血清成纤维细胞生长因子-21、基质金属蛋白酶-9与儿童过敏性紫癜性肾炎的关系

目的探讨血清成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与儿童过敏性紫癜性肾炎(HSPN)的关系。方法选取2020年1月至2022年12月成都市妇女儿童中心医院收治的125例过敏性紫癜(HSP)患儿为研究对象,将37例由HSP继发为HSPN的患儿设为HSPN组,其余88例HSP患儿设为单纯HSP组。对比两组患儿临床症状及血清FGF-21、MMP-9水平变化,分析血清FGF-21、MMP-9水平与肾功能指标[血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)]的关系。结果单因素分析显示,HSPN组患儿血清FGF-21、MMP-9水平也明显高于单纯HSP组(P<0.05)。HSPN患儿血清FGF-21、MMP-9水平与Scr、BUN、UA水平均呈正相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,血清FGF-21及MMP-9水平的升高为诱发HSPN的独立危险因素(P<0.05)。由于两项指标的特异度相对较低,故采用FGF-21与MMP-9串联的方式联合检测对HSPN进行诊断,其诊断敏感度为78.38%,特异度为81.82%,联合检测的特异度显著高于单一指标(P<0.05),同时灵敏度损失较小,并且诊断结果与实际结果具有中高度一致性(Kappa>0.4),具有临床应用价值。结论血清FGF-21及MMP-9与儿童过敏性紫癜性肾炎有关系,参与了HSPN病理过程;两项指标联合试验有助于提高HSPN的诊断效能。

骨髓增殖性肿瘤患者血清金属蛋白酶抑制剂-1、基质金属蛋白酶-9、血管内皮生长因子与骨髓纤维化程度的相关性

目的探讨骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者血清血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)与骨髓纤维化(MF)分级的关系。方法选择90例费城染色体阴性(Ph-)MPN初诊患者为MPN组。根据世界卫生组织(WHO)2016年骨髓纤维化分级标准将MPN患者分为纤维化前期或早期组54例和明显纤维化期组36例;另选取健康志愿者50例作为对照组。采用酶联免疫吸附实验检测血清VEGF、MMP-9、TIMP-1水平并计算TIMP-1与MMP-9比值(TIMP-1/MMP-9)。采用Spearman秩相关检验分析VEGF、MMP-9、TIMP-1、TIMP-1/MMP-9与MF分级的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标单独或联合诊断MPN或区分MF分级的预测价值。结果与对照组相比,MPN组血清VEGF、MMP-9和TIMP-1均升高,差异有统计学意义(P<0,05)。VEGF、MMP-9、TIMP-1、TIMP-1/MMP-9诊断MPN的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.745、0.923、0.618;VEGF、MMP-9和TIMP-1联合诊断MPN的AUC为0.960;当最佳截断值为0.627时,敏感度为85.56%,特异度为92.00%。与纤维化前期或早期组相比,明显纤维化期组患者血清VEGF、TIMP-1、TIMP-1/MMP-9均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,VEGF(r=0.378,P=0.001)、TIMP-1(r=0.512,P<0.001)、TIMP-1/MMP-9(r=0.353,P=0.001)与MPN患者MF分级呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,VEGF、MMP-9、TIMP-1、TIMP-1/MMP-9区分纤维化前期或早期患者和明显纤维化期患者的AUC分别为0.723、0.523、0.802、0.708;VEGF、TIMP-1和TIMP-1/MMP-9联合区分纤维化前期或早期患者和明显纤维化期患者的AUC为0.838;当最佳截断值为0.530时,敏感度为72.22%,特异度为85.19%。结论血清VEGF、TIMP-1和TIMP-1/MMP-9均可反映MPN患者MF进展,各指标联合检测可预测MPN患者MF程度。

