重组人内皮抑素的氨基酸组成分析

目的:应用 Hitachi L-8800型氨基酸分析仪对重组人内皮抑素(rh-endostatin)进行氨基酸组成分析,以为其结构确认提供依据。方法:采用酸水解,以外标法测定样品的氨基酸含量及其组成。结果:测定了 rh-endostatin 样品中15种氨基酸的组成,与其理论值相符,误差在15%以内。结论:以氨基酸自动分析仪对样品进行氨基酸组成分析,重复性好,误差较小,能够为样品的结构确认提供一定的依据。

人内皮抑素endostatin基因的融合表达纯化及活性测定

目的:获得有活性的人内皮抑素(endostatin)融合蛋白. 方法:从人胎肝组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出endostatin基因,定向克隆重组入pTRX表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,纯化,MTT法测定endostatin蛋白对人脐带静脉血管内皮细胞的抑制活性. 结果:RT-PCR获得endostatin基因,扩增产物在10 g/L 琼脂糖凝胶上显示为1条扩增条带,约573 bp,与预计大小一致.将PCR产物连入PGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,阳性克隆经KpnⅠ,NotⅠ酶切鉴定、测序验证.构建pTRX-endo表达载体,在大肠杆菌BL21 (DE3)中的表达,经SDS-PAGE分析,出现特异性蛋白质条带,大小与预期相符合.重组蛋白经纯化,MTT 法测定重组人内皮抑素蛋白具有生物学活性.人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)受到明显抑制,具有剂量依赖抑制关系,ED50=550μg/L. 结论:人内皮抑素基因在原核细胞表达载体pTRX中获得成功表达,表达蛋白能够抑制人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)的增殖.

重组内皮抑素的临床研究进展

重组内皮抑素能特异地抑制肿瘤血管形成,有效抑制肿瘤的生长和转移,为肿瘤的治疗提供了新途径。近几年的临床研究证实,重组内皮抑素无论单独应用还是与化疗药物联合应用均显示出了良好的抗肿瘤效果,且毒性低,安全性好,值得临床进一步深入研究和推广。本文就重组内皮抑素的临床应用进展做一综述。

放疗联合周剂量重组人血管内皮抑素对A549肺腺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的研究

目的:研究放疗联合周剂量重组人血管内皮抑素(recombinant human endostatin,rh-Endostatin)对肺腺癌A549裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:40只裸鼠A549细胞移植瘤模型随机分成4组:空白对照组、rh-Endostatin治疗组、放射治疗组和放疗联合rh-Endostatin治疗组,观察并绘制肿瘤生长曲线图,计算肿瘤体积抑制率;肿瘤组织行常规HE病理学检查,免疫组织化学法检测肿瘤组织中微血管内皮CD31的表达及肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)的变化;采用免疫组织化学及Western印迹法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达;TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡。结果:治疗第8天起,放疗联合rh-Endostatin治疗组的肿瘤体积与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。15 d后,rh-Endostatin治疗组、放射治疗组和放疗联合rh-Endostatin治疗组小鼠的肿瘤体积的抑制率依次为68.35%、90.78%和106.56%;rh-Endostatin治疗组小鼠的MVD较放射治疗组下降明显(P<0.05);但rh-Endostatin治疗组与对照组、放疗联合rh-Endostati治疗组及放射治疗组相比,VEGF的改变差异均无统计学意义;放疗联合rh-Endostatin治疗组细胞凋亡明显。结论:放疗联合周剂量rh-Endostatin能抑制肿瘤的生长,较早诱导肿瘤退缩,可能与减少放射治疗后肿瘤血管再生及增加肿瘤细胞和内皮细胞的凋亡相关;各治疗组小鼠均未出现急性不良反应,因此该方法具有短疗程的优势,可用于临床推广。

γ干扰素和内皮抑素双基因表达质粒在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达

目的构建双基因表达质粒pEgr-IFNγ-endostatin并检测其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达。方法利用基因重组技术构建含Egr-1启动子的IFNγ和endostatin双基因表达质粒,脂质体介导体外转染Lewis肺癌细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同剂量X射线诱导IFNγ和endostatin表达的量效关系和时程。结果酶切鉴定证实Eg-r1启动子、IFNγ和endostatin基因正确插入双基因表达载体pIRES1neo;不同剂量X射线照射转染该重组质粒的Lewis肺癌细胞上清中IFNγ和endostatin表达量明显高于假照组(均P<0.001),其中5Gy照后表达量最高,分别为假照组的4.14倍和2.92倍;2GyX射线照后Lewis肺癌细胞上清中IFNγ和endostatin含量随时间延长而增加,照后36h分别为照射前的3.75倍和3.02倍(均P<0.001)。

恩度联合化疗晚期肺癌的护理

恩度（重组人血管内皮抑素，YH一16．Endostatin）是美国Folkman博士提出的“饿死肿瘤疗法”，即肿瘤抗血管生成理论在实践中的产物。Endostatin不损伤正常的组织细胞，因而避免了一般化疗药物常见的耐药性。该药2006年7月在我国上市，近年来已成为肿瘤治疗的新策略。笔者所在科室自2008年4月至2008年5月采用恩度联合GP方案（吉西他滨＋顺铂）治疗晚期肺癌3例，现将护理体会报告如下。

Endostar体外稳定性研究

目的:比较重组人内皮抑素恩度TM(EndostarTM)和毕赤酵母表达的内皮抑素(endostatin)在不同温度及不同pH条件下的稳定性,通过检测对内皮细胞的增殖抑制比较Endostar在4℃和37℃下的生物活性。方法:将Endostar和endostatin于4℃保存或37℃放置96 h后进行不同条件的聚丙烯酰胺凝胶电泳,比较Endostar和endostatin之间以及它们在不同温度放置后的电泳行为,采用兔源多克隆抗体进行Western blot验证。同时检测在两种温度下的Endostar对于人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞增殖的抑制作用。结果:在还原性电泳中Endostar和endostatin在20 kD左右处均只出现一条带。在3种酸性非还原电泳条件下,endostatin出现明显的"smear"现象,无法观察到主要条带,Endostar在酸性不连续非还原电泳条件下只出现一条带,而在两种连续非还原电泳中虽然也出现"smear"现象,但是主要条带仍然存在,Endostar和en-dostatin在37℃放置96 h后与它们保存在4℃的样品相比,在各种电泳条件下有相似的电泳行为,Western blot验证了相应电泳的结果。在两种温度下的Endostar对于HUVEC的增殖抑制作用基本相同。结论:Endostar和endostatin具有相似的热稳定性,但在酸性条件下Endostar较endostatin更为稳定。