重楼皂苷Ⅱ诱导黑色素瘤细胞B16F10铁死亡的作用研究

目的 探讨重楼皂苷Ⅱ对黑色素瘤细胞B16F10的抑制作用及可能的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的重楼皂苷Ⅱ对黑色素瘤细胞B16F10的抑制作用;透射电镜(TEM)观察细胞线粒体结构的变化;流式细胞仪检测活性氧(ROS)的变化;试剂盒检测铁死亡相关指标丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的含量、铁(Fe)的含量及谷胱甘肽(GSH)的水平;Western blot法检测铁死亡相关蛋白的表达变化。结果 与空白组相比,重楼皂苷Ⅱ处理后B16F10细胞的活性显著降低,具有剂量和时间依赖性。TEM可以观察到重楼皂苷Ⅱ处理后B16F10细胞中线粒体结构发生皱缩变小以及膜密度增加的变化。重楼皂苷Ⅱ作用后ROS的水平、MDA和Fe的含量提高,SOD的含量和GSH的水平降低。除此之外,重楼皂苷Ⅱ可以抑制黑色素瘤细胞B16F10中GPX4、FTH-1、SLC7A11蛋白的表达水平而促进P53、ACSL4蛋白的表达水平。结论 重楼皂苷Ⅱ可以抑制黑色素瘤细胞B16F10增殖,其可能与诱导细胞发生铁死亡有关。

重楼皂苷Ⅱ干预后肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力变化及其与miR-16-5p表达的关系

目的探讨重楼皂苷Ⅱ对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及其可能的机制。方法取对数生长期的肺癌A549细胞,分为高浓度组、中浓度组、低浓度组和对照组,分别加入3、2、1μmol/L重楼皂苷Ⅱ及等量二甲基亚砜溶液,干预24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖能力(以细胞增殖活力表示),细胞划痕实验检测细胞迁移能力(以细胞迁移率表示),Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力(以侵袭细胞数表示),Western blotting法检测凋亡相关蛋白[Cleave-Caspase-3、Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶2(MMP-2)]表达,实时荧光定量PCR法检测miR-16-5p表达。取对数生长期的A549细胞,分为miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组和阴性对照组,miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组分别转染含有绿色荧光标记的miR-16-5p inhibitor和miR-16-5p inhibitor NC,并加入2μmol/L重楼皂苷Ⅱ溶液,阴性对照组未进行细胞转染并加入等量二甲基亚砜溶液,干预24 h,参照上法检测miR-16-5p、凋亡相关蛋白表达及细胞生物学行为。结果高、中、低浓度组和对照组细胞增殖活力、细胞迁移率及侵袭细胞数均依次升高,组间两两比较P均<0.05。与对照组比较,高、中、低浓度组Cleave-Caspase-3、Bax、miR-16-5p表达均升高,Bcl-2、MMP-2蛋白表达均降低,以高浓度组变化最明显(P均<0.05)。miR-16-5p inhibitor组、miR-16-5p NC组和阴性对照组miR-16-5p相对表达量分别为0.07±0.05、1.57±0.07、1.00±0.03,miR-16-5p inhibitor组低于miR-16-5p NC组、阴性对照组(P均<0.05)。miR-16-5p NC组细胞增殖活力、细胞迁移率、侵袭细胞数及Bcl-2、MMP-2蛋白表达均低于miR-16-5p inhibitor组和阴性对照组,Cleave-Caspase-3、Bax蛋白表达均高于miR-16-5p inhibitor组和阴性对照组(P均<0.05),miR-16-5p inhibitor组和阴性对照组上述指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论重楼皂苷Ⅱ可抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与升高miR-16-5p表达有关。

重楼皂苷Ⅱ对乳腺癌细胞的生长抑制作用

目的:研究重楼皂苷Ⅱ(PPⅡ)对人乳腺癌细胞的作用及影响机制。方法:MTT法检测PPⅡ对乳腺癌Bcap37、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-453细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测PPⅡ对Bcap37和MDA-MB-231细胞周期分布和细胞凋亡的影响,Hoechst 33342染色观察细胞核变化,Western blotting检测蛋白表达。结果:PPⅡ对乳腺癌Bcap37、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-453细胞的增殖均具有抑制作用,并呈剂量依赖性;流式分析细胞周期分析PPⅡ阻滞Bcap37细胞在G2/M期,MDA-MB-231细胞在S期和G2/M期,细胞凋亡率呈浓度和时间依赖性;Hoechst33342显示细胞凋亡特征;Western blotting检测凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase9和Cleaved-PAPR增多。结论:PPⅡ对乳腺癌细胞系具有增殖抑制作用,其机制可能与引起G2/M期阻滞和促进细胞凋亡有关。