重组牛碱性成纤维细胞生长因子联合玻璃酸钠治疗干眼症研究

目的 探讨基于泪液炎症因子、血清基质金属蛋白酶水平变化分析白内障术后干眼症患者采取重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶联合玻璃酸钠的临床效果。方法 按随机对照分组原则将河南省郑州市第二人民医院2021年1月至2023年1月收治的白内障术后干眼症患者105例(105眼)分为对照组与观察组。对照组(53例,53眼)采用玻璃酸钠治疗,观察组(52例,52眼)采用玻璃酸钠结合重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶治疗,两组均治疗8周。对比两组临床疗效、疾病改善情况、生活质量、血清实验室指标及不良反应。结果 观察组临床有效率(96.15%)比对照组(81.13%)高(P<0.05);治疗8周后观察组眼表疾病指数(OSDI)量表评分比对照组低,视功能相关生存质量量表-25(NEI-VFQ-25)评分比对照组高(P<0.05);治疗8周后观察组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平均比对照组低(P<0.05);两组治疗期间不良反应对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 白内障术后干眼症患者接受重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶联合玻璃酸钠的效果明显,可促进疾病改善,提高患者生活质量,降低泪液炎症因子水平,且不良反应少,整体安全性高。

补充重组人源胶原蛋白对离心运动后小鼠骨骼肌细胞外基质重塑的影响

背景:胶原蛋白是含量最为丰富的胞外基质成分,与骨骼肌细胞外基质的结构、功能密切相关,但补充由生物工程技术生产的重组人源胶原蛋白(recombinant human collagen,rhC)对骨骼肌细胞外基质的影响及机制尚不清楚。目的:探讨补充rhC对离心运动后骨骼肌细胞外基质重塑的影响及作用机制。方法:将104只8周龄健康雄性C57小鼠随机分为对照组(生理盐水)、rhC低剂量组(0.2 g/kg)、中剂量组(1.0 g/kg)和高剂量组(2.0 g/kg),连续7 d灌胃干预后每组选取2只小鼠,解剖各脏器进行苏木精-伊红染色判断炎性浸润情况,其余小鼠于第8天进行离心运动,分别在离心运动后即刻(0),24,48,96 h观察细胞外基质结构变化,检测小鼠抓握力、血清肌酸激酶活性、骨骼肌组织基质金属蛋白酶2,9,14和基质金属蛋白酶抑制剂2的蛋白水平。结果与结论:①苏木精-伊红染色观察短期补充rhC对心脏、肝脏、脾、肾无显著影响;②一次性离心运动后,rhC中、高剂量组小鼠抓握力恢复率显著升高(P<0.01);③各组肌酸激酶变化趋势一致,组间无显著性差异;④rhC低剂量组细胞外基质恢复进程快于对照组,rhC中、高剂量组肌束膜较为完整;⑤rhC高剂量组基质金属蛋白酶9蛋白水平显著降低(P<0.05);⑥rhC中、高剂量组基质金属蛋白酶14蛋白水平显著降低(P<0.05);⑦rhC中、高剂量组基质金属蛋白酶2蛋白水平显著降低(P<0.05);⑧rhC中、高剂量组基质金属蛋白酶抑制剂2蛋白水平显著升高(P<0.05);⑨rhC各剂量组基质金属蛋白酶2/基质金属蛋白酶抑制剂2比值显著降低(P<0.05)。该研究发现连续7 d预补充1.0,2.0 g/kg rhC可通过调节基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶抑制剂来抑制运动后骨骼肌细胞外基质降解,从而促进小鼠骨骼肌力量恢复。

