高效液相色谱法测定云南红药胶囊中的三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定云南红药胶囊中三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ的含量,为云南红药胶囊质量的全面评价提供了科学依据。方法采用Diamonsil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,进行梯度洗脱(0~12 min,18.0%A;12~19 min,18.0%A→25.0%A;19~27 min,25.0%A→45.0%A;27~34 min,45.0%A→55.0%A;34~40 min,55.0%A→18.0%A),检测波长为203 nm。流速0.9 m L·min^(-1),柱温30℃,进样量为10μL。结果三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ5个成分分别在7.32~146.40、4.70~94.00、3.85~77.00、6.97~139.40、11.09~221.80 mg·L^(-1)内与色谱峰峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率均在97.12%~99.86%,RSD≤1.37%(n=6)。结论该研究建立的HPLC法同时测定云南红药胶囊中的5个成分,样品处理方法简便,方法专属性强,测定结果准确,重复性好,为云南红药胶囊质量的全面评价提供了科学依据。

重楼皂苷Ⅶ调控ROS诱导膀胱癌细胞凋亡和自噬

膀胱癌(bladder cancer,BC)是世界上最常见的一种泌尿生殖系统恶性肿瘤^([1])。目前,BC的治疗包括根治性膀胱切除术、放疗和化疗。然而,约有5%的患者在诊断时有远处转移。晚期或转移性BC的治愈效果差、预后差,接受一线铂类化疗的患者1年总生存率仅为36%^([2])。因此,迫切需要有效抑制BC而又有较低毒副作用的药物。

重楼皂苷Ⅵ通过调控SNRPD1抑制肝癌细胞增殖的机制研究

目的探讨重楼皂苷Ⅵ通过调控小核核糖核蛋白D1(SNRPD1)抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法①21只雄性裸鼠,采用皮下注射人肝癌Huh7细胞建立裸鼠肝癌移植瘤模型。裸鼠随机分为模型组(药物溶剂)、5 mg/kg重楼皂苷Ⅵ组、10 mg/kg重楼皂苷Ⅵ组,每组7只。连续腹腔注射给予相应干预10 d,观察各组裸鼠瘤体体积变化。②将人肝癌Huh7和JHH7细胞分为对照组和重楼皂苷Ⅵ组,采用重楼皂苷Ⅵ(0~15μmol/L)给予相应干预后,用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期情况,Western blot法和实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测SNRPD1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白和基因的表达情况。采用分子对接技术预测重楼皂苷Ⅵ和SNRPD1蛋白的潜在靶向结合情况。结果①与模型组比较,10 mg/kg重楼皂苷Ⅵ能抑制Huh7细胞裸鼠移植瘤生长(P<0.05)。②与对照组比较,重楼皂苷Ⅵ能抑制人肝癌Huh7和JHH7细胞的增殖(P<0.05)、细胞克隆形成(P<0.05)及诱导细胞周期的阻滞(P<0.05)。分子对接结果显示,重楼皂苷Ⅵ潜在靶向SNRPD1蛋白;Western blot和RT⁃qPCR结果显示,与对照组比较,重楼皂苷Ⅵ可以下调SNRPD1的蛋白表达水平(P<0.05),但不能下调SNRPD1 mRNA表达水平(P>0.05)。与对照组比较,重楼皂苷Ⅵ能下调SNRPD1的下游细胞周期蛋白Cyclin D1和CDK4的表达水平(P<0.05)。结论重楼皂苷Ⅵ可能通过调控SNRPD1发挥抗肝癌作用。

