血清发育内皮细胞基因-1、组织激肽释放酶结合蛋白对脓毒症患者病情严重程度及预后评估研究

目的探讨血清发育内皮细胞基因-1(Del-1)、组织激肽释放酶结合蛋白(KS)对脓毒症患者病情严重程度及预后的评估价值。方法选取2017年5月至2019年5月东台市人民医院重症医学科收治的120例脓毒症患者为研究对象,根据病情严重程度分为脓毒症组(n=77)和脓毒症休克组(n=43)。另选健康体检者60例为健康组。比较各组血清Del-1、KS差异。采用Pearson相关法分析血清Del-1、KS与序贯器官衰竭评分(SOFA)、急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)的相关性;应用logistic回归分析脓毒症患者28 d死亡的危险因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析Del-1、KS对脓毒症患者28 d死亡的预测价值。结果脓毒症休克组及脓毒症组患者的血清Del-1水平均高于健康组,且脓毒症休克组高于脓毒症组患者;脓毒症休克组及脓毒症组患者血清KS水平均低于健康组,且脓毒症休克组低于脓毒症组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组患者的血清Del-1水平高于存活组,KS水平低于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症患者血清Del-1与SOFA评分、APACHEⅡ评分呈正相关,血清KS与SOFA评分、APACHEⅡ评分呈负相关。ROC曲线显示,血清Del-1及KS联合检测预测脓毒症患者死亡的曲线下面积、敏感度和特异度分别为0.912、0.909和0.771。结论脓毒症患者的血清Del-1、KS是评估脓毒症病情严重程度及不良预后的重要指标,两项联合检测有助于监测、评估脓毒症患者的病情变化及预后,对及时治疗脓毒症患者有指导意义。

组织型激肽释放酶对大鼠急性脑缺血后GLUT-1表达的影响

激肽释放酶-激肽系统（kallikre in-kinin system，KKS）在人体分布广泛，发挥重要生理的作用，尤其在血管再生方面发挥重要作用［1］。本研究通过观察组织型激肽释放酶（TK）对脑缺血后 GLUT-1蛋白表达的影响，

血清Kal、TREM-1对高血压性脑出血患者病情严重程度及预后的影响

目的探讨血清人源性激肽释放酶结合蛋白(Kal)、髓系细胞触发受体-1(TREM-1)对高血压性脑出血(HICH)患者病情严重程度及预后的影响。方法选取该院2020年1月至2023年3月该院收治的180例HICH患者作为HICH组,另选取同期在该院体检的180例健康体检者作为对照组。根据HICH患者的病情严重程度分为轻度组、中度组、重度组,根据患者的预后情况分为预后良好组和预后不良组。收集HICH患者基本资料并检测所有研究对象的Kal、TREM-1水平。采用多因素Logistic回归分析HICH患者预后不良的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Kal、TREM-1对HICH患者预后不良的预测价值。结果HICH组血清Kal水平低于对照组,TREM-1水平高于对照组(P<0.05)。轻度组有56例患者,中度组有82例患者,重度组有42例患者。重度组血清Kal水平低于轻度组和中度组,且中度组低于轻度组(P<0.05)。重度组血清TREM-1水平高于轻度组和中度组,且中度组高于轻度组(P<0.05)。预后良好组有122例患者,预后不良组有58例患者。预后不良组有高血压史患者的比例、TREM-1水平、出血量均高于预后良好组,Kal水平低于预后良好组(P<0.05);预后良好组和预后不良组年龄、男性比例、体质量指数、糖尿病史情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,有高血压史、TREM-1水平升高、出血量大、Kal水平降低是HICH患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,2项指标联合检测预测HICH患者预后不良的曲线下面积为0.920,高于Kal、TREM-1单独预测的0.857和0.860(Z=2.765、2.324,P=0.006、0.020)。结论HICH患者血清Kal水平降低,TREM-1水平升高,与患者病情严重程度及预后密切相关,2项指标联合检测对HICH患者预后不良具有较高预测价值。