不同浓度重组人骨形成蛋白2和碱性成纤维生长因子对犬骨髓基质细胞的生物学作用

目的:骨形成过程由骨形成蛋白诱导开始,并受到多种生长因子的综合调控。为建立良好的细胞培养体系和配制含有多种生长因子的活性材料,观察不同浓度的重组人骨形成蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子对犬骨髓基质细胞增殖、成骨分化的影响。方法:实验于2007-05/07在上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔生物工程实验室完成。①实验材料:1岁beagle犬3只。重组骨形成蛋白2,碱性成纤维细胞生长因子(Peprotech)。②实验方法:犬肌注麻醉后,穿刺抽取2mL骨髓,离心制备骨髓基质细胞,进行原代培养。待细胞80%汇合时,胰酶+乙二胺四乙酸消化传代。③实验评估:取传至第3代的细胞,接种后分别加入重组骨形成蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,各自分为0,25,50,100,200μg/L组。于第1,2,3,4,5,6天倒置显微镜下动态观察细胞形态;MTT比色法测定细胞增殖水平;碱性磷酸酶活性定量检测细胞成骨分化情况;于第6天行VonKossa及碱性磷酸酶染色。结果:①细胞形态观察:第3代骨髓基质细胞诱导培养3d后,多角形细胞增多,细胞逐渐向梭形或多边形转化,胞体膨大,存在大小形态不一的胞浆突起,胞核较大,位于细胞体一侧,偶见2个核仁;约6d细胞融合,仍以长梭形或线形为主,集落生长趋势明显。②细胞增殖测定:与空白对照组比较,100,200μg/L重组骨形成蛋白2能显著促进骨髓基质细胞生长,且浓度为100μg/L时随作用时间的延长细胞生长速度增加尤为明显(P<0.01);50μg/L碱性成纤维细胞生长因子能显著促进骨髓基质细胞生长(P<0.05)。③细胞成骨分化测定:与空白对照组比较,25μg/L重组骨形成蛋白2能显著促进犬骨髓基质细胞分化,且随作用时间的延长细胞分化尤为明显(P<0.01)。碱性成纤维细胞生长因子无显著促进犬骨髓基质细胞分化作用。④VonKossa染色结果:各组均有明显钙结节形成。⑤碱性磷酸酶染色结果:各组胞质内均可见紫色颗粒,呈阳性表达。结论:100μg/L重组人骨形成蛋白2与50μg/L碱性成纤维细胞生长因子均能有效地促进犬骨髓基质细胞增殖,25μg/L重组人骨形成蛋白2可明显促进犬骨髓基质细胞成骨分化,为构建活性骨替代材料提供良好的实验平台。

自制中药醇提物对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶1及血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的:探讨自制中药醇提物对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)Ⅰ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶1(MMP-1)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法:在体外培养KFB中加入500μg/ml自制中药醇提物,采用免疫细胞化学方法检测KFB中Ⅰ型胶原蛋白、MMP-1及VEGF的表达。结果:在自制中药醇提物的作用下,KFB中Ⅰ型胶原蛋白表达减弱,MMP-1表达增强,VEGF表达呈双向性改变。结论:自制中药可能通过影响KFB合成Ⅰ型胶原蛋白、MMP-1及VEGF而发挥治疗瘢痕疙瘩的作用。

重组反转录病毒碱性成纤维细胞生长因子基因转染对人骨髓基质细胞成骨的影响

背景:国内外有关成纤维细胞生长因子基因转染促血管和促肌肉生长的研究较多,而成纤维细胞生长因子基因促成骨的研究未见报道。目的:观察重组反转录病毒retroviruspLXSN/碱性成纤维细胞生长因子基因转染对人骨髓基质细胞成骨能力的影响。方法:从健康志愿者全骨髓中分离培养人骨髓基质细胞,体外扩增纯化后分为4组:①retroviruspLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组:培养液中加入碱性成纤维细胞生长因子基因重组反转录病毒。②retroviruspLXSN组:培养液中加入反转录病毒空载体。③阳性对照组:培养液中添加地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠。④空白对照组:不给予特殊处理。结果与结论:经多次换液传代,人骨髓基质细胞呈均一梭形形态。处理后retroviruspLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组与阳性对照组细胞形态逐渐趋于扁平,突起减少。免疫组织化学染色见retroviruspLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组碱性成纤维细胞生长因子表达明显强于其他3组。retroviruspLXSN/碱性成纤维细胞生长因子和阳性对照组可引起细胞碱性磷酸酶活性增高和矿化结节及骨胶原形成。提示基因重组反转录病毒成纤维细胞生长因子转染对人骨髓基质细胞成骨能力具有促进作用。

重组人碱性成纤维细胞生长因子中的游离巯基含量测定

通过检测重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)中的游离巯基的含量,探讨rh-bFGF分子中游离巯基的存在状态。方法 通过Ellman法对大规模生产的3批rh-bFGF原液中的游离巯基进行含量测定。结果 3批rh-bFGF原液每摩尔蛋白中游离巯基的实测值为3.675摩尔、3.889摩尔、3.664摩尔。结论 rh-bFGF分子中游离巯基的理论值为4摩尔/摩尔蛋白,实测值与理论值较为一致,说明目标蛋白rh-bFGF基本没有形成二硫键。