重楼皂苷Ⅶ通过p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 观察重楼皂苷Ⅶ对肝癌细胞恶性生物学行为的影响,并探讨相关机制。方法 于2021年6月至2022年6月,取对数期人肝癌HepG2细胞,分为对照组(常规培养)、重楼皂苷Ⅶ组(重楼皂苷Ⅶ0.8μmol/L)、SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路抑制剂]组(SB203580 10μmol/L)、联合组(重楼皂苷Ⅶ0.8μmol/L、SB203580 10μmol/L)。噻唑蓝法检测细胞增殖能力;膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;小室实验检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹法检测细胞p38 MAPK、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)蛋白表达。结果 与对照组24、48、72 h吸光度值,迁移率(74.33±9.37)%,凋亡率(3.25±0.78)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2及侵袭细胞数(364.92±47.99)个比较,重楼皂苷Ⅶ组24、48、72 h吸光度值,迁移率(11.21±3.35)%降低,凋亡率(39.87±8.94)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数(54.84±7.41)个减少(P<0.05);SB203580组24、48、72 h吸光度值,迁移率(89.30±14.56)%升高,凋亡率(1.05±0.15)%,p-p38MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数(617.04±75.34)个增加(P<0.05)。与重楼皂苷Ⅶ组比较,联合组24、48、72 h吸光度值,迁移率(40.52±8.18)%升高,凋亡率(11.30±2.80)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数(141.36±16.75)个增加(P<0.05);与SB203580组比较,联合组24、48、72 h吸光度值、迁移率降低,凋亡率、p-p38 MAPK/p38MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数减少(P<0.05)。结论 重楼皂苷Ⅶ可抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为,并诱导其凋亡,作用机制可能与激活p38 MAPK信号通路相关。

氮磷钾配方施肥提高林下七叶一枝花产量和重楼皂苷含量

【目的】研究氮、磷、钾不同组合用量对林下栽培七叶一枝花产量及重楼皂苷含量的影响,为七叶一枝花人工栽培合理施肥提供参考。【方法】采用“3414”试验设计,利用福建南平杉竹混交林下4年生七叶一枝花(Paris polyphylla Smith var.chinensis (Franch.) Hara)进行田间试验,将氮、磷、钾肥当地适宜水平定为“2”,分别为N 270 kg/hm^(2)、P_(2)O_(5) 375 kg/hm^(2)、K_(2)O 300 kg/hm^(2),不足“1”和过量“3”水平分别为适宜水平的0.5、1.5倍。在七叶一枝花收获时期,测定其植株形态、根茎产量、4种重楼皂苷含量等指标,并计算生产效益。【结果】氮、磷、钾肥用量均显著影响七叶一枝花的植株形态、根茎产量和重楼皂苷含量,对七叶一枝花根茎产量的提升率分别为59.75%、27.54%、63.15%,以钾肥的贡献率最高,其次为氮肥,磷肥较低。N1水平下,增加磷、钾水平显著降低七叶一枝花的株高、茎粗和叶长,N3水平七叶一枝花的株高、叶长均达到最高,但茎粗低于N1和N2水平,表明适宜氮肥用量对七叶一枝花的生长至关重要。七叶一枝花的根茎产量和总重楼皂苷含量还受肥料交互效应的影响。当N、P_(2)O_(5)、K_(2)O用量分别为270、375、450 kg/hm^(2) (N_(2)P_(2)K_3)和270、375、300 kg/hm^(2)(N_(2)P_(2)K_(2))时,根茎产量达到最高,分别为2804、2648 kg/hm^(2)。N_(2)P_(2)K_3的总重楼皂苷含量也最大,达到1.62%,显著高于其他处理。施氮磷钾肥净增收效益在N_(2)P_(2)K_3处理下最高,N_(2)P_(2)K_(2)处理次之。【结论】适量的氮、磷肥配合较高的钾肥可显著提升七叶一枝花根茎产量和总重楼皂苷含量,提高七叶一枝花的经济效益。因此,在供试地区,推荐N、P_(2)O_(5)、K_(2)O用量分别为270、375、450 kg/hm^(2)。