自拟益气养阴清热利湿方药对IgA肾病大鼠肾脏局部激肽释放酶-激肽系统的影响

目的:探讨益气养阴清热利湿方药对IgA肾病大鼠的治疗作用及对肾脏局部激肽释放酶-激肽系统系统的影响。方法:将SD大鼠随机分为4组,对照组、模型组、西药组、中药组,各组按相应药物剂量灌胃;造模前和第7、9、13、17周末检测24h尿蛋白定量,第17周末行肾组织IgA免疫荧光检测,并应用RT-PCR法检测肾组织KLK1和BK的表达水平。结果:与模型组比较,中药组、西药组IgA免疫荧光强度显著下降,KLK1和BK的表达水平显著增高(P<0.05)。结论:益气养阴清热利湿方药可能是通过激活肾脏局部KKS,达到延缓肾脏病理进展,发挥对IgA肾病的治疗作用。

组织激肽释放酶对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注后炎症损伤的干预作用

目的组织激肽释放酶对于糖尿病并发脑卒中是否具有神经保护作用尚未研究证实。观察组织激肽释放酶对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注的神经保护作用。方法选用健康雄性SD大鼠,经链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射诱导为糖尿病大鼠。采用栓线法制备局灶性脑缺血再灌注模型,随机数字表法分为3组:假手术组,等渗盐水组和组织激肽释放酶组。24 h后观察各组大鼠神经功能缺损评分,测定脑梗死面积百分比和脑水肿程度。通过免疫组化方法检测小胶质细胞离子钙接头蛋白(ionized calcium bindingadaptor molecule-1,Iba1)及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)染色阳性细胞数,采用实时荧光定量PCR技术检测缺血半暗带区细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)及血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)的表达。结果组织激肽释放酶组较等渗盐水组神经功能缺损评分显著减轻(P<0.01),梗死面积百分比明显缩小[(23.57±5.79)%vs(47.97±1.19)%,P<0.01],脑水肿程度显著降低[(81.73±2.10)vs(84.94±2.34)%,P<0.05],Iba1阳性细胞数明显减少[(12.33±4.46)个/HP vs(31.83±8.13)个/HP,P<0.01],MPO阳性细胞数明显减少[(13.83±4.49)个/HP vs(37.50±7.64)个/HP,P<0.01],ICAM-1及VCAM-1的表达水平均显著降低(P<0.05)。结论组织激肽释放酶通过抑制局灶性脑缺血再灌注损伤引发的炎症反应,对糖尿病大鼠脑缺血再灌注发挥神经保护作用。

人组织型激肽释放酶基因对大鼠糖尿病肾病的影响及其机制

目的:探讨人组织型激肽释放酶基因(human tissue kallikrein,HK)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的影响及其机制。方法:48只雄性Wistar大鼠随机分为普通饲料组(即正常组)和高脂高糖饲料组。高脂高糖饲料组以小剂量链脲佐菌素加高脂高糖饮食诱导2型糖尿病(diabete mellitus,DM)模型,造模后随机分为两组,分别经尾静脉导入重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated viruses,rAAV)介导的HK基因(HK组)以及报告基因beta-半乳糖苷酶(beta-galac-tosidase,LacZ)(LacZ组),观察12周后处死实验动物,留取心、肝、肾等组织。Western blot检测HK在各组织的表达。PAS染色观察肾小球硬化情况,天狼猩红染色观察肾脏纤维化情况。24h尿微量白蛋白(microalbuminuria,mAlb)与尿渗透压检测评定肾功能,免疫组织化学以及Western blot检测肾脏转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达。结果:rAAV介导的HK可在2型DM大鼠的肝脏、肾脏、心脏表达,而且相较于LacZ组且表达增强;PAS染色显示:LacZ组肾脏出现中度的肾小球系膜细胞及基质增生,血管周围间质细胞浸润,血管壁增厚,以及肾小囊滴状病变和毛细血管纤维帽。另外肾小管大量的空泡变性,肾小管腔内出现较多蛋白质管型,HK组较LacZ组明显好转;天狼星红染色显示:LacZ组肾脏间质、血管壁胶原沉积,肾小球细动脉管壁增厚,而HK组病变较轻(P<0.05);24hmAlb排泄量LacZ组比正常组明显增加(P<0.05),HK组较LacZ组排泄量显著下降(P<0.05)。LacZ组与正常组比较,尿渗透压明显下降(P<0.05),HK组较LacZ组显著上升(P<0.05);TGF-β1主要表达于LacZ组的肾小管上皮细胞,HK组较LacZ组TGF-β1明显下调(P<0.05)。结论:HK基因明显改善DN,保护肾功能,原因可能与下调肾脏TGF-β1的表达有关。