转化生长因子-β1介导的角膜基质细胞外基质纤维化体外三维培养模型的构建

背景 角膜损伤修复过程中细胞外基质（ECM）纤维化是角膜瘢痕形成的基础,转化生长因子-β1（TGF-β1）可引起角膜基质过度产生ECM.我们在前期的研究工作中构建了角膜基质三维培养模型,而将TGF-β1添加于该三维培养体系中是否可达到构建角膜基质ECM纤维化的体外三维培养模型有待研究.目的 评估TGF-β1对该三维培养模型中ECM纤维化相关基因表达的影响,确定该三维培养体系是否可以作为角膜基质ECM纤维化的体外三维培养候选模型.方法分离新鲜成年牛角膜,并在基础培养液（DMEM/F12＋体积分数10％胎牛血清）中进行角膜基质细胞的培养,将5＆#215;105个牛角膜基质细胞收集于15 ml离心管中构建体外三维培养模型（Pellet）,根据培养液中添加的TGF-β1质量浓度的不同分为基础培养液组（无TGF-β1）、基础培养液＋0.5 ng/ml TGF-β1组和基础培养液＋1.0 ng/ml TGF-β1组,于培养2周时用钙黄绿素-AM/碘化丙啶法（Calcein-AM/PI）法进行细胞活性测定;分别于培养后48 h、1周和2周应用实时荧光定量PCR（real-time PCR）和Western blot法检测各组Pellet中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）、ColⅢmRNA及其蛋白的表达. 结果 Pellet模型培养后48 h,角膜基质细胞开始抱团,培养后2周经Calcein AM/PI染色证实绝大多数细胞存活.培养后48 h、1周和2周,基础培养液＋0.5 ng/ml TGF-β1组和基础培养液＋1.0 ng/ml TGF-β1组角膜基质细胞中α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢmRNA的相对表达量均明显高于基础培养液组,3个组间的总体差异均有统计学意义（F分组=696.745,P＜0.001;F分组=35.166,P＜0.001;F分组=33.677,P＜0.001）,且随着培养时间的延长,α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢmRNA的相对表达量逐渐升高,差异均有统计学意义（F时间=5.863,P＜0.05;F时间=298.614,P＜0.001;F时间=607.472,P＜0.001）;ColⅢmRNA合成速率均大于Col Ⅰ mRNA的合成速率;Western blot检测发现,培养后48 h和1周α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢ蛋白的表达量为微量,培养后2周基础培养液＋0.5 ng/ml TGF-β1组Pellet模型中α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢ蛋白的相对灰度表达量分别为0.395±0.208、1.060±0.175和0.629±0.382,基础培养液＋1.0 ng/ml TGF-β1组o-SMA、Col Ⅰ和ColⅢ蛋白的灰度表达量分别为0.758±0.228、1.201±0.187和0.753 ±0.468,组间总体比较差异均有统计学意义（α-SMA：F=10.691,P＜0.05;Col Ⅰ：F=14.094,P＜0.05;ColⅢ：F=10.995,P＜0.05）. 结论 培养液中添加TGF-β1和血清促进角膜ECM的纤维化,表现为Pellet三维培养模型中牛角膜基质细胞高表达纤维化特异性标志物.该培养体系可作为角膜基质ECM纤维化研究的体外三维培养模型.

骨髓基质细胞转化成骨细胞修复骨缺损:成纤维细胞生长因子和骨形成蛋白-2的作用

目的探讨成纤维细胞生长因子（ bFGF）和重组人骨形成蛋白－ 2（ rhBMP－ 2）单独和联合作用对骨髓基质细胞（ BMSC）的增殖和分化的影响。方法利用四唑盐比色法（ MTT），细胞总蛋白考马斯亮蓝测定法，碱性磷酸酶（ ALP）试剂盒分别测定不同浓度的 bFGF和 rhBMP单独和联合作用后 BMSC的增殖和分化情况。结果 bFGF单独作用促进 BMSC的增殖，但高浓度抑制 ALP表达， rhBMP对 BMSC的增殖和 ALP和总蛋白含量均有促进作用，而 bFGF和 rhBMP联合作用后 BMSC的增殖和 ALP活性较单独作用有更明显的升高。结论 bFGF和 rhBMP联合作用对于促进 BMSC的增殖和向成骨细胞分化有协同作用。