重楼皂苷Ⅰ预防给药对心肌缺血再灌注损伤大鼠调节PI3K/AKT信号通路的作用研究

目的 从磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路探讨重楼皂苷I预防给药对心肌缺血再灌注损伤(MI/IR)大鼠的干预机制。方法 将购买的72只SPF级SD大鼠按照随机数字法分为假手术组、模型组、阿司匹林组、重楼皂苷I低、中和高剂量组,每组12只。分组后即给予相应药物干预2周,2周后构建MI/IR模型。模型构建成功24 h后先采用动物彩色多普勒超声仪检测心脏功能,后处死大鼠收集相关组织采用HE染色观察心肌病理学、TTC法检测心肌梗死面积,试剂盒检测心功能指标[乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和谷草转氨酶(AST),抗氧化指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)],TUNNEL染色检测心肌细胞凋亡特点,Western blot检测心肌PI3K、AKT、B细胞淋巴瘤/因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果 假手术组心肌纤维排列整齐、无水肿,模型组有心肌纤维断裂,重楼皂苷I低、中、高剂量组和阿司匹林组明显改善心肌纤维断裂情况。与假手术组相比,模型组大鼠心肌梗死面积、LVEDP、LDH、CK-MB、AST和MDA明显升高(P<0.05),LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、SOD和GSH明显降低(P<0.05);相较于模型组,阿司匹林组和重楼皂苷I低、中、高剂量组干预后,心肌梗死面积、LVEDP、LDH、CK-MB、AST和MDA明显降低(P<0.05),LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、SOD和GSH则明显升高(P<0.05)。Tunnel染色可见,假手术组几乎没有心肌细胞凋亡,而模型组呈现出明显的大量的细胞凋亡;与模型组相比,阿司匹林组和重楼皂苷I低、中、高剂量组凋亡情况明显好转。此外,与假手术组相比,模型组大鼠心肌PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达均明显降低,Bax明显升高(均P<0.05);相较于模型组,重楼皂苷I低、中、高剂量组以及阿司匹林组PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达均明显升高,Bax蛋白表达明显降低(均P<0.05)。结论 重楼皂苷I对心肌缺血再灌注损伤有一定的预防作用,其作用机理可能与其能够调节PI3K/AKT信号通路有关。

基于NF-κB通路探究重楼皂苷Ⅶ的抗炎作用机制

目的:探讨重楼皂苷Ⅶ(PSⅦ)的抗炎作用及机制。方法:利用MACS法从C57BL/6小鼠脾脏中分离初始T淋巴细胞。PSⅦ处理后,通过流式细胞术、RT-qPCR、Western blot检测PSⅦ对IL-6表达水平的影响;利用流式细胞术、Cell TraceTM Violet试剂盒检测PSⅦ对CD4+T细胞活化及增殖分化的影响;利用Western blot检测PSⅦ对IκBα、STAT3及其磷酸化蛋白表达的影响;RNA-seq检测PSⅦ处理后的差异基因。结果:PSⅦ显著抑制IL-6的表达。PSⅦ对CD4+T细胞的活化及增殖无明显影响,但对其分化有一定影响。PSⅦ抑制p-IκBα、p-STAT3的蛋白表达水平,但对IκBα、STAT3无影响。RNA-seq分析的差异基因有70个(27个上调、43个下调),从中筛选出6个并利用RT-qPCR得到验证。结论:PSⅦ可通过STAT3和NF-κB信号通路抑制IL-6的表达,从而缓解炎症。

重楼皂苷Ⅰ抗肿瘤作用研究进展

恶性肿瘤已成为威胁全球健康的重大难题之一。化疗和靶向治疗是其重要的药物治疗手段,但由于药物不良反应和耐药性严重影响患者的治疗依从性、生活质量和治疗效果。越来越多的研究表明,中草药是探索新型抗癌疗法的天然宝库,具有很高的医用价值。清热解毒法是中医治疗恶性肿瘤的基本法则之一。清热解毒类中草药重楼,其性微寒,味苦,有小毒,归足厥阴肝经,具有消肿止痛、清热解毒、凉肝定惊之功效。重楼主要适用于疔疮痈肿、咽喉肿痛、蛇虫咬伤、跌打损伤以及惊风抽搐等症。重楼皂苷Ⅰ是中草药重楼的有效活性成分之一,其化学结构为C_(44)H_(70)O_(16)。大量实验表明,重楼皂苷V能通过抑制肿瘤细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡自噬、逆转肿瘤耐药、抑制肿瘤血管生成、抑制肿瘤EMT、调节肿瘤微环境等途径抑制多种恶性肿瘤细胞生长。查阅国内外关于重楼皂苷Ⅰ抗肿瘤作用及机制的相关文献,对其进行归纳总结,为重楼皂苷Ⅰ抗肿瘤作用机制深入研究及抗肿瘤新药研发提供相应参考。