组织激肽释放酶改善大鼠心肌重塑的实验研究

目的探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶(h TK1)基因过表达对大鼠心肌梗死后心肌结构、心肌胶原纤维以及新生血管的影响。方法结扎雄性Sprague-Dawley大鼠的左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死模型。将含h TK1基因的重组腺病毒(Ad-h TK1)和对照病毒(1×1010PFU)注射到心肌梗死部位及其周边区域。4周后处死大鼠,取出心脏、称量、切片;通过荧光显微镜观察心肌组织的绿色荧光表达;Western blot测定h TK1蛋白表达;HE染色观察心肌组织结构,天然猩红染色观察胶原含量、分布,免疫组化法检测新生血管密度。结果仅在Ad-h TK1组大鼠的心肌既有绿色荧光,又有h TK1蛋白表达。假手术组大鼠的心脏质量、左室质量、心肌胶原分布显著低于心梗模型组,新生血管密度明显高于模型组。但与对照病毒组相比,Ad-h TK1组大鼠的心脏质量、左室质量、左室质量指数和心肌胶原纤维含量明显降低(P<0.05),心肌结构和新生血管密度明显改善(P<0.05)。结论重组腺病毒介导的组织激肽释放酶基因过表达可改善心肌结构,增加梗死周围心肌的新生血管形成,改善梗死后心肌重构。

不同治疗方法对冠心病患者心率变异性血清KLK1 TIMP-1水平及近期预后的影响研究

目的:探究国产雷帕霉素药物洗脱支架和紫杉醇药物洗脱球囊对冠心病患者心率变异性、血清激肽释放酶1(KLK1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)水平及近期预后的影响。方法:回顾2019年11月至2021年5月间在我院接受经皮冠状动脉介入治疗的105例冠心病患者资料,根据治疗方式不同将其分为观察组(56例,使用国产雷帕霉素药物洗脱支架)和对照组(49例,使用国产紫杉醇药物洗脱球囊)。比较两组术前、术后1周、随访1年时的心率变异性相关指标[5min内正常窦性RR间期标准差(SDNN)、5min内正常RR间期均值标准差(SDANN)、相邻NN间期之间差大于50ms数占比(pNN50)],术前、术后1周时的KLK1、TIMP-1、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)水平,随访1年的近期预后[血管再狭窄、血管再血栓、主要心血管不良事件(MACE)]。结果:两组SDNN、SDANN、pNN50重复测量方差分析时间比较差异有统计学意义(P<0.017),均随术后时间延长呈上升趋势;两组患者手术前后血清KLK1、TIMP-1、NO及血浆ET-1水平差值绝对值比较差异有统计学意义(P<0.05),观察组变化幅度大于对照组;随访1年时,观察组血管再狭窄发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组血管再血栓发生率、MACE发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:国产雷帕霉素药物洗脱支架可有效调节冠心病患者心率变异性,对改善血清KLK1、TIMP-1水平有积极作用,有助于保护、修复患者内皮功能,降低支架内狭窄风险,获得良好近期预后。