体外压力刺激对大鼠“足三里”穴筋膜组织成纤维细胞合成释放基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1、前列腺素E_2和胰岛素样生长因子1的影响

背景:腧穴筋膜结缔组织成纤维细胞是针推治疗操作过程中的主要受力组织细胞之一,细胞生物学行为的调整对腧穴发挥治疗作用的功能关系密切。目的:通过体外实验观察压力刺激对大鼠"足三里"穴筋膜组织成纤维细胞合成释放基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1、前列腺素E2和胰岛素样生长因子1的影响。方法:体外培养大鼠"足三里"穴筋膜组织成纤维细胞,随机分为空白对照组和压力刺激组。压力刺激组对细胞实施50kPa压力刺激,每次加力2h,每8h1次,共6次;空白对照组不加压。检测细胞外培养液中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1、前列腺素E2和胰岛素样生长因子1含量的变化,并计算基质金属蛋白酶1与基质金属蛋白酶抑制剂1比值的变化。结果与结论:"足三里"穴筋膜组织成纤维细胞压力作用后,培养液中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1和前列腺素E2含量均增加(P<0.05或0.01),基质金属蛋白酶1与基质金属蛋白酶抑制剂1比值增大(P<0.05),胰岛素样生长因子1变化无显著性意义。结果证实,压力刺激对腧穴筋膜组织成纤维细胞基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1和前列腺素E2合成释放的调节,以及对基质金属蛋白酶1与基质金属蛋白酶抑制剂1比值的提高,可能是腧穴接受针灸推拿治疗后发挥"疏经通脉"作用的细胞生物力学原理之一。

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子联合诱导骨髓基质细胞分化形成神经球

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)联合诱导骨髓基质细胞(MSCs)能否分化形成神经球。方法采用全骨髓法培养MSCs,bFGF和EGF联合诱导MSCs,倒置显微镜下观察分化细胞的形态,免疫荧光法和免疫印迹法鉴定分化细胞。结果 bFGF和EGF联合应用,可有效地诱导MSCs形成神经球。此神经球能传代并分化成神经元样细胞。免疫荧光和免疫印迹法均证实神经球表达nestin蛋白,神经球分化的细胞表达神经元、胶质细胞和少突胶质细胞标志性蛋白。结论 bFGF和EGF联合应用,可有效地诱导MSCs形成神经球。此神经球能自我更新并分化为神经元、胶质细胞和少突胶质细胞。

复合骨形态发生蛋白2及碱性成纤维细胞生长因子注射型骨修复材料对兔骨髓基质细胞增殖和超微结构的影响

目的观察以纤维蛋白胶(fibrinsealant,FS)为载体的注射型骨修复材料对体外培养的兔骨髓基质细胞(marrowstromalcell,MSC)增殖和超微结构的影响。方法实验分组为实验组(FS+bFGF+rhBMP-2)、对照组1(FS)、对照组2(FS+bFGF)、对照组3(FS+rhBMP-2)及单纯对照组。采用细胞培养、MTT及电镜等方法对各组兔MSC的增殖及超微结构进行研究。结果(1)各组材料对细胞促增殖作用由强到弱依次是:对照组2(FS+bFGF)、实验组(FS+bFGF+rhBMP-2)、对照组1(FS)、对照组3(FS+rhBMP-2)、单纯对照组,差异有显著性(P<0.05);(2)扫描电镜观察发现,材料表面粗糙,有微孔存在,各组细胞与材料融合生长。透射电镜观察发现:实验组的绝大部分细胞呈成骨细胞表型,细胞增殖状态旺盛,分化好。各对照组细胞或是细胞增殖活性高,但向成骨细胞表型分化差,或是向成骨细胞表型分化好,但细胞增殖活性较差。结论FS+bFGF+rhBMP-2即可显著促进MSC增殖和兔MSC向成骨细胞方向的分化水平。

