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、K168为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。研究结果可为开辟新型高效解钾菌,为连作土壤的改良和苹果专用微生物菌肥的开发提供依据。

花椰菜自交不亲和性的分子标记研究

运用随机扩增多态性DNA(RAPD)和inter简单重复序列(ISSR)等分子标记技术,分别对5组花椰菜自交不亲和系和对应的自交亲和系的基因组进行指纹差异分析.采用10个10mer随机引物和5个ISSR引物进行PCR扩增,结果表明,扩增片段分子量在0.3～5kb之间,指纹图谱的稳定性和重复性较好.经过3次以上重复发现,ISSR4引物扩增图谱中,自交亲和系比不亲和系多扩增出3800bp片段;ISSR6引物扩增图谱中,除第3组外,不亲和系比亲和系多扩增出1100bp片段.结果表明,花椰菜自交不亲和系与自交系基因组DNA之间存在差异,扩增出的差异片段与花椰菜自交不亲和性相关,并可作为自交不亲和系和自交亲和系育种筛选的分子标记.初步探讨了花椰菜自交不亲和性的遗传机制及RAPD和ISSR技术在自交不亲和系选育过程中的应用前景.

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌分子流行病学研究

目的:从基因水平了解多重耐药鲍曼不动杆菌临床感染的流行情况,为控制其流行爆发提供实验数据。方法:收集本院亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌29株,用琼脂稀释法测定13种常用抗菌药物对其的最低抑菌浓度(MI(),采用细菌基因组重复序列聚合酶链反应(REP-PCR)检测上述菌株的分子流行病学特征。结果:29株鲍曼不动杆菌对头孢他啶、头孢吡肟、环丙沙星、左氧氟沙星等的耐药率分别为96.8%、100.0%、100.0%、50%。29株鲍曼不动杆菌分离自ICU、烧伤科、呼吸科3个科室,经REP-PCR检测分为A型13株、B1型7株、B2型5株、B3型4株。结论:我院在3个科室多重耐药鲍曼不动杆菌流行较严重基因分析表明在不同病房不同标本同一时间段内检测出的细菌具有高度同源性;多黏菌素对临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌具有很好的活性。