重楼皂苷Ⅰ对雄激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞增殖与凋亡的影响

目的研究重楼皂苷Ⅰ对雄激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞生长抑制与诱导凋亡的作用。方法CCK-8法检测重楼皂苷Ⅰ对PC-3细胞生长的影响;流式细胞仪检测重楼皂苷Ⅰ对PC-3细胞周期的影响;TUNEL法检测重楼皂苷Ⅰ对PC-3细胞凋亡的影响。结果重楼皂苷Ⅰ高、中、低剂量组(1、0.5、0.25μg/mL)能时间和浓度依赖性的抑制PC-3细胞,与阴性对照组比较,抑制率差异有统计学意义(P<0.01);高、中剂量组与阳性对照组(顺铂2.5μg/mL)比较,抑制率差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞检测提示:重楼皂苷Ⅰ高、中、低剂量组作用于PC-3细胞后,G0/G1期细胞明显增加,S期细胞减少。与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。高、中剂量组与阳性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL法检测提示:重楼皂苷Ⅰ高、中、低剂量组PC-3细胞凋亡率均显著增加,且呈剂量-效果正相关,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论重楼皂苷Ⅰ能抑制雄激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞的增殖,促进细胞凋亡。

重楼皂苷Ⅰ凝结HepG2细胞膜胆固醇增加阿霉素敏感性的研究

目的 探究重楼皂苷Ⅰ凝结细胞膜胆固醇影响肿瘤细胞对化疗药物敏感性的作用。方法 采用不同摩尔比的重楼皂苷Ⅰ与胆固醇进行体外结合实验,并培养HepG2细胞,给予不同浓度重楼皂苷Ⅰ,检测细胞内总胆固醇含量、FilipinⅢ标记细胞内胆固醇,透射电镜观察细胞膜形态学变化,免疫荧光染色标记细胞膜脂筏及ABCA1,Western bolt法检测ABCA1蛋白表达,并通过激光共聚焦与细胞流式仪检测阿霉素的吸收作用。最后,通过CCK-8实验明确重楼皂苷Ⅰ对阿霉素的增敏作用。结果 重楼皂苷Ⅰ在体外可与胆固醇结合形成凝胶固态物;可降低HepG2细胞总胆固醇含量,改变细胞膜形态,降低细胞膜脂筏含量并抑制外排蛋白ABCA1表达,从而增加化疗药物阿霉素吸收提高敏感性。结论 重楼皂苷Ⅰ可凝结细胞膜胆固醇,改变细胞膜通透性使化疗药物吸收和敏感性增加。

重楼中皂苷类成分抗肿瘤作用及机制研究进展

重楼作为清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的传统中药,近年来因其较好抗肿瘤活性逐渐得到重视,重楼皂苷是重楼最主要的抗肿瘤活性成分。大量科学研究表明其主要活性成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ为抗肿瘤的物质基础,以上成分抗肿瘤机制主要是通过诱导细胞凋亡和自噬、抑制细胞生长增殖和阻滞增殖周期、抑制肿瘤转移、抑制肿瘤耐药,增强化疗敏感性、影响细胞器(线粒体、内质网)的功能活动、抑制肿瘤血管生成等途径抑制多种恶性肿瘤细胞生长。本文对重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ在抗肿瘤研究方面的成果及作用机制进行归纳总结,为重楼皂苷类药物的开发和利用及临床抗肿瘤的应用进一步提供思路。

云南重楼果皮中1个新的C_(21)甾体皂苷

目的:研究云南重楼果皮中的甾体皂苷类成分。方法:采用HPD-100大孔吸附树脂柱、正相硅胶柱、ODS柱、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱和半制备型高效液相色谱等方法对云南重楼果皮70%乙醇渗漉提取物中的甾体皂苷类成分进行系统研究,通过现代波谱学技术结合参考文献对化合物结构进行鉴定。结果:从云南重楼果皮中分离得到8个甾体皂苷类化合物,分别鉴定为:17α-hydroperoxide pregn-5-en-20-one-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)]-β-D-glucopyranoside(1)、重楼皂苷Ⅳ(2)、ypsilandroside L(3)、重楼皂苷Ⅲ(4)、pregna-5,16-dien-3β-ol-20-one-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)]-β-D-glucopyranoside(5)、pregna-5,16-dien-3β-ol-20-one-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[α-L-arabinopyranosyl-(1→4)]-β-D-glucopyranoside(6)、pregna-5,16-dien-3β-ol-20-one-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)]-β-D-glucopyranoside(7)、aethioside A(8)。结论:其中,化合物1为一个新的C_(21)甾体皂苷类化合物,化合物3、5、6、8为首次从重楼属植物中分离得到。