重组pcDNA3.1-hBMP-2转染人骨髓基质干细胞和对其增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的 构建人骨形成蛋白 - 2 (h BMP- 2 )真核表达载体 pc DNA3.1- h BMP- 2 ,转染人骨髓基质干细胞(MSCs) ,探讨基因转染对其增殖和血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。 方法 利用重组 DNA和基因克隆技术构建重组载体 pc DNA3.1- h BMP- 2 ;细胞培养和基因转染技术体外转染人 MSCs;免疫细胞化学、原位杂交和蛋白印迹法检测细胞 BMP- 2的表达 ;通过流式细胞仪和 VEGF探针原位杂交分析其对细胞增殖和 VEGF表达的影响。 结果 转染后细胞在 m RNA水平和蛋白质水平均表达 BMP- 2 ;转染后 S期细胞比例增多 ,提示细胞 DNA的合成增加 ;BMP- 2基因转染上调细胞 VEGF的表达。 结论 在脂质体介导下 ,pc DNA3.1- h BMP- 2转染 MSCs获得成功。基因转染后能促进细胞增殖并将通过使 VEGF的表达增加促进血管再生 ,为进一步骨缺损的基因治疗及构建组织工程骨奠定了实验基础。

血小板源性生长因子和碱性成纤维细胞生长因子对兔角膜基质成纤维细胞体外增殖的影响

目的:探讨重组人血小板源性生长因子(rh-PDGF-BB)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhb-FGF)单独及联合应用对兔角膜基质成纤维细胞(RCF)增殖的影响。方法:采用细胞培养技术及噻唑蓝比色法(MTT)。结果:rhPDGF-BB和rhbFGF对RCF的促增殖作用较对照组有明显提高(P<0.01),rhPDGF-BB在10～100μg/L之间时对RCF有较强的促增殖作用(P<0.01),并呈剂量效应关系。rhb-FGF在0.1～10μg/L浓度范围内与RCF增殖呈剂量效应关系(P<0.01),当浓度增大到100μg/L,促增殖作用减弱。rhPDGF-BB和rhb-FGF联合应用时其促增殖作用较两种因子在相同浓度单独应用时有显著性差异(P<0.05)。结论:rhPDGF-BB,rhb-FGF单独或联合应用时有促进RCF体外增殖的作用。

碱性成纤维细胞生长因子复合脱细胞骨基质/壳聚糖支架修复骨缺损

背景:有研究显示,碱性成纤维细胞生长因子可促进间充质干细胞的增殖与成骨分化。目的:对比脱细胞骨基质/壳聚糖支架复合碱性成纤维细胞生长因子前后修复兔股骨缺损的能力。方法:采用融合共混与冷冻干燥法制备脱细胞骨基质/壳聚糖支架,采用浸渍法制备碱性成纤维细胞生长因子/脱细胞骨基质/壳聚糖支架。将小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1分别接种于两种支架表面,以单独培养的细胞为对照,进行细胞增殖、细胞黏附与成骨基因检测。在36只6月龄新西兰大白兔双侧股骨远端制备直径5 mm的骨缺损模型,抽签法随机分3组,空白组不进行任何干预,单纯复合支架组、生长因子+复合支架组分别植入脱细胞骨基质/壳聚糖支架与碱性成纤维细胞生长因子/脱细胞骨基质/壳聚糖支架,进行骨缺损部位X射线片与组织学检查。结果与结论:①在培养的1-11 d内,碱性成纤维细胞生长因子/脱细胞骨基质/壳聚糖支架组的细胞增殖快于脱细胞骨基质/壳聚糖支架组(P<0.05),脱细胞骨基质/壳聚糖支架组快于对照组(P<0.05);②细胞与支架共培养4 d后,碱性成纤维细胞生长因子/脱细胞骨基质/壳聚糖支架组培养4,7 d的成骨基因Ⅰ型胶原、骨钙素、骨桥蛋白及Runx2 mRNA表达均高于脱细胞骨基质/壳聚糖支架组(P<0.05),培养7 d后的碱性磷酸酶mRNA表达高于脱细胞骨基质/壳聚糖支架组(P<0.05);③共培养7 d后的扫描电镜显示,两组支架均支持MC3T3-E1细胞的黏附;④动物实验X射线片显示,空白组术后12周时无明显的骨修复;单纯复合支架组术后8周时可见新骨生成,术后12周时可见明显新骨生成;细胞因子+复合支架组术后4周时即可见新骨生成,至术后12周时骨缺损部位几乎完全修复;⑤动物实验术后12周的缺损部位苏木精染色与Masson染色显示,空白组可见大量的纤维组织;两支架组可见大量的新骨生成,其中生长因子+复合支架组的新骨生成面积与成熟度高于单纯复合支架组;⑥结果表明,负载碱性成纤维细胞生长因子的脱细胞骨基质/壳聚糖复合支架是较为理想的骨组织修复材料,可促进骨形成。