重楼皂苷Ⅱ诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的机制研究

目的:研究重楼皂苷Ⅱ诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的作用及机制。方法:采用MTT法观察重楼皂苷Ⅱ对B16细胞增殖的抑制作用;采用DAPI染色于倒置荧光显微镜下观察重楼皂苷Ⅱ对B16细胞诱导凋亡的形态学改变;Annexin V-FITC/PI双染及流式细胞术检测重楼皂苷Ⅱ对B16细胞凋亡率的影响;JC-1染色流式细胞仪检测重楼皂苷Ⅱ作用B16细胞后细胞线粒体膜电位的变化;Western blot检测重楼皂苷Ⅱ对B16细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2的表达变化。结果:重楼皂苷Ⅱ对B16细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈时间及浓度依赖性;重楼皂苷Ⅱ作用B16细胞后凋亡率随药物浓度的升高而升高;线粒体膜电位水平也随之显著降低,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);Western blot检测结果表明Bcl-2蛋白表达水平显著降低。结论:重楼皂苷Ⅱ可能通过线粒体氧化应激通路从而诱导B16细胞凋亡。

UPLC法测定重楼药材中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的含量

目的:建立超高效液相色谱法测定重楼中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ的含量。方法:色谱柱为Waters Acquity UPLC@BEHC(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0 ml·min^(-1),检测波长203 nm。结果:重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ在测定范围内呈良好的线性关系,其平均回收率为99.74%～100.18%,RSD为1.21%～1.96%。结论:本方法高效、便捷、结果准确,为重楼的质量控制提供了新的方法。

重楼皂苷Ⅱ对人皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖的影响

目的研究重楼提取物单体重楼皂苷Ⅱ在体外对A431人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的影响.方法采用MTT法检测重楼皂苷Ⅱ对体外培养的A431人皮肤鳞状细胞癌细胞株增殖的影响;透射电镜观察细胞超微结构的变化;采用流式细胞术检测重楼皂苷Ⅱ干预后A431人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖周期变化的情况.结果重楼皂苷Ⅱ对A431人皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖有明显的抑制作用,重楼皂苷Ⅱ对A431细胞增殖的抑制作用呈现出浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05).与此同时,重楼皂苷Ⅱ引起皮肤鳞状细胞癌细胞A431的超微结构发生变化,并将A431皮肤鳞状细胞癌细胞周期阻滞于S期(P<0.05).结论重楼皂苷Ⅱ对A431人皮肤鳞状细胞癌有潜在的抗癌作用,可能是通过对皮肤鳞状细胞癌细胞周期的阻滞及引起细胞凋亡而发挥作用.

重楼皂苷Ⅱ对高糖干预下肾小球系膜细胞增殖及氧化应激的影响

目的探讨重楼皂苷Ⅱ对高糖干预下肾小球系膜细胞(GMC)增殖及氧化应激损伤的影响。方法将GMC分为正常对照组、甘露醇对照组、高糖组和重楼皂苷Ⅱ组,分别用含有5.6 mmol/L葡萄糖、5.6 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇、25 mmol/L葡萄糖、25 mmol/L葡萄糖+20μg/mL重楼皂苷Ⅱ的杜氏改良伊格尔培养基培养24 h。检测4组细胞的增殖活性、丙二醛含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及活性氧含量。结果与正常对照组比较,高糖组、重楼皂苷Ⅱ组细胞的增殖活性、丙二醛含量、活性氧含量升高,SOD活性降低(P<0.05);与高糖组比较,重楼皂苷Ⅱ组细胞的增殖活性、丙二醛含量、活性氧含量减低,SOD活性升高(P<0.05)。结论重楼皂苷Ⅱ对高糖干预下GMC增殖有一定的抑制作用,并可减轻细胞氧化应激损伤,这可能与其减少细胞内活性氧产生和提高SOD活性有关。

HPLC梯度洗脱法同时测定散结止痛膏中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、3,4-二羟基苯甲酸甲酯和对香豆酸的含量