云南重楼的皂苷类化学成分研究

目的 研究云南重楼根状茎中的皂苷类化学成分。方法 利用硅胶柱色谱、硅胶C-18柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及半制备高效液相色谱等技术,从云南重楼根茎70%乙醇提取物的水饱和正丁醇萃取物中,纯化得到单体成分。通过NMR、MS等波谱分析和酸水解等化学方法对其进行结构鉴定。结果 共分离得到6个皂苷类化合物,分别鉴定为parisyunnanosideⅠ(1)、paristenoside B(2)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β,16α,26-三羟基-(23R,25R)-16,23-环胆甾烷醇-5,17(20)-二烯-22-酮-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-17,22-二羟基-(25R)-呋甾-5-烯-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、parisyunnanoside A(5)和26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β,26-二羟基-(25R)-胆甾-5,17(20)-二烯-16,22-二酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)。结论 化合物3、4和6为首次从云南重楼中发现。

重楼皂苷凝胶剂制备工艺研究

通过体外透皮实验和处方优化等手段制备一种以重楼为主要成分的凝胶剂,对其载药量、质量控制、透皮吸收等进行全面考察。以卡波姆-940、丙二醇、PEG-400、薄荷脑、樟脑为辅料,采用冷溶法制备凝胶剂;通过载药量考察及质量考察对其配比进行优化。结果表明,最优处方配比为卡波姆-940∶丙二醇:PEG-400∶薄荷脑∶樟脑=1∶2∶4∶1.44∶2.34(质量比),按此配比所得凝胶剂质地均匀,黏稠度高,通过该工艺制备的重楼皂苷凝胶剂具有良好的成形性、可涂抹性,相对药理作用明显,胶粒分散均匀。

不同病害对滇重楼甾体皂苷积累的影响

为研究根腐病、茎腐病、叶斑病对滇重楼根茎中甾体皂苷类活性成分积累的影响,采用高效液相色谱法(HPLC)对3种患病(根腐病、茎腐病、叶斑病)及健康滇重楼根茎中7种活性成分(重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅲ、重楼皂苷Ⅴ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷H)的含量进行测定;采用超高效液相色谱-电喷雾-四极杆飞行时间高分辨质谱联用(UPLC-ESI-Q-TOF-MS)技术对患病及健康滇重楼根茎中甾体皂苷类成分进行鉴定,并对质荷比m/z 50~2000的主成分进行分析。结果表明,在HPLC条件下,健康及患病滇重楼中均未检测到重楼皂苷Ⅴ;重楼皂苷H仅在茎腐病滇重楼根茎中检测到,且重楼皂苷H含量较高;重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ总含量表现为叶斑病>根腐病>茎腐病>健康滇重楼。通过UPLC-ESI-Q-TOF-MS从患病及健康滇重楼根茎中共鉴定出18个甾体皂苷成分;根腐病、茎腐病和叶斑病中甾体皂苷的化学成分均少于健康滇重楼。

基于PI3K/Akt信号通路探讨重楼皂苷Ⅶ对人结直肠癌细胞增殖的影响

目的:观察重楼皂苷(PP)Ⅶ对人结直肠癌HT29和LoVo细胞增殖的影响及可能机制。方法:使用梯度浓度的PPⅠ、PPⅡ、PPⅦ处理人结直肠癌HT29和LoVo细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测药物对细胞活力的影响,统计药物对应最大半抑制浓度(IC50)值;克隆形成实验检测PPⅦ干预10 d对人结直肠癌HT29和LoVo细胞克隆形成的影响;细胞增殖检测实验分析梯度浓度PPⅦ作用48 h对人结直肠癌HT29和LoVo细胞增殖的影响;通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测HT29和LoVo细胞中磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路中内PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白水平变化。结果:PPⅠ、PPⅡ、PPⅦ均能降低HT29和LoVo细胞的活力,以PPⅦ效果最为显著;PPⅦ能够有效抑制HT29和LoVo细胞的克隆形成能力;PPⅦ能够抑制HT29和LoVo细胞的增殖能力。PPⅦ各剂量组可降低对应的p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平。结论:PPⅦ可能通过下调PI3K和Akt的磷酸化水平,抑制PI3K/Akt信号通路,从而抑制结直肠癌细胞的增殖。

