序列特异的三锌指多肽的构建及其在大肠杆菌中的表达

在获得单一锌指突变体的基础上 ,以小鼠转录因子Zif2 6 8的三锌指DNA结合区为模板 ,利用重叠 (Over lap)PCR技术 ,获得了关键氨基酸位点同时突变的三锌指突变体ZF12 3、2ZF12 3。ZF12 3、2ZF12 3分别克隆进pUC 18质粒 ,序列测定正确后 ,以pGEX 2T为表达质粒 ,在大肠杆菌JM10 9中实现了功能性的表达。经SDS PAGE分析 ,表达出了分子量 34 0kD的融合蛋白 ,扫描分析其含量在 2 0 %左右。菌体经超声波破碎后 ,对可溶性融合蛋白进行了纯化得到了游离的目的蛋白 ,为进一步的DNA结合特性分析、杂交转录因子的构建等奠定了基础。