重楼皂苷Ⅶ调控ROS诱导膀胱癌细胞凋亡和自噬

膀胱癌(bladder cancer,BC)是世界上最常见的一种泌尿生殖系统恶性肿瘤^([1])。目前,BC的治疗包括根治性膀胱切除术、放疗和化疗。然而,约有5%的患者在诊断时有远处转移。晚期或转移性BC的治愈效果差、预后差,接受一线铂类化疗的患者1年总生存率仅为36%^([2])。因此,迫切需要有效抑制BC而又有较低毒副作用的药物。

基于NF-κB通路探究重楼皂苷Ⅶ的抗炎作用机制

目的:探讨重楼皂苷Ⅶ(PSⅦ)的抗炎作用及机制。方法:利用MACS法从C57BL/6小鼠脾脏中分离初始T淋巴细胞。PSⅦ处理后,通过流式细胞术、RT-qPCR、Western blot检测PSⅦ对IL-6表达水平的影响;利用流式细胞术、Cell TraceTM Violet试剂盒检测PSⅦ对CD4+T细胞活化及增殖分化的影响;利用Western blot检测PSⅦ对IκBα、STAT3及其磷酸化蛋白表达的影响;RNA-seq检测PSⅦ处理后的差异基因。结果:PSⅦ显著抑制IL-6的表达。PSⅦ对CD4+T细胞的活化及增殖无明显影响,但对其分化有一定影响。PSⅦ抑制p-IκBα、p-STAT3的蛋白表达水平,但对IκBα、STAT3无影响。RNA-seq分析的差异基因有70个(27个上调、43个下调),从中筛选出6个并利用RT-qPCR得到验证。结论:PSⅦ可通过STAT3和NF-κB信号通路抑制IL-6的表达,从而缓解炎症。

基于PI3K/Akt信号通路探讨重楼皂苷Ⅶ对人结直肠癌细胞增殖的影响

目的:观察重楼皂苷(PP)Ⅶ对人结直肠癌HT29和LoVo细胞增殖的影响及可能机制。方法:使用梯度浓度的PPⅠ、PPⅡ、PPⅦ处理人结直肠癌HT29和LoVo细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测药物对细胞活力的影响,统计药物对应最大半抑制浓度(IC50)值;克隆形成实验检测PPⅦ干预10 d对人结直肠癌HT29和LoVo细胞克隆形成的影响;细胞增殖检测实验分析梯度浓度PPⅦ作用48 h对人结直肠癌HT29和LoVo细胞增殖的影响;通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测HT29和LoVo细胞中磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路中内PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白水平变化。结果:PPⅠ、PPⅡ、PPⅦ均能降低HT29和LoVo细胞的活力,以PPⅦ效果最为显著;PPⅦ能够有效抑制HT29和LoVo细胞的克隆形成能力;PPⅦ能够抑制HT29和LoVo细胞的增殖能力。PPⅦ各剂量组可降低对应的p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平。结论:PPⅦ可能通过下调PI3K和Akt的磷酸化水平,抑制PI3K/Akt信号通路,从而抑制结直肠癌细胞的增殖。

重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用

目的探讨重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用。方法 MTT法测定重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响。结果重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系(P<0.05)。同时发现,重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞作用48 h及72 h组与24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高(P<0.05),但72 h组与48 h组比较,无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,浓度为50μmol/L及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用A549/DDP细胞24 h后,与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高;且对细胞周期时相分布影响明显,细胞阻滞G2期。结论重楼皂苷Ⅶ对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈明显的浓度依赖性,与时间有一定相关性。重楼皂苷Ⅶ可引起早期凋亡细胞比例明显增加,并明显影响A549/DDP细胞周期时相分布。

重楼皂苷Ⅶ抑制内皮素1诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移

肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是由于肺血管收缩反应性增强及肺血管结构重建,最终引起肺动脉压力升高为特征的一组病理生理综合征[1-2]。其中,由肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖、迁移所引起的肺血管结构重建,是PAH形成的中心环节[3-5]。重楼为百合科植物云南重楼或七叶一枝花的干燥根茎,主要成分重楼皂苷具有抗肿瘤、止血、抗炎、镇痛、镇静、抑制血管生成、免疫调节、抗氧化等功效[6-7]。其中,抗炎及抑制血管生成的作用可能会对PAH的防治起一定作用。该文主要研究重楼皂苷Ⅶ(polyphyllinⅦ,PPⅦ)对内皮素-1(endothilin-1,ET-1)诱导的大鼠PASMCs增殖和迁移的作用。

