二苯乙烯苷对重构小鼠毛囊氧化应激的保护效果研究

目的:观察外源性氧化应激对重构小鼠毛囊新生能力的影响及二苯乙烯苷(TSG,一种中药何首乌活性成分)对新生毛囊的抗氧化保护。方法:用硅胶小室法重构毛囊;用不同辐照剂量(3 J/cm^2及20 J/cm^2)长波紫外线(UVA)和不同浓度(100μmol/L及500μmol/L)过氧化氢(H_2O_2)处理新鲜制备的表皮及真皮细胞,比较观察处理细胞的毛囊新生能力改变,同时用10μμmol/L TSG联合500μmol/L H_2O_2处理细胞观察其抗氧化能力;毛囊重构部位皮肤活检采用苏木精-伊红(HE)染色进行毛囊计数,免疫组化法测定皮肤标本过氧化氢酶(CAT)表达;电子自旋共振(ESR)测试TSG羟自由基清除活性。结果:3 J/cm^2UVA照射组重建毛囊密度为(304±11.79)个,20 J/cm^2 UVA为(135±11.24)个,与对照组(202±11.79)个比较,差异有统计学意义(P<0.05);500μmol/L H_2O_2组毛囊密度为(109±20.50)个,500μmol/L H_2O_2联合10μmol/L TSG处理组为(207±15.01)个。联合处理组与对照组(216±10.26)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示500μmol/L H_2O_2处理组CAT染色强度18.67±2.17较对照组26.07±3.74明显减低,而500μmol/L H_2O_2联合10μmol/L TSG处理组50.02±3.82较对照组增强(P<0.05);ESR结果示TSG自身缺乏羟自由基清除活性。结论:不同水平的氧化应激对重构小鼠毛囊新生能力影响不同,低水平刺激而高水平则抑制毛囊生长。TSG对小鼠重构毛囊的抗氧化保护可能是通过上调皮肤细胞(主要是真皮细胞)CAT的表达。

贝美前列素激活Wnt/β-环连蛋白信号通路对小鼠重构毛囊毛发生长的影响

目的探讨贝美前列素(BimP)对小鼠背部重构毛囊毛发生长的影响。方法自1日龄的新生C57BL/6J鼠皮肤分离培养表皮细胞和真皮细胞,用硅胶小室法在Balb/c-nu小鼠背部重构毛囊,术后将18只Balb/c-nu小鼠随机分为BimP组、米诺地尔组和对照组,每组各6只;2周后在小鼠背部的细胞移植区分别外涂0.03%BimP 100μl、2%的米诺地尔溶液100μl和生理盐水100μl,每天涂药1次,连续2周;观察局部毛发生长情况;取小鼠背部移植区皮肤的新生毛发测量其长度;组织学观察新生毛囊的数目与生长周期;用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测Wnt家族分泌蛋白3a(Wnt3a)、淋巴细胞增强因子(LEF1)、β-环连蛋白和Frizzled跨膜受体蛋白7(Frizzled7)mRNA和蛋白表达水平。免疫荧光检测毛囊细胞β-环连蛋白的分布与表达。结果BimP组毛干长度高于对照组[(0.57±0.07)比(0.36±0.05)cm,P<0.01],BimP组与米诺地尔组差异无统计学意义;BimP组毛囊细胞Wnt3a(2.73±0.17比1.00±0.14,P<0.01)、LEF1(1.71±0.12比1.00±0.19,P<0.01)、β-环连蛋白(2.37±0.21比1.00±0.11,P<0.01)和Frizzled7(2.62±0.15比1.00±0.18,P<0.01)mRNA表达水平均高于对照组;Western印迹结果相同,BimP组毛囊细胞Wnt3a(1.44±0.21比1.00±0.13,P<0.05)、LEF1(1.36±0.15比1.00±0.09,P<0.05)、β-环连蛋白(1.60±0.13比1.00±0.16,P<0.01)和Frizzled7(1.52±0.15比1.00±0.21,P<0.05)蛋白表达水平均高于对照组。免疫荧光染色发现β-环连蛋白在BimP组和米诺地尔组新生毛囊的毛球细胞和皮脂腺细胞强表达,而对照组几乎未见荧光染色存在。结论BimP可通过激活经典Wnt/β-环连蛋白信号通路促进小鼠重构毛囊的毛发生长。