目的：采用高效液相梯度洗脱法建立散结止痛膏中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、3,4-二羟基苯甲酸甲酯和对香豆酸含量测定方法。方法：Hypersil C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）;体积流量：1.1ml/min;流动相A为乙腈,流动相B为0.05%磷酸溶液;检测波长λ1=203nm（检测重楼皂苷I和重楼皂苷Ⅱ）,检测波长λ2=303nm（检测3,4-二羟基苯甲酸甲酯和对香豆酸）。结果：重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、3,4-二羟基苯甲酸甲酯和对香豆酸分别在0.0736~1.4720μg（r=0.9999）、0.0314~0.6280μg（r=0.9996）、0.0114~0.2280μg（r=0.9997）、0.0182~0.3640μg（r=0.9993）范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.48%、97.70%、96.87%、98.21%,RSD（n=6）分别为0.82%、1.12%、1.24%、0.97%。结论：该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为散结止痛膏的含量控制方法。

高效液相色谱法测定云南红药胶囊中的三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定云南红药胶囊中三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ的含量,为云南红药胶囊质量的全面评价提供了科学依据。方法采用Diamonsil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,进行梯度洗脱(0~12 min,18.0%A;12~19 min,18.0%A→25.0%A;19~27 min,25.0%A→45.0%A;27~34 min,45.0%A→55.0%A;34~40 min,55.0%A→18.0%A),检测波长为203 nm。流速0.9 m L·min^(-1),柱温30℃,进样量为10μL。结果三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ5个成分分别在7.32~146.40、4.70~94.00、3.85~77.00、6.97~139.40、11.09~221.80 mg·L^(-1)内与色谱峰峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率均在97.12%~99.86%,RSD≤1.37%(n=6)。结论该研究建立的HPLC法同时测定云南红药胶囊中的5个成分,样品处理方法简便,方法专属性强,测定结果准确,重复性好,为云南红药胶囊质量的全面评价提供了科学依据。

重楼皂苷Ⅱ对A375人黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究重楼提取物单体重楼皂苷Ⅱ在体外对A375人黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养A375人黑素瘤细胞株,采用MTT法检测重楼皂苷Ⅱ对细胞增殖的影响,计算IC50值;透射电镜观察细胞超微结构的变化;采用流式细胞术检测重楼皂苷Ⅱ干预后A375人黑素瘤细胞凋亡的情况。结果重楼皂苷Ⅱ对A375人黑素瘤细胞的增殖有明显的抑制作用,24h的IC50值为12.04μmol/L。重楼皂苷Ⅱ对人A375细胞生长的抑制作用表现出时间和浓度依赖性。另外重楼皂苷Ⅱ引起A375黑素瘤细胞的凋亡率显著增加。结论重楼皂苷Ⅱ对A375人黑素瘤有潜在的抗癌作用,可能是通过诱导黑素瘤细胞凋亡而发挥作用。

重楼皂苷Ⅱ对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的观察重楼皂苷Ⅱ对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法不同浓度重楼皂苷Ⅱ作用于A549细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率;将细胞分为对照组和重楼皂苷Ⅱ低、中、高剂量组,JC-10荧光探针检测线粒体膜电位(MMP),Fluo-4 AM荧光探针检测细胞内Ca^(2+)水平,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达。结果与对照组比较,各浓度重楼皂苷Ⅱ可降低A549细胞存活率,差异均有统计学意义(P<0.01);重楼皂苷Ⅱ低、中、高剂量组A549细胞MMP显著降低,Ca^(2+)、ROS水平显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,重楼皂苷Ⅱ高剂量组Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论重楼皂苷Ⅱ可能通过降低细胞MMP,提高细胞内Ca^(2+)水平,增加细胞内ROS含量,调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3表达,促进A549细胞凋亡。