重楼皂苷Ⅶ联合顺铂通过内质网应激诱导卵巢癌细胞凋亡

目的探讨重楼皂苷Ⅶ联合顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的分子机制。方法从中草药重楼块根中分离提取重楼皂苷Ⅶ,然后联合顺铂处理SKOV3细胞,分为以下4组:0.1μg/ml重楼皂苷Ⅶ+1μg/ml顺铂组、1μg/ml重楼皂苷Ⅶ+1μg/ml顺铂组、10μg/ml重楼皂苷Ⅶ+1μg/ml顺铂组、对照组。培养24h和48h后,MTT法检测细胞增殖率,Hoechst染色检测细胞凋亡率,Real-time PCR检测凋亡相关基因caspase3以及内质网应激相关基因XBP1和ATF4的表达。结果重楼皂苷Ⅶ联合顺铂能有效促进SKOV3细胞凋亡,其凋亡是通过内质网应激激活caspase途径引起的。结论重楼皂苷Ⅶ能有效抑制肿瘤细胞生长,为临床上治疗卵巢癌提供了实验依据。

重楼皂苷Ⅶ抑制肺癌H460细胞增殖和迁移能力研究

为研究重楼皂苷Ⅶ(polyphyllin Ⅶ)抑制人肺癌H460细胞增殖、迁移能力和诱导凋亡的作用和机制。本实验采用MTT法检测重楼皂苷Ⅶ处理后H460细胞生长抑制率,Hoechst 33258染色观察细胞形态,细胞集落形成实验考察细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell小室实验研究H460细胞迁移和侵袭能力的改变,并通过western blot法检测在重楼皂苷Ⅶ处理前后细胞蛋白表达变化情况。结果发现,重楼皂苷Ⅶ可显著抑制H460细胞增殖,影响其集落形成,并使细胞形态发生变化,抑制细胞体外的迁移和侵袭能力,并可诱导凋亡的发生。重楼皂苷Ⅶ处理后,H460细胞中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9显著降低,凋亡相关蛋白剪切型caspase-3、Bax表达增加,ICAD、Bcl-2表达降低,提示重楼皂苷Ⅶ体外可能通过调节基质金属蛋白酶抑制H460细胞迁移和侵袭,同时诱导凋亡的发生。

重楼皂苷Ⅶ下调S100A8抑制肺癌转移前微环境形成

目的:评估重楼皂苷Ⅶ干预MDSCs介导转移前微环境形成的作用,揭示"正虚伏毒"转移核心病机的生物学基础。方法:在C57BL/6小鼠上建立皮下移植瘤模型,随机分为4组,分别为生理盐水对照组(NS)、重楼皂苷Ⅶ组(PP7)、紫杉醇组(PTX)、重楼皂苷Ⅶ联合紫杉醇组(PP7+PTX),每组8只,每周给药3次,共用药两周。活体成像检测小鼠成瘤情况,流式细胞术检测外周血MDSCs表达,免疫组化检测MDSCs分泌的相关细胞因子和转移前微环境形成情况。结果:与对照组相比,PP7+PTX组与PP7组均可以控制瘤重(P<0.05),且PP7+PTX组在控制瘤体积方面具有显著性差异(P<0.001);小鼠体重方面无显著性差异;外周血中MDSCs的比例无显著性差异;免疫组化显示,与对照组相比,PP7、PTX、PP7+PTX组均可以下调IDO表达(P<0.01),而PP7+PTX组可下调Arg-1的表达(P<0.05);在转移前微环境方面,免疫组化检测显示,与对照组相比,PP7、PTX、PP7+PTX组均可以下调转移前微环境形成指标S100A8(P<0.05),但对S100A9无显著性差异。结论:重楼皂苷Ⅶ可抑制小鼠皮下瘤生长,并下调S100A8抑制转移前微环境形成,揭示重楼皂苷Ⅶ可能具有扶正的作用,但是否通过调控MDSCs发挥作用尚待进一步探索。

高效液相色谱法测定云南红药胶囊中的三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定云南红药胶囊中三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ的含量,为云南红药胶囊质量的全面评价提供了科学依据。方法采用Diamonsil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,进行梯度洗脱(0~12 min,18.0%A;12~19 min,18.0%A→25.0%A;19~27 min,25.0%A→45.0%A;27~34 min,45.0%A→55.0%A;34~40 min,55.0%A→18.0%A),检测波长为203 nm。流速0.9 m L·min^(-1),柱温30℃,进样量为10μL。结果三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ5个成分分别在7.32~146.40、4.70~94.00、3.85~77.00、6.97~139.40、11.09~221.80 mg·L^(-1)内与色谱峰峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率均在97.12%~99.86%,RSD≤1.37%(n=6)。结论该研究建立的HPLC法同时测定云南红药胶囊中的5个成分,样品处理方法简便,方法专属性强,测定结果准确,重复性好,为云南红药胶囊质量的全面评价提供了科学依据。

