超声波对滇重楼种子萌发能力的影响

研究超声波处理时间、温度、功率对滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)种子萌发的影响,寻找其萌发的最佳条件。通过室内常规发芽试验,统计滇重楼种子在不同超声波处理时间、温度、功率条件下的发芽率和发芽指数。结果表明,滇重楼种子经适当的超声波处理,缩短了萌发时间,提高了发芽率和发芽指数。40 min、50℃、200 W的超声波处理条件最适宜于滇重楼种子萌发。

四种重楼属植物中总黄酮含量的比较分析

以芦丁为对照品,利用AlCl3显色法分析重楼属（ParisL.）植物中总黄酮的含量.该方法在0.005～0.025 mg/mL （r=0.999 3）范围内线性关系良好,平均回收率达97.50％,RSD为1.89％.结果表明,不同种属、不同产地重楼属植物中总黄酮含量有显著性差异,可为开发利用重楼属资源提供参考.

不同处理方法对重楼种子萌发的Meta分析

应用Meta分析方法,通过中英文数据库筛选了1990—2019年关于重楼(Paris polyphylla)种子萌发的文献24篇,得到78个独立试验组,分析温度、机械、生长素、复合处理对重楼种子萌发的影响,并探讨较高海拔下重楼种子繁育的可能性。结果表明,恒温处理促进重楼种子萌发是一种简单可靠的方法,恒温、变温、沙藏方式的交互处理能够有效提高重楼种子发芽率(相对发芽率为0.61)。生长素使用不当会抑制重楼种子萌发。在相同处理条件下,滇重楼[Paris polyphylla Sm.var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz]比华重楼[Paris polyphylla Sm.var.chinese(Franch.)H.Hara]具有更好的发芽效率和稳定性。针对适宜重楼生长的较高海拔生境下种子发芽相关研究缺乏,需要针对较高海拔重楼繁育技术进行研究。

滇重楼最佳授粉期的研究

[目的]优选滇重楼的最佳授粉期。[方法]采用TTC法测定花粉的活力,并采用联苯胺-过氧化氢法测定柱头可授性,根据研究滇重楼花粉活力变化规律及柱头可授性优选滇重楼的最佳授粉期。[结果]滇重楼花粉囊开裂时活力最高为68.2%,前2 d内,花粉活力下降不明显。第4天开始,活力明显下降,但仍然具有一定的活性。柱头的活性在花粉囊开裂后5 d内最强,滇重楼的授粉应选择在这5 d内进行。[结论]该研究优选了滇重楼的最佳授粉期,为滇重楼的进一步开发利用提供了依据。

滇重楼辣椒轻斑驳病毒分离物的鉴定及全基因组序列分析

滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)是多年生草本植物,其药用部位为地下根茎,是一种重要的中药材。为明确侵染滇重楼的病毒病原,对采自云南省曲靖市的滇重楼进行透射电镜观察、DASELISA和RT-PCR技术检测。在透射电镜下观察到杆状病毒粒子,大小为(200~300)nm×(20~36)nm。对采集到的7份病样进行DAS-ELISA检测,结果表明,其中5份病样呈阳性。通过RT-PCR技术扩增、克隆获得1个全长为6357 bp的曲靖分离物PMMoV-QJ的全基因组序列。将PMMoV-QJ的全基因组序列与国内外已经报道的10个PMMoV分离物进行同源性分析比对,其同源性为99.42%~99.81%。基于全基因序列的系统发育分析表明,PMMoV-QJ与韩国分离物亲缘关系密切。本研究明确了该分离物的亲缘关系,从分子水平鉴定该分离物,为后续滇重楼病毒病的预防提供理论依据。