重楼皂苷通过p53/SLC7A11信号轴促进三阴性乳腺癌细胞铁死亡的机制研究

目的探讨重楼皂苷对三阴性乳腺癌细胞铁死亡的影响及其机制。方法用0、10、20、30、40、50μmol/L重楼皂苷处理三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用CCK-8法检测细胞活性。取对数生长期MDA-MB-231细胞,随机分为对照组、重楼皂苷组(30μmol/L重楼皂苷处理12 h)、抑制剂组(2μmol/L Ferrostatin-1处理12 h)与重楼皂苷+抑制剂组(2μmol/L Ferrostatin-1处理12 h后,30μmol/L重楼皂苷处理12 h),采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR和Western blotting检测二价金属离子转运体1(DMT1)、转铁蛋白受体1(TFR1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、p53、p53/溶质运载蛋白7家族成员11(SLC7A11)的表达情况。结果CCK-8法检测结果显示,MDA-MB-231细胞存活率随重楼皂苷浓度的升高而降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。与对照组比较,重楼皂苷组细胞存活率以及CPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞凋亡率以及TFR1、DMT1、p53 mRNA和蛋白相对表达量升高,抑制剂组CPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白相对表达量升高,细胞凋亡率以及TFR1、DMT1、p53 mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05);与重楼皂苷组比较,重楼皂苷+抑制剂组细胞存活率以及CPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白相对表达量升高,细胞凋亡率以及TFR1、DMT1、p53 mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05);与抑制剂组比较,重楼皂苷+抑制剂组细胞存活率以及CPX4、SLC7A11 mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞凋亡率以及TFR1、DMT1、p53 mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论重楼皂苷可抑制三阴性乳腺癌细胞增殖,促进乳腺癌细胞铁死亡,其机制可能与p53/SLC7A11信号轴的调控作用有关。

滇重楼皂苷含量测定及累积规律研究

以7年生普洱景东种源滇重楼为材料,采用HPLC法测定滇重楼不同生长年限根茎,及茎、叶、花、种子等器官中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量,建立各部位的HPLC图谱;应用HPLC法测定1月、3月、5月、7月、9月、11月不同生长期滇重楼1年生根茎皂苷含量的变异规律。结果表明:滇重楼根部总皂苷含量显著高于其他器官;不同生长年限滇重楼根部总皂苷含量差异显著(P<0.05),皂苷含量从高到低排列为根茎2 a龄段、根茎3 a龄段、根茎4~5 a龄段、根茎1 a龄段、叶、种子、芽、茎、须根、果皮、花;非根茎部位中叶片总皂苷含量显著高于种子、果皮、茎等组织;不同生长季节总皂苷含量高低变化规律为1月>3月>5月、9月>7月、11月。因此,滇重楼根茎适宜在2 a龄、1—3月休眠季节进行采收。

重楼皂苷Ⅵ对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制

目的探讨重楼皂苷Ⅵ(PPⅥ)对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法以人脑胶质瘤LN229细胞为对象,采用MTT法检测不同浓度PPⅥ[0(对照组)、1、2、4、8、16、32、64μmol/L]作用不同时间(24、48、72 h)后的细胞存活率,采用克隆形成实验检测不同浓度PPⅥ[0(对照组)、2、4、8μmol/L]作用14 d后的细胞克隆数和克隆形成率,采用流式细胞术和Western blot法分别检测不同浓度PPⅥ[0(对照组)、4、8μmol/L]作用24 h后的细胞凋亡率和凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、切割的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)]、Fas/Fas配体(FasL)死亡受体通路相关蛋白、蛋白激酶B(又称Akt)/糖原合成激酶3β(GSK-3β)通路相关蛋白的表达情况。结果与对照组比较,PPⅥ各浓度组细胞的存活率、克隆数和克隆形成率、Bcl-2蛋白的表达水平和Akt、GSK-3β蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);细胞凋亡率,Bax、cleaved caspase-3蛋白和Fas、FasL、cleaved caspase-8蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论PPⅥ可抑制人胶质瘤LN229细胞的增殖并诱导其凋亡,这种作用可能与激活Fas/FasL死亡受体通路和抑制Akt/GSK-3β通路有关。

正交实验优化重楼皂苷Ⅰ的微波提取工艺

在单因素实验的基础上,通过正交实验优化重楼皂苷Ⅰ的微波提取工艺。确定最佳提取工艺为:乙醇体积分数45%、微波功率300 W、微波温度80℃、微波时间35 min、料液比1∶15(g∶mL),在此条件下,重楼皂苷Ⅰ提取率达到5.47%。该方法操作简单、省时、高效,可用于重楼皂苷Ⅰ的提取。