重楼皂苷Ⅶ对人结肠癌细胞株的抑制增殖及诱导凋亡作用研究

目的研究重楼皂苷Ⅶ(PP7)对人结肠癌细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡机制。方法采用不同浓度的PP7作用于人结肠癌细胞株HCT116,以噻唑蓝法检测细胞增殖活力,倒置显微镜观察细胞形态变化;软琼脂克隆形成实验检测细胞集落形成能力;流式细胞法检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PRAP)的表达。结果噻唑蓝法检测结果显示PP7可抑制HCT116细胞增殖,且抑制作用具有浓度剂量依赖性,二甲基亚砜以及PP7 1、2μmol/L处理后细胞增殖活力依次为(95. 8±3. 5)%、(61. 7±5. 8)%、(38. 6±4. 5)%,两两比较差异均有统计学意义(均P <0. 05)。PP7能明显抑制HCT116细胞的克隆形成能力,尤其PP7 2μmol/L浓度处理后不能形成任何菌落。PP7处理24 h后细胞凋亡明显增加,且Caspase-3和PRAP相对表达水平随PP7浓度(0、1、2μmol/L)增加而增加[Caspase-3:1. 00比(1. 86±0. 23)、(2. 57±0. 37),PRAP:1. 00比(2. 18±0. 34)、(2. 96±0. 45)],两两比较差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论 PP7能抑制人结肠癌HCT116细胞生长及诱导细胞发生凋亡,提示PP7可能是一种新的结肠癌治疗药物。

正交试验优选白花延龄草中重楼皂苷Ⅶ提取工艺研究

以白花延龄草干燥根茎为试验材料,采用正交试验法考察料液比、提取时间、提取温度3个因素对白花延龄草根茎中重楼皂苷Ⅶ含量的影响。采用HPLC法测定白花延龄草中重楼皂苷Ⅶ的含量,结果,影响白花延龄草根茎中重楼皂苷Ⅶ提取率的因素依次为提取温度>料液比>提取时间;白花延龄草根茎中重楼皂苷Ⅶ的最佳提取工艺条件为料液比1∶9、提取时间4 h、提取温度90℃。在此条件下,测得白花延龄草根茎中重楼皂苷Ⅶ的含量为0.931 mg/g。

重楼皂苷Ⅶ抑制结肠癌细胞迁移、侵袭及机制研究

目的研究重楼皂苷Ⅶ对人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞迁移、侵袭的抑制作用,初步探讨其可能的作用机制。方法用MTT方法测定重楼皂苷Ⅶ对HCT116细胞和SW620细胞的半数抑制浓度;划痕实验和Transwell迁移实验观察重楼皂苷Ⅶ抑制HCT116细胞和SW620细胞的迁移能力;侵袭实验观察重楼皂苷Ⅶ抑制HCT116细胞和SW620细胞的侵袭能力。Western blot检测蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达。结果重楼皂苷Ⅶ抑制HCT116细胞和SW620细胞增殖,其IC50值分别为(3.72±0.09)μmol/L和(3.46±0.13)μmol/L;重楼皂苷Ⅶ对人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞迁移、侵袭有一定的抑制作用,其作用呈明显的剂量依赖性;Western blot检测发现,给予重楼皂苷Ⅶ处理细胞后,明显升高E-cadherin蛋白表达水平,降低N-cadherin蛋白表达水平,均具有统计学意义(P<0.05)。结论重楼皂苷Ⅶ对人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞增殖、迁移、侵袭有一定的抑制作用,其作用呈明显剂量依赖性,并影响上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达,其机制可能是调控EMT过程抑制细胞迁移和侵袭。