滇重楼新病毒ParV1的分子变异分析及致病性测定

为明确云南省引起滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)病毒病的病原,以昆明市发现的花叶、斑驳症状的滇重楼叶片为样品,进行透射电镜观察、高通量测序和反转录(RT-PCR)检测。结果表明,观察到大小约(700~1000)nm×13 nm的线状病毒粒子;基于高通量测序结果设计特异性引物进行RTPCR扩增并克隆,得到1条全长为10066个核苷酸(nt)的病毒序列,将该病毒暂命名为Paris virus 1(ParV1);BLAST比对分析表明,ParV1与马铃薯Y病毒属(Potyvirus)中的浙贝母花叶病毒(Thunberg fritillary mosaic virus,TFMV)具有最高为65.1%、68.9%的核苷酸及氨基酸(aa)序列同源性;多序列比对分析显示,ParV1多聚蛋白与potyviruses具有49.6%~65.1%的nt序列同源性及47.1%~68.9%的aa序列同源性;基于多聚蛋白氨基酸序列构建的系统发育树表明,该病毒与TFMV亲缘关系较近且聚为一个单独的分支。综上所述,确定ParV1属于Potyvirus的一种新病毒。将含ParV1的病毒汁液以机械摩擦的方法接种到心叶烟、本氏烟上对ParV1进行致病性初步测定。接种后的心叶烟植株叶片表现出明显病毒病症状,经RT-PCR及分子克隆在接种的心叶烟中检测到ParV1的存在,表明心叶烟植株受到ParV1的侵染,而接种的本氏烟上暂未检测到该病毒的存在。

黑籽重楼高效繁育及栽培技术

黑籽重楼(Paris thibetica Franch.)为百合科重楼属植物,属于名贵中药材。因其根茎生长缓慢,长期大量采挖使其野生资源面临枯竭,人工种植是缓解供需矛盾和保护野生资源的重要途径。通过对黑籽重楼的形态特征和生长习性进行总结,对人工栽培过程中的种苗繁育、选地整地、种植管理、病虫害防治以及采收、加工储存等进行详细地介绍,以期为黑籽重楼的人工高效繁育及生产栽培提供参考。

四川地区华重楼(Paris polyphylla var.chinensis)主要病害调查及病原菌鉴定

华重楼是重要的中药材,近年来,华重楼病害已成为制约四川华重楼产量和品质提高的重要因素之一。本研究对四川种植区华重楼病害进行了调查,共调查到主要危害华重楼病害有4种。通过组织分离法对相应的病原菌进行分离,并对病原菌进行致病性测定、形态学观察和分子生物学鉴定。试验结果显示,结合病原菌形态特征及r DNA-ITS、HSP60、G3PDH、RPB2、TEF、ACT、LSU、Alt琢1、TUB基因序列分析,并构建多基因分子系统发育树,鉴定出引起华重楼4种真菌病害病原菌,分别为华重楼叶枯病(Epicoccum sorghinu)、褐斑病(Alternaria tenuissima)、灰霉病(Botrytis cinerea)和黑斑病(Alternaria alternata)。目前,危害华重楼的最为严重的病害是灰霉病、褐斑病和叶枯病。华重楼主要病害的调查及病原菌种类的鉴定为华重楼病害的防治提供理论依据。

高通量RNA-seq技术开发梵净山重楼SSR标记

梵净山重楼(Paris polyphylla Smith var. chinensis)是中国重要的中草药之一。本研究利用MISA软件从重楼块根高通量转录组数据库的38 802条Unigenes中共搜索挖掘出6 333个SSR标记。66.76%的二核苷酸重复是这些SSR标记的主要重复类型,然后是18.77%的三核苷酸重复、11.50%的单核酸苷酸重复及2.97%的四核苷酸、五核苷酸和六核苷酸重复。在所有被功能注释的Unigenes中,481条Unigenes涉及调控重楼皂苷、黄酮、种子萌发和种子生长发育,从这些Unigenes共搜索挖掘到90个SSR标记。通过对这90个SSR标记的有效性验证,获得具有清晰扩增条带的SSR标记20对。以选取的14份重楼种质为材料,对扩增出清晰条带的20对SSR标记进行多态性检测后,获得16对具有多态性的SSR标记引物。引物多态性信息含量指数(polymorphism information content, PIC)介于0.067~0.561,平均值为0.293;14个重楼种质聚类在两个不同类群。本研究结果可为梵净山重楼种质资源鉴定、遗传多样性分析和分子标记辅助选择育种提供SSR标记。