人组织激肽释放酶在Pichia pastoris酵母中的表达

通过将人组织激肽释放酶(hKLK1)原编码序列克隆入Pichiapastoris酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组表达质粒pPIC9K-KLK1。分别用SalⅠ及BglⅡ酶切线性化后电转化酵母菌株GS115,经MD平板及含不同抗性浓度G418的YPD平板上培养筛选,获得抗3mg/mlG418Mut+型分泌表达hKLK1的重组酵母菌4株,抗1mg/mlG418Muts型分泌表达hKLK1的酵母菌3株。酶活性测定数据表明:高拷贝转化子重组蛋白表达量高于低拷贝转化子;Mut+型转化子重组蛋白表达量高于Muts型转化子;且当甲醇诱导体积分数为2%时,重组蛋白的表达量最高。进一步的Western-blotting分析证明,表达的重组hKLK1分子质量正确,能被特异的抗体识别。

组织激肽释放酶在糖尿病视网膜病变患者血清中的变化及其调节血管新生机制

目的检测组织激肽释放酶(tissue kallikrein,TKLK)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和可溶性细胞间黏附分子-1(soluble intracellular adhension molecul-1,s ICAM-1)在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患者血清中的变化,观察TKLK在低氧条件下对人视网膜微血管内皮细胞(human retinal microvascular endothelial cells,HRMECs)中VEGF和ICAM-1表达的影响。方法收集2型糖尿病患者60例,按照DR分期标准将患者分为糖尿病无DR组(DM组)、非增生性DR组(NPDR组)和增生性DR组(PDR组),收集同期在本院体检的志愿者作为对照组,每组20例。ELISA法检测血清中TKLK、VEGF和s ICAM-1的水平。体外HRMECs分别进行常氧和低氧培养,不同浓度重组TKLK处理后,检测细胞增殖、凋亡以及VEGF和ICAM-1的表达。结果 DM、NPDR和PDR组患者血清中TKLK、VEGF和s ICAM-1水平明显高于对照组,4组总体差异有统计学意义(F=28.805,P=0.002;F=32.041,P=0.002;F=26.169,P=0.001);PDR患者血清中TKLK、VEGF和s ICAM-1水平显著高于DM和NPDR组(均为P<0.001)。TKLK与VEGF(r=0.623,P<0.01)和s ICAM-1水平(r=0.598,P<0.01)均呈正相关。10μg·m L^(-1)rh TKLK可显著抑制低氧诱导的HRMECs增殖以及VEGF和ICAM-1的表达,并可促进细胞凋亡(P<0.05)。结论 TKLK通过与VEGF和ICAM-1相互作用而影响DR的进展。

糖尿病视网膜病变患者血清VEGF、ES、TKLK、TSP、sICAM-1水平的变化及意义

目的:探讨血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)、内皮抑素(ES)、血小板反应蛋白(TSP)、组织激肽释放酶(TKLK)及可溶性细胞间黏附分子-1(s ICAM-1)水平在糖尿病视网膜病变(DR)患者血清中的变化及其临床意义。方法:选取我院2014-01/2016-12收集的无眼底病变的糖尿病患者60例(DM组)、非增殖性糖尿病视网膜病变患者60例(NPDR组)、增殖性糖尿病视网膜病变患者60例(PDR组)和同期健康体检对象60例(对照组),检测四组患者血清VEGF、ES、TSP、TKLK、s ICAM-1水平并进行比较分析。结果:PDR组患者的血清VEGF、TKLK、s ICAM-1水平均显著高于NPDR组、DM组、对照组(P<0.05);PDR组患者的血清ES水平均显著低于NPDR组、DM组、对照组(P<0.05)。NPDR组患者的血清VEGF、TKLK、ES水平均显著高于DM组和对照组(P<0.05)。NPDR组患者的血清VEGF与ES、TKLK、s ICAM-1水平均呈显著的正相关关系(P<0.05)。PDR组患者的血清VEGF与TKLK、s ICAM-1水平均呈显著的正相关关系(P<0.05),PDR组患者的血清VEGF与ES、TSP相关性不显著(P>0.05)。结论:DR患者血清ES、TSP、TKLK、s ICAM-1水平均发生显著改变,通过调节VEGF水平影响DR进程。