重楼皂苷Ⅶ对替莫唑胺耐药胶质瘤细胞增殖、迁移及周期阻滞的影响

目的考察重楼皂苷Ⅶ对耐药胶质瘤的作用机制。方法采用划痕和Transwell小室检测细胞迁移,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞检测细胞周期,Western blot检测蛋白表达。结果重楼皂苷Ⅶ呈剂量依赖性抑制替莫唑胺耐药胶质瘤细胞增殖和迁移,涉及下调迁移相关蛋白N-cadherin,β-catenin,TGF-β受体1和smad2。耐药胶质瘤细胞具有天然G_(1)期阻滞现象,重楼皂苷Ⅶ可上调cyclin D1下调P21和P27影响其周期阻滞。结论重楼皂苷Ⅶ具有抗替莫唑胺耐药胶质瘤的作用和进一步开发的前景。

重楼皂苷Ⅶ对胰腺癌细胞的作用研究

目的:研究重楼皂苷Ⅶ对胰腺癌Miapaca-2细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:不同浓度的重楼皂苷Ⅶ处理胰腺癌细胞后,高内涵筛选(High-content screening,HCS)分析细胞数量、面积、迁移速度、圆度的变化;MTT法检测细胞存活能力;平板克隆技术检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell观察重楼皂苷Ⅶ抑制细胞的迁移能力;DAPI染色和流式细胞术检测细胞形态和凋亡情况;成球实验检测重楼皂苷Ⅶ对Miapaca-2干细胞的抑制情况;Real-time PCR检测重楼皂苷Ⅶ处理Miapaca-2干细胞标志物CD133的表达情况。结果:MTT结果显示重楼皂苷Ⅶ能明显抑制胰腺癌Miapaca-2细胞的活力,呈剂量依赖关系;重楼皂苷Ⅶ对胰腺癌细胞迁移、侵袭有一定的抑制作用;DAPI染色发现随着药物浓度升高,细胞形态发生明显变化,出现核固缩;流式结果表明细胞凋亡率随重楼皂苷Ⅶ浓度增大而逐渐升高;重楼皂苷Ⅶ可抑制Miapaca-2的成球能力;同时可导致Miapaca-2干细胞标志物CD133的表达降低。结论:重楼皂苷Ⅶ在体外可以抑制胰腺癌Miapaca-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞发生凋亡,并且抑制胰腺癌干细胞的增殖及干细胞标志物CD133的表达。

重楼皂苷Ⅶ抑制Wnt/β-catenin信号减少白细胞介素-1β诱导的关节软骨细胞凋亡和炎症介质分泌

目的分析重楼皂苷Ⅶ对白细胞介素(IL)-1β诱导的关节软骨细胞凋亡和炎症介质分泌的影响及机制。方法人关节软骨细胞分成对照组、IL-1β组(IL-1β处理)、重楼皂苷Ⅶ低剂量组(IL-1β和0.1μmol/L重楼皂苷Ⅶ处理)、重楼皂苷Ⅶ中剂量组(IL-1β和0.2μmol/L重楼皂苷Ⅶ处理)、重楼皂苷Ⅶ高剂量组(IL-1β和0.4μmol/L重楼皂苷Ⅶ处理)、重楼皂苷Ⅶ高剂量+LiCl组(IL-1β、Wnt/β-catenin信号激活剂LiCl、0.4μmol/L重楼皂苷Ⅶ处理),Western印迹检测β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、剪切的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3蛋白表达,CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞分泌IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8,微量法检测一氧化氮(NO)含量。结果与对照组比,IL-1β组关节软骨细胞中β-catenin、c-myc、iNOS蛋白表达量升高,细胞存活率降低,凋亡率和酶切Caspase-3蛋白表达量升高,细胞分泌的IL-6、TNF-α、IL-8、NO含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β组比较,重楼皂苷Ⅶ低剂量组、中剂量组、高剂量组关节软骨细胞中β-catenin、c-myc、iNOS蛋白表达量逐渐降低,细胞存活率逐渐升高,凋亡率和酶切Caspase-3蛋白表达量逐渐降低,细胞分泌的IL-6、TNF-α、IL-8、NO含量逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05);与重楼皂苷Ⅶ高剂量组比较,重楼皂苷Ⅶ高剂量+LiCl组关节软骨细胞中β-catenin、c-myc、iNOS蛋白表达量升高,细胞存活率降低,凋亡率和酶切Caspase-3蛋白表达量升高,细胞分泌的IL-6、TNF-α、IL-8、NO含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论重楼皂苷Ⅶ抑制Wnt/β-catenin信号减少IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡和炎症介质分泌。