转化生长因子β_1对瘢痕成纤维细胞合成细胞外基质的调节作用

目的 :研究转化生长因子 β1(TGF β1)对瘢痕成纤维细胞胶原蛋白和粘连蛋白 (FN)合成的影响 ,探讨TGF β1与瘢痕细胞外基质 (ECM)的关系。方法 :采用细胞培养、VG化学染色、免疫组化、图像分析扫描和氯胺T法观察不同浓度TGF β1对瘢痕成纤维细胞胶原蛋白及FN合成的影响。结果 :TGF β1在浓度为 1 0～ 5 0ng/ml下能刺激胶原蛋白和FN的合成 ,并呈剂量效应关系 ;当TGF β1浓度为 1 0 0ng/ml时 ,作用达饱和。结论 :TGF β1可能与瘢痕形成过程中ECM的过度沉积有关。

碱性成纤维细胞生长因子预诱导对骨髓基质干细胞向多巴胺能神经元分化的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导对骨髓基质干细胞(MSCs)向多巴胺(DA)能神经元分化的影响。方法取雄性Wistar大鼠股骨和胫骨骨髓,进行MSCs的体外培养、传代扩增及纯化。bFGF预诱导24h后,依据加入的神经营养因子不同分为单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)组、胶质源性神经营养因子(GDNF)组和GDNF+GM1组,以及对照组。倒置显微镜下观察细胞形态变化,分别在预诱导第3d、7d进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)、酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学检测。计数NSE和TH阳性细胞数,并计算阳性细胞百分比。结果对照组见少量NSE阳性细胞。实验组于诱导第3d、7d见较多数量的NSE、TH阳性细胞,GFAP阴性。bFGF预诱导各组中GDNF+GM1组NSE、TH阳性细胞率最高,GDNF组次之,GM1组最低,组间比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论bF-GF预诱导不仅可明显促进GDNF、GM1诱导MSCs向神经元样细胞分化,表达神经元细胞标志物——NSE;还可促进MSCs向DA能神经元分化,表达DA能神经元标志物——TH。

重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原复合材料修复兔半月板无血运区软骨损伤

背景:单独应用重组碱性成纤维细胞生长因子对无血运区半月板损伤的愈合无明显影响,考虑主要与其在体内易被吸收和降解等有关。近年来Ⅰ型胶原作为生物性载体的应用逐渐增多。目的:观察重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原复合材料修复兔半月板软骨损伤的效果。方法:选用健康新西兰大白兔36只,首先在兔半月板上造成统一的无血运区损伤模型。随机分为空白对照组、重组碱性成纤维细胞生长因子组和重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原组。术后2,6,12周分批处死实验动物,进行大体形态观察和组织学检查。结果与结论:重组碱性成纤维细胞生长因子组对无血运区损伤愈合无明显影响,但对半月板边缘滑膜中成纤维细胞有明显的促增殖作用;重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原组表现为纤维软骨样组织愈合,但其愈合组织与正常半月板组织仍有差异。结果表明应用重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原复合型材料治疗半月板无血运区的损伤是一种有效的治疗方法。

不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对兔骨髓基质细胞的影响

目的:观察骨髓基质细胞的培养及不同浓度碱性成纤维生长因子(bFGF)对其生长的影响。方法:采用全麻下抽取兔股骨骨髓,经体外培养的方法并在培养液中加入4种不同浓度的bFGF(0,60,120,240ng/ml)培养后经倒置显微镜观察;并用试剂盒测定细胞碱性磷酸酶的含量。结果:60、120ng/ml的bFGF能明显促进骨髓基质细胞的生长(P<0.01),其余两组无明显差异。而4组之间的细胞碱性磷酸酶含量在3天时无明显差异,6天时加入bFGF组的细胞碱性磷酸酶含量明显下降。结论:bFGF对骨髓基质细胞的影响是复杂和多方面的;不同剂量浓度对骨髓基质细胞生长的影响亦不一样,并不呈正相关,合适的有效浓度为60～120ng/ml。