lncRNA HOTTIP通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的恶性生物学行为

目的:探讨lncRNA HOTTIP对肺癌细胞增殖、凋亡及EMT的影响及其作用机制。方法:利用qPCR检测lncRNA HOTTIP、miR-637和KLK4在肺癌SPC-A-1、正常肺上皮BEAS-2B细胞中的表达量;siRNA干扰SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP的表达后,分别通过CCK-8、Transwell、流式细胞术和WB法检测SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT能力的变化。miRanda软件和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA HOTTIP和miR-637之间的靶向关系,RNA pull-down实验检测lncRNA HOTTIP和miR-637的吸附作用,检测lncRNA HOTTIP通过miR-637对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。利用TargetScan软件分析miR-637与KLK4的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测miR-637与KLK4 mRNA之间的相互作用;检测miR-637通过KLK4 mRNA对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。下调lncRNA HOTTIP和miR-637表达后,利用qPCR和WB检测KLK4 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:与BEAS-2B细胞比,在SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP呈高表达(P<0.01),miR-637呈低表达(P<0.01),KLK4呈高表达(P<0.01)。下调lncRNA HOTTIP后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著减弱,细胞凋亡率显著上升(P<0.01);lncRNA HOTTIP与miR-637具有靶向关系;下调miR-637表达后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著上升,细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。miR-637与KLK43’UTR特异性结合。miR-637通过KLK4显著促进了SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT,细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。下调lncRNA HOTTIP使KLK4表达显著降低,而下调miR-637可促进KLK4表达(P<0.05)。结论:上调lncRNA HOTTIP可通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的增殖、侵袭与EMT而抑制癌细胞凋亡。

2型糖尿病肾病患者血清α1-MG、KNG1、KLK1与细胞因子及肾功能的相关性分析

目的观察2型糖尿病肾病患者血清α1-微球蛋白(α1-MG)、激肽原1(KNG1)、激肽释放酶(KLK1)水平,并分析其与细胞因子和肾功能的相关性。方法选取2015年8月-2017年5月在我院接受治疗或体检的60例糖尿病肾病患者(DN组)、60例单纯性2型糖尿病患者(T2DM组)、60例健康成年人(对照组)作为研究对象。检测研究对象的血清α1-MG、KNG1、KLK1、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、空腹血糖(FPG)、白介素-6(IL-6)、超敏反应C蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并计算研究对象估算肾小球滤过率(eeGFR)。结果①DN组血清α1-MG、KNG1、KLK1、BUN、Cr、FPG、IL-6、hs-CRP、TNF-α水平显著高于T2DM组、对照组(P<0.05),eGFR显著低于T2DM组、对照组(P<0.05)。T2DM组血清α1-MG、KNG1、KLK1、BUN、Cr、FPG、IL-6、hs-CRP、TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05),eGFR显著低于对照组(P<0.05)。②糖尿病肾病患者血清α1-MG、KNG1、KLK1水平与血清BUN、Cr、FPG、IL-6、hs-CRP和TNF-α水平均呈显著正相关(P<0.05),而与eGFR均呈显著负相关(P<0.05)。结论糖尿病肾病患者的α1-MG、KNG1、KLK1水平较高,其与肾功能、血糖和细胞因子等水平密切相关。