基于lncRNA AL158206.1-ce RNA-miRNA-19a-3p对FOXP1的调控探索重楼皂苷Ⅶ抑制NSCLC细胞的分子机制

目的:基于lncRNA AL158206.1-ceRNA-miRNA-19a-3p对叉头框蛋白P1(forkhead box protein P1,FOXP1)的调控探索重楼皂苷Ⅶ(Paris saponin Ⅶ,PP7)抑制非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)细胞的分子机制。方法:Targetscan软件预测miRNA-19a-3p与FOXP1 mRNA 3’非编码区(3’untranslated region,3’UTR)的结合;Starbase软件预测miRNA-19a-3p与lncRNA AL158206.1的结合,并通过TCGA数据库阐述miRNA-19a-3p与lncRNA AL158206.1在多个肿瘤中的表达关系;Western blot和qPCR实验检测多种NSCLC中FOXP1、lncRNA AL158206.1和miRNA-19a-3p的表达;MTT检测PP7对HCC827活力的影响;选取2、4、8μmol/L浓度的PP7干预HCC827细胞24 h(n=3),同时采用短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默技术构建lncRNA AL158206.1RNA沉默慢病毒载体,并合成miRNA-19a-3p的抑制剂(miRNA inhibitor),转染细胞,分组干预,分组如下:空白组(无任何处理的正常培养细胞)、shRNA lncRNA组(转染shRNA慢病毒载体沉默lncRNA AL158206.1)、miRNA inhibitor组(转染miRNA inhibitor下调miRNA-19a-3p)、PP7组(4μmol/L PP7干预细胞24 h)、PP7+shRNA lncRNA组(在沉默lncRNA AL158206.1基础上用4μmol/L PP7干预细胞24 h)、PP7+shRNA lncRNA+miRNA inhibitors组(在沉默lncRNA AL158206.1和用4μmol/L PP7干预细胞24 h的基础上再用miRNA inhibitors转染细胞)(n=3),分别用流式细胞术检测各组细胞凋亡变化,caspase-3/7活性检测试剂盒检测各组细胞中caspase-3/7活性,Western blot与qPCR实验检测各组细胞中miRNA-19a-3p、FOXP1、lncRNA AL158206.1的表达。结果:预测显示miRNA-19a-3p与FOXP1 mRNA 3,-UTR具有特异性结合位点,miRNA-19a-3p与lncRNA AL158206.1具有特异性结合位点。进一步分析显示在多个肿瘤中miRNA-19a-3p与lncRNA AL158206.1具有显著负相关性(P<0.05)。在多个NSCLC中,相对于正常BEAS-2B细胞,HCC827细胞中FOXP1、lncRNA AL158206.1和miRNA-19a-3p的表达变化最显著(P<0.01)。PP7可时间-浓度依赖地抑制HCC827细胞活力,诱导HCC827细胞凋亡(P<0.01),上调HCC827细胞中caspase-3/7活性(P<0.01),提高HCC827细胞中FOXP1、lncRNA AL158206.1表达量(P<0.01),而抑制miRNA-19a-3p的表达(P<0.01)。进一步显示HCC827细胞中lncRNA AL158206.1的沉默并未影响细胞凋亡和caspase-3/7活性,但可提高miRNA-19a-3p的表达(P<0.01),抑制FOXP1 mRNA和蛋白表达(P<0.01);加入miRNA-19a-3p抑制剂和PP7单独干预后可显著促进HCC827细胞凋亡和caspase-3/7活性(P<0.01),提高lncRNA AL158206.1和FOXP1表达(P<0.01),抑制miRNA-19a-3p表达(P<0.01)。沉默lncRNA AL158206.1可逆转PP7对HCC827细胞凋亡和caspase-3/7活性的影响以及对lncRNA AL158206.1、miRNA-19a-3p、FOXP1表达的影响(P<0.01)。加入miRNA-19a-3p抑制剂可逆转lncRNA AL158206.1沉默对PP7对细胞凋亡和caspase-3/7活性以及miRNA-19a-3p、FOXP1表达的逆转作用(P<0.01)。结论:PP7可通过增强lncRNA AL158206.1-ceRNA-miRNA-19a-3p作用,降低miRNA-19a-3p对FOXP1表达抑制作用,从而提高FOXP1的表达,抑制NSCLC。

