6-DMAP和胚胎干细胞代数对异种重构卵体外发育的影响(简报)

核移植技术已经广泛应用于动物克隆,但是克隆动物的成活率仍然很低[1-3].

新鲜山羊输卵管液对体细胞克隆和转基因胚胎体外发育的影响

用添加不同浓度发情期山羊输卵管液的培养基,对正常单细胞受精卵、注射外源基因后受精卵和细胞核移植后山羊重构卵进行体外培养,探讨其对胚胎体外发育的影响。结果表明:添加20%输卵管液后正常受精卵桑椹胚分裂率为26.1%(11/42),极显著(P<0.01)高于对照组(未添加输卵管液)(7.6%)、50%输卵管液组(4.7%)和100%输卵管液组(0);添加20%输卵管液后,体外培养显微注射转基因受精卵有20.0%(8/40)发育至16-细胞,极显著(P<0.01)高于对照组(6.7%)和50%输卵管液组(4.8%);细胞核移植重构卵在含20%输卵管液的培养基中桑椹胚分裂率为7.3%,与体内培养桑椹胚分裂率(11.1%)差异不显著。在体外培养条件下,添加20%输卵管液可明显提高正常受精卵、转基因受精卵和克隆重构卵的分裂率和发育率。

孵育和激活剂作用时间对山羊核移植胚胎早期发育的影响

探讨了电融合前对重构卵继续孵育及激活剂6-DMAP不同作用时间对山羊核移植胚胎体外发育的影响。结果显示，重构卵在成熟液中继续培养后，9～10h组的融合后卵子死亡率（27．42％）显著低于30min和90min组（49．26％和56.3％）（P〈0．05），胚胎卵裂率（68．15％）则显著高于30min和90min组（55．6％和54．24％）（P〈0．05）；重构卵用离子霉素激活后，再用6-DMAP激活0h、2h、3h、4h、5h及8～10h，各组间的胚胎卵裂率均无显著差异（P〉0．05），但均显著高于未用6-DMAP组的卵裂率（氏0．05）。本试验结果表明，电融合前，继续成熟培养重构卵有利于降低电融合时的卵子死亡率，提高卵子利用率；联合使用离子霉素和6-DMAP有利于提高激活效果，而6一DMAP的作用时间（2～10h）不影响核移植胚胎的卵裂。