重组人激肽释放酶-1质量标准研究

目的:建立重组人激肽释放酶-1(rhK1)的质控方法和质量标准。方法:以S2266底物显色法测定rhK1的酶活性,还原型SDS-PAGE测定相对分子质量,非还原型SDS-PAGE测定相关蛋白,SDS-PAGE和反相高效液相色谱法测定纯度和成品含量,平板水平等电聚焦电泳测定等电点,用胰蛋白酶酶切后分析肽图,其余检测项目按2005年版中国药典三部规定进行。结果:用建立的方法对原液和成品进行了检定,各项指标均符合人用重组DNA制品质量控制技术指导原则和2005年版中国药典三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于rhK1产品的常规检定。

含人组织激肽释放酶1和基质金属蛋白酶组织抑制物1基因共表达载体对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

背景和目的前期研究表明人组织激肽释放酶1（hTK1）基因过表达具有部分抑制血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和改善血管再狭窄的作用,但联合基质金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP1）对VSMC增殖是否具有协同效应,目前尚不明了。本研究构建含双基因hTK1和hTIMP1的重组腺病毒载体,并观察其在大鼠VSMC中的表达,以及对VSMC生长增殖影响。方法采用限制性内切酶BglⅡ和SalⅠ,酶切含启动子CMV和hTIMP1基因片段的重组穿梭质粒,经PCR、连接、热激、转化等亚克隆至pDC316-hTK1质粒中,构建含双基因hTK1和hTIMP1的重组穿梭质粒。将骨架质粒和穿梭质粒于293A细胞包装重组腺病毒载体。感染大鼠VSMC后,采用RealtimePCR法、Western blot法检测目的基因转录、蛋白表达。细胞计数法和四甲基偶氮唑盐法（MTT）测定细胞增殖。结果经PCR、酶切和测序法证实,含双基因（hTK1和hTIMP1）的重组病毒穿梭质构建正确。在293A细胞中成功包装出重组腺病毒载体Ad-hTK1-hTIMP1。感染VSMC后,双基因（hTK1和hTIMP1）的转录水平表达呈现随感染复数（50~150 MOI）和时间（1~3d）依赖性地增加,目的蛋白（hTK1和hTIMP1）亦呈现浓度依赖性地高表达。与单基因载体（Ad-hTK1或Ad-hTIMP1）相比较,双基因载体可明显抑制血小板源性生长因子（PDGF）诱导的大鼠VSMC增殖（P〈0.01）,其峰值抑制率为45.7%。结论首次成功构建并包装重组腺病毒双基因载体Ad-hTK1-hTIMP1。感染细胞后,其目的基因和蛋白均呈现独立高表达,并具有协同抑制VSMC增殖的效应,为血管增殖性疾病的多基因干预治疗实验提供一个新工具。

TK1和TIMP1基因共表达载体的构建及其在大鼠血管平滑肌细胞中的表达

目的构建含人组织激肽释放酶1(hTK1)和基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP1)基因的重组腺病毒载体,并观察其在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中的表达。方法选择相对应酶切位点,酶切含人TIMP1基因片段的原始质粒和腺病毒穿梭质粒pDC316,经连接、热激、转化等亚克隆而构建成重组穿梭质粒。之后,应用限制性内切酶BglⅡ/SalⅠ,酶切含启动子和hTIMP1基因片段,再通过回收片段以及连接、热激等步骤亚克隆至pDC316-hTK1载体中,构建含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组病毒穿梭质粒。利用AdMax腺病毒Cre/loxP重组酶系统,将该质粒和骨架病毒质粒于293A细胞中同源重组包装产生双基因的重组腺病毒载体。采用Western blot测定在VSMCs中的表达。结果经PCR、双酶切和测序证实,重组病毒穿梭质粒pDC316-hTIMP1-EGFP和pDC316-hTK1-hTIMP1构建正确。在293A细胞里成功包装产生含双基因的重组腺病毒载体Ad5-hTK1-hTIMP1感染VSMCs后,hTK1和hTIMP1蛋白呈独立高表达,表达水平呈浓度依赖性增