重楼皂苷Ⅶ通过抑制NF-κB信号通路对重症急性胰腺炎大鼠急性肺损伤的保护作用

目的:观察重楼皂苷Ⅶ(PPⅦ)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠急性肺损伤的保护作用,并探讨其可能作用机制。方法:将75只大鼠随机分成假手术组、模型组、地塞米松组(阳性对照,给予2 mg·kg^(-1)地塞米松)、低剂量PPⅦ组(给予50 mg·kg^(-1) PPⅦ)和高剂量PPⅦ组(给予150 mg·kg^(-1) PPⅦ),每组15只。除假手术组外,其他各组大鼠采用逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠溶液法建立SAP大鼠模型,术后立即给予相应药物处理。检测各组大鼠动脉血氧合指数(OI)和肺组织湿/干质量(W/D)比值,ELISA法检测各组大鼠血清脂肪酶和淀粉酶水平及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,HE染色观察各组大鼠胰腺组织和肺组织病理形态表现,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中核因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠胰腺和肺组织损伤严重,动脉血OI值明显降低(P<0.01),肺组织W/D比值、血清脂肪酶和淀粉酶水平、BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平及肺组织中核因子-κB抑制因子α(IκBα)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65(Ser536)蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组和高剂量PPⅦ组大鼠胰腺组织和肺组织损伤程度得到明显改善,动脉血OI比值明显升高(P<0.01),肺组织W/D比值、血清脂肪酶和淀粉酶水平、BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平及肺组织中IκBα和p-NF-κB p65(Ser536)蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:PPⅦ可能通过抑制NF-κB信号通路对SAP大鼠急性肺损伤发挥保护作用。

重楼皂苷Ⅶ药理作用及作用机制的研究进展

重楼是一种传统的清热解毒类中药。目前其所含的化学成分受到了国内外众多学者的研究与关注。重楼皂苷Ⅶ是活性成分之一,具有抗肿瘤、抗炎等作用,这些作用主要通过诱导细胞周期阻滞,诱导凋亡,诱导自噬,使肿瘤对化疗敏感,参与炎症和免疫反应的调节等机制实现。对重楼皂苷Ⅶ的药理作用和机制进行综述,为重楼皂苷Ⅶ的进一步研究和临床应用提供参考。

重楼皂苷Ⅶ调控BBOX1-AS1对肾癌细胞的影响

目的探讨重楼皂苷Ⅶ(PP7)通过调控长链非编码RNA(lncRNA)BBOX1反义RNA 1(BBOX1-AS1)对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将肾癌786-0细胞分为对照组、0.1μmol/L、0.3μmol/L、1μmol/L重楼皂苷Ⅶ(PP7-L组、PP7-M组、PP7-H组)、sh-LV(转染sh-LV)组、sh-BBOX1-AS1-LV(转染sh-BBOX1-AS1-LV)组、BBOX1-AS1-LV(转染pcDNA 3.1 BBOX1-AS1)组、PP7-H+BBOX1-AS1-LV(1μmol/L重楼皂苷Ⅶ+转染pcDNA 3.1 BBOX1-AS1)组。运用集落形成实验检测细胞集落形成能力,MTT法检测细胞活性,划痕试验检测细胞迁移,Transwell实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达,实时逆转录聚合酶链反应检测BBOX1-AS1表达水平。结果与对照组相比,PP7-L、PP7-M和PP7-H组集落形成数、细胞活性、划痕愈合率、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白表达和BBOX1-AS1表达水平逐渐降低,E-cadherin蛋白表达逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05),并呈浓度依赖性。干扰BBOX1-AS1降低786-0细胞的划痕愈合率、侵袭细胞数、细胞活性、集落形成数、BBOX1-AS1表达水平、N-cadherin蛋白表达,提高E-cadherin表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达BBOX1-AS1逆转重楼皂苷Ⅶ对786-0增殖迁移侵袭的影响。结论重楼皂苷Ⅶ通过下调BBOX1-AS1,抑制肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

重楼皂苷Ⅶ对K562细胞增殖和凋亡的作用机制研究

目的探讨重楼皂苷Ⅶ(PP7)抑制慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用机制,为临床治疗提供理论参考。方法用细胞增殖活性试剂盒(CCK-8)检测不同浓度PP7对K562细胞增殖的影响,用荧光素标记磷脂酰丝氨酸/碘化丙啶(Annexin-Ⅴ-FITC/PI)试剂盒检测PP7对K562细胞凋亡的作用,用免疫印迹法(Westernblot)检测PP7诱导K562细胞凋亡的作用机制。结果PP7能浓度依赖性地抑制K562细胞生长,Annexin V-FITC/PI结果表明,PP7以剂量依赖性方式诱导细胞凋亡。促凋亡蛋白Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)的水平随着PP7浓度的增加而增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2的水平下降。结论PP7通过线粒体调节的内在凋亡途径显著抑制K562细胞生长并诱导细胞凋亡,表明PP7在未来CML治疗中有成为治疗药的潜能。