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重组人β-防御素基因在COS-7细胞的转染表达 被引量:10
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作者 蔡绍晖 杜军 +2 位作者 陈新年 黄宁 王伯瑶 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 2000年第4期433-437,共5页
为探索建立持续稳定表达 h BD- 2的哺乳类动物型工程细胞的可能性 ,作者研究构建真核重组表达载体 p CMV.tag2 B/h BD- 2以进行 COS- 7细胞转染表达实验。将本室克隆获得的 h BD- 2全长 c DNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒 p CMV.... 为探索建立持续稳定表达 h BD- 2的哺乳类动物型工程细胞的可能性 ,作者研究构建真核重组表达载体 p CMV.tag2 B/h BD- 2以进行 COS- 7细胞转染表达实验。将本室克隆获得的 h BD- 2全长 c DNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒 p CMV.tag2 B构建出 h BD- 2的重组表达载体 p CMV.tag2 B/h BD- 2 ,并经 DNA测序证明h BD- 2 c DNA片段的插入方向和其全长 c DNA的碱基组成顺序均准确无误。通过脂质体转染法将 p CMV.tag2 B/h BD- 2导入 COS- 7细胞。RT- PCR法和免疫印迹法分别从 m RNA水平和蛋白质水平检测到被转染的 COS- 7细胞系能有效表达 h BD- 2。 展开更多
关键词 COS-7细胞 基因转染 重组人β-防御素 抗生
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重组人β-防御素-2基因的植物表达载体的建立 被引量:4
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作者 蔡绍晖 余懋群 +3 位作者 杨晓鹃 杜军 黄宁 王伯瑶 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期385-389,共5页
目的 运用植物转基因技术 ,探索构建表达人类 β-防御素 - 2 ( h BD- 2 )的植物生物反应器的可能性及技术路线。方法 将 C端带 myc和 6x His双标记的重组 h BD- 2基因插入植物真核表达载体 p CAMBIA13 0 4中 ,构建 C端带 m yc和 6x Hi... 目的 运用植物转基因技术 ,探索构建表达人类 β-防御素 - 2 ( h BD- 2 )的植物生物反应器的可能性及技术路线。方法 将 C端带 myc和 6x His双标记的重组 h BD- 2基因插入植物真核表达载体 p CAMBIA13 0 4中 ,构建 C端带 m yc和 6x His双标记的重组 h BD- 2植物真核表达载体 rp CAMBIA13 0 4/ h BD- 2 / His。利用此载体转化根癌农杆菌 L BA44 0 4,经卡那霉素进行抗性基因筛选和 PCR检测 ,确定根癌农杆菌的阳性克隆。重组 h BD- 2通过转化阳性的根癌农杆菌被导入小麦幼胚愈伤组织细胞 ,经潮霉素进行抗性基因筛选 ,获得抗性愈伤组织。结果 酶切分析、PCR验证和 DNA测序等证据表明 :C端带 m yc和 6x His双标记的重组 h BD- 2已被正确地插入 p CAMBI-A13 0 4载体中 ,并位于 Ca MV 3 5 S与 Nos终止子之间 ,提示重组 h BD- 2 / His基因的植物表达载体 rp CAMBI-A13 0 4/ h BD- 2 / His已被成功构建。卡那霉素抗性基因筛选和 PCR检测显示 :rp CAMBIA13 0 4/ h BD- 2 / His已成功转化根癌农杆菌 L BA44 0 4,阳性克隆菌株已获得。潮霉素抗性筛选结果提示 :h BD- 2基因被导入小麦幼胚愈伤组织细胞。结论 本研究为进一步培育 h BD- 展开更多
关键词 重组人β-防御素-2基因 植物表达载体 植物转基因技术 可能性 技术路线
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血清TIM-4、HBD2表达水平与肺炎支原体肺炎儿童病情的相关性研究
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作者 张娟 徐建英 何苗 《中国妇幼健康研究》 2024年第10期37-42,共6页
目的探讨血清T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域分子-4(TIM-4)和人β-防御素2(HBD2)表达水平与肺炎支原体肺炎(MPP)儿童病情的相关性。方法选取本院于2020年7月至2023年1月收治的142例MPP患儿为研究对象,根据病情严重程度分为普通MPP组(n=99)... 目的探讨血清T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域分子-4(TIM-4)和人β-防御素2(HBD2)表达水平与肺炎支原体肺炎(MPP)儿童病情的相关性。方法选取本院于2020年7月至2023年1月收治的142例MPP患儿为研究对象,根据病情严重程度分为普通MPP组(n=99)和难治性MPP组(n=43),另选取同期140例健康体检儿童为对照组。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清TIM-4和HBD2水平;收集患儿临床资料,并采用多因素Logistic回归分析发生难治性MPP的影响因素;使用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TIM-4和HBD2水平对难治性MPP的诊断价值。结果普通MPP组和难治性MPP组在发热时间、住院时间、阿奇霉素治疗时间、中性粒细胞百分比、白细胞计数、反复呼吸道感染、肺外并发症方面比较差异具有统计学意义(t/χ^(2)值介于2.195~21.265,P<0.05);与对照组相比,研究组血清TIM-4和HBD2表达水平均明显升高(t=34.527、40.646,P<0.001);与普通MPP组相比,难治性MPP组血清TIM-4和HBD2表达水平均明显升高(t=12.410、15.316,P<0.001);多因素Logistic回归分析结果显示,血清TIM-4水平(OR=1.423,95%CI:1.140~1.776)、HBD2水平(OR=1.436,95%CI:1.162~1.775)、发热时间(OR=1.349,95%CI:1.056~1.724)、中性粒细胞百分比(OR=1.334,95%CI:1.032~1.725)、反复呼吸道感染(OR=1.521,95%CI:1.245~1.858)和肺外并发症(OR=1.432,95%CI:1.152~1.780)均是发生难治性MPP的独立危险因素(P<0.05)。ROC结果显示,血清TIM-4水平单独诊断难治性MPP发生的曲线下面积(AUC)为0.845(95%CI:0.774~0.900),灵敏度、特异度分别为69.77%、85.86%;血清HBD2水平单独诊断难治性MPP发生的AUC为0.815(95%CI:0.742~0.875),灵敏度、特异度分别为74.42%、82.83%;二者联合诊断难治性MPP发生的AUC为0.908(95%CI:0.848~0.950),灵敏度、特异度分别为90.70%、81.82%,显著高于血清TIM-4水平单独诊断(Z=2.047,P=0.040)和血清HBD2水平单独诊断(Z=2.443,P=0.015)。结论血清TIM-4及HBD2水平在肺炎支原体肺炎儿童中表达升高,且二者水平对难治性肺炎支原体肺炎具有一定诊断价值。 展开更多
关键词 肺炎支原体肺炎 T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域分子-4 重组人β-防御素2
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