表达人GM-CSF重组痘苗病毒抗肿瘤作用的实验研究

将ｈＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ插入含有Ｐ１１ｋ及Ｐ２５ｋ双向启动子的痘苗病毒载体ｐＪ１２０的Ｐ１１ｋ启动子下游，而Ｐ２５ｋ下游则为ＬａｃＺ基因，构建成表达质粒ｐＪ１２０／ＧＭ－ＣＳＦ。以此质粒与痘苗病毒天坛株共转染ＴＫ－１４３细胞，在ＢＵｄＲ存在下，利用蓝斑筛选及纯化获得重组病毒ＲＶＪ１２０／ＧＭ－ＣＳＦ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果均证实，重组病毒ＤＮＡ中ＧＭ－ＣＳＦ基因整合，ＴＦ１测活显示重组病毒可表达有活性的ＧＭ－ＣＳＦ，且分泌到上清中。将表达ＧＭ－ＣＳＦ的重组痘苗病毒体外感染肿瘤细胞制备的裂解物，接种于荷瘤大鼠，能明显地抑制大鼠Ｗａｌｋｅｒ实体瘤的生长。