重楼皂苷Ⅱ联合喜树碱对肺癌H460、H446细胞凋亡及信号通路的影响

[目的]观察重楼皂苷Ⅱ(PSⅡ)联合化疗药物喜树碱(CPT)对肺癌细胞的作用及机制。[方法]采用噻唑蓝(MTT)法检测PSⅡ联合CPT对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞(H460)以及小细胞肺癌(SCLC)细胞(H446)的抑瘤效果。平板克隆法观察PSⅡ联合CPT作用于肺癌细胞后的细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PSⅡ联合CPT对肺癌细胞蛋白激酶B(AKT)、细胞外信号调节酶(ERK)、p38 MAPK的磷酸化活性及抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-XL的表达。[结果] MTT实验结果显示PSⅡ联合CPT对肺癌细胞有细胞毒活性并呈现剂量依赖性,且在细胞克隆实验中观察到两者具有很强的协同作用;两者联合增加了H460、H446细胞的晚期凋亡率,且显著增加了H446的早期凋亡率(70.10±3.44)%。Western blot结果显示,PSⅡ联合CPT作用于H460细胞,能明显上调p38 MAPK和ERK的磷酸化蛋白表达,对AKT磷酸化无明显作用,并下调了Bcl-2和Bcl-XL蛋白的表达。PSⅡ联合CPT作用于H446细胞,上调了AKT、p38 MAPK和ERK的磷酸化蛋白表达,并下调了Bcl-2蛋白的表达,对Bcl-XL无明显作用。[结论] PSⅡ可以作为CPT的增敏剂用于肺癌的治疗,为PSⅡ用于肺癌的治疗提供了依据。

HPLC法测定骨风宁胶囊中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ含量

目的建立骨风宁胶囊中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ含量的分析方法。方法采用C18色谱柱,以0.4%磷酸:乙腈(55∶45)为流动相,检测波长210nm,流速1mL.min-1,柱温40℃。结果在0.09816～0.9816mg.mL-1范围内,重楼皂苷Ⅰ的峰面积与浓度有良好的线性,r=0.9999;在0.09889～0.9889mg.mL-1范围内,重楼皂苷Ⅱ的峰面积与浓度有良好的线性,r=0.9998。重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的平均回收率为98.00%和98.90%。结论该方法操作简便,重现性好,能有效监控骨风宁胶囊的质量。

重楼皂苷Ⅱ诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的体外研究

目的初步探讨重楼皂苷Ⅱ抑制人胃癌MGC-803细胞增殖并诱导其凋亡的作用及机制。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,CCK-8法检测不同浓度的重楼皂苷Ⅱ作用于细胞后其存活率;DAPI染色观察细胞凋亡;AV/PI双染检测细胞凋亡率;比色法检测天冬氨酸蛋白水解酶caspase-3的活性;Western blot法检测Cyt-c的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,重楼皂苷Ⅱ可降低MGC-803细胞的存活率,且呈剂量与时间依赖性;镜下可见细胞核破碎,具有明显凋亡特征,凋亡率随着浓度的增大而增加(P <0.01);细胞内caspase-3的活性增加(P <0.01),Cyt-c蛋白的表达量明显增加(P<0.01)。结论重楼皂苷Ⅱ可明显抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖,并诱导细胞发生凋亡。

反相高效液相色谱法测定宫血宁片重楼皂苷Ⅰ与重楼皂苷Ⅱ含量

目的建立测定宫血宁片中重楼皂苷Ⅰ与重楼皂苷Ⅱ的高效液相色谱法。方法供试品用乙醇超声处理(功率250W,频率40kHz)提取,滤过,用乙醇定容后,注入高效液相色谱仪。色谱条件:C18色谱柱,乙腈-水(42:58)为流动相,检测波长210nm。结果重楼皂苷Ⅰ与重楼皂苷Ⅱ在0.16～0.80μg范围内线性关系良好,相关系数r为0.9998。结果该方法灵敏度高,结果准确、可靠,操作简便,适用于该产品中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的含量测定以及制剂质量控制。

重楼皂苷Ⅱ诱导肝癌HepG2细胞铁死亡作用机制

目的:探讨重楼皂苷Ⅱ(PPⅡ)诱导肝癌HepG2细胞发生铁死亡作用及其机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测PPⅡ(0、1.5、3.0、4.5、6.0、9.0、18.0 mg·L^(-1))对HepG2细胞体外增殖能力的影响;平板克隆实验检测HepG2细胞克隆形成能力;划痕实验检测HepG2细胞迁移能力;利用试剂盒检测HepG2细胞中乳酸脱氢酶(LDH)的含量;借助荧光倒置显微镜观察HepG2细胞的活性氧(ROS)水平;利用试剂盒检测HepG2细胞中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和游离Fe^(2+)的含量;利用透射电镜观察HepG2细胞的线粒体超微结构;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HepG2细胞中铁死亡相关蛋白p53、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)及转铁蛋白受体1(TFR1)表达的情况。结果:与空白组比较,PPⅡ组HepG2细胞存活率显著下降,并呈浓度依赖性(P<0.01),细胞克隆数显著减少(P<0.01),划痕愈合距离明显缩短,迁移距离和药物浓度呈反比(P<0.01),细胞LDH的泄漏显著增多(P<0.01),细胞内ROS相对荧光强度显著增强,细胞内脂质过氧化物MDA积累量显著增多(P<0.01),细胞内GSH含量随着药物浓度的增大而显著减少(P<0.01),细胞FeRhoNox-1荧光强度显著增强(P<0.01),细胞出现空泡,线粒体明显皱缩,线粒体嵴减少甚至消失。与空白组比较,PPⅡ组细胞中p53、ACSL4、TFR1蛋白表达明显上调,SLC7A11、GPX4蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:综上,PPⅡ通过调控p53/SLC7A11/GPX4信号通路轴,促进ACSL4表达和细胞摄取Fe3+,使抗氧化系统失衡,诱导HepG-2细胞铁死亡。

重楼皂苷Ⅱ通过线粒体与内质网应激途径诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的探讨重楼皂苷Ⅱ(polyphyllinⅡ,PPⅡ)对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞凋亡的影响及作用机制。方法选取OS的U2OS和HOS细胞株作为研究对象。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测PPⅡ对细胞活力的影响;克隆形成实验检测PPⅡ对细胞克隆形成能力的影响;5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)渗入实验检测PPⅡ对细胞DNA合成的影响;膜联蛋白V-异硫氰基荧光素/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双染法检测PPⅡ对细胞凋亡率的影响;JC-1荧光探针检测PPⅡ对线粒体膜电位变化的影响;Western blot法检测PPⅡ对B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase 3)、Caspase 7、Caspase 9、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3,cleaved Caspase 3)、cleaved Caspase 7、cleaved Caspase 9、多腺苷二磷酸多聚酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]、切割型多腺苷二磷酸多聚酶[cleaved poly(ADP-ribose)polymerase,cleaved PARP]、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、真核生物翻译起始因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、p-PERK和p-eIF2α蛋白表达水平的影响。结果PPⅡ显著性抑制OS细胞活力,并呈时间和剂量相关性;抑制细胞克隆形成和DNA合成;显著性增加细胞凋亡率,降低线粒体膜电位(P<0.05或P<0.01);显著性提高Bax/Bcl-2蛋白比值,升高cleaved Caspase 3、cleaved Caspase 7、cleaved Caspase 9、cleaved PARP、p-PERK、p-eIF2α、ATF4和CHOP蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论PPⅡ通过线粒体和内质网应激途径诱导OS细胞凋亡。

重楼皂苷Ⅱ的药理作用、药代动力学及不良反应研究进展

重楼作为我国传统的名贵中药材,主要分布在云南、广西、贵州等西南一带,具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效,治疗铁打伤痛、毒蛇咬伤、凉风抽搐等具有奇效,迄今已经有2000多年的应用历史。重楼皂苷Ⅱ结构上属于薯蓣皂苷,是重楼的主要活性成分之一,具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗菌、免疫调节、抗氧化、逆转多药耐药等多种药理活性,展现出良好的应用前景。其中,重楼皂苷Ⅱ的抗肿瘤作用受到广泛关注,其作用机制与抑制增殖、迁移和侵袭,诱导细胞周期阻滞、凋亡和自噬,抑制血管生成,调节肿瘤微环境等有关。药代动力学显示,重楼皂苷Ⅱ由于其溶解度低、吸收差、体内分布不理想、代谢慢等因素,导致其体内生物利用度低,严重限制其临床应用。近年来,重楼皂苷Ⅱ的不良反应报道增多,如具有较强的溶血活性,并对肝、肾、心肌、心血管细胞等产生明显细胞增殖抑制作用。以“重楼皂苷Ⅱ”“PolyphyllinⅡ”“Paris SaponinⅡ”为主要关键词,通过检索“中国知网”“维普”“万方”“PubMed”“Web of Science”“Elsevier SD”等中英文数据库,现从药理作用及其机制、药代动力学研究、不良反应3个方面对其研究进展进行综述,以期为重楼皂苷Ⅱ的深入研究和开发利用提供思路和参考。

重楼皂苷Ⅱ对人膀胱癌裸鼠移植瘤的影响

目的:评估重楼提取物单体重楼皂苷Ⅱ(PPⅡ)对人膀胱癌BALB/c裸鼠皮下移植瘤的疗效。方法:体外培养膀胱尿路上皮细胞癌T24细胞株,采用MTT法检测重楼皂苷Ⅱ对T24细胞增殖的影响,计算IC50值;建立荷T24人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型,全部成瘤后随机分为4组:对照组(10只):未予治疗;生理盐水组(10只):瘤体局部注射0.9%氯化钠溶液,5mg/kg,1次/周;PPⅡ组(10只):瘤体局部注射PPⅡ,5mg/kg,1次/周;丝裂霉素C对照组(MMC,10只):瘤体局部注射丝裂霉素C,1.5mg/kg,1次/周。连续治疗6周后处死动物,取出肿瘤称重,计算平均留重和抑瘤率,绘制皮下移植瘤生长曲线。相同方法处理裸鼠,观察60d,绘制生存曲线,计算平均生存时间。采用免疫组化方法检测Bcl-2、cytochrome c、caspase-3、caspase-9的表达。结果:重楼皂苷Ⅱ对T24细胞的增殖有明显的抑制作用,24、48、72h的IC50值为8.011,4.148,3.012μmol/L。体内实验阴性对照组皮下移植瘤生长迅速,重楼皂苷Ⅱ组和丝裂霉素组肿瘤生长减慢,重楼皂苷Ⅱ组肿瘤体积减小的趋势与MMC组相仿。治疗30d后皮下移植瘤体积:未治疗组为(1 530.83±37.93)mm3,生理盐水组为(1 510.01±22.18)mm3;重楼皂苷Ⅱ治疗组为(37.83±14.91)mm3,MMC治疗组为(23.28±11.62)mm3。重楼皂苷Ⅱ瘤重抑制率为70.32%,MMC组为76.59%。重楼皂苷Ⅱ组的平均生存时间为(48.70±3.07)d。病理切片见重楼皂苷Ⅱ治疗后,有广泛的细胞核浓缩,核碎裂,胞浆红染,部分区域呈现均质红染。免疫组化检查示重楼皂苷Ⅱ瘤体内注射治疗后主要引起了cytochrome c蛋白表达的增加。结论:重楼皂苷Ⅱ在体外、体内的实验中均见到其能抑制膀胱癌细胞的生长。重楼皂苷Ⅱ可能是通过线粒体凋亡途径引起细胞的凋亡,从而发挥抗膀胱癌的作用。

重楼皂苷Ⅱ对胶质瘤增殖、侵袭和替莫唑胺化疗敏感性的影响

目的:探究重楼皂苷Ⅱ对胶质瘤增殖,侵袭及耐药性的作用及机制。方法:CCk-8法检测不同浓度重楼皂苷Ⅱ对胶质瘤细胞系T98G和LN18增殖的影响。Transwell小室实验检测不同浓度重楼皂苷Ⅱ对胶质瘤细胞系T98G和LN18侵袭能力的影响。Western印迹法检测E-cadherin、Snail和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)表达。结果:重楼皂苷Ⅱ能抑制胶质瘤细胞系T98G和LN18的增殖,且随着浓度的增加和时间的延长抑制作用更强。T98G 24、48和72 h的IC 50分别为(5.82±0.32)、(3.57±0.07)、(1.48±0.35)μmol/L。LN1824、48和72 h的IC 50分别为(6.83±0.11)、(4.28±0.29)、(2.66±0.22)μmol/L。T98G和LN18分别以2、4和6μmol/L重楼皂苷Ⅱ处理24 h后,侵袭细胞面积占小室面积的百分比明显低于T98G和LN18以0μmol/L重楼皂苷Ⅱ处理24 h后的百分比,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western印迹实验检测发现与未经重楼皂苷Ⅱ处理的胶质瘤细胞相比,T98G与LN18中E-cadherin的表达较高(F=85.56,P<0.05;F=60.80,P<0.05),Snail的表达较低(F=25.34,P<0.05;F=48.28,P<0.05)。不同浓度替莫唑胺与重楼皂苷Ⅱ联合使用时,药物相互作用系数(CDI)均<1,Western印迹检测发现与未经重楼皂苷Ⅱ处理的胶质瘤细胞相比,T98G与LN18中MGMT的表达受抑制(F=40.38,P<0.05;F=48.44,P<0.05)。结论:重楼皂苷Ⅱ能抑制胶质瘤的增殖、侵袭并提高对替莫唑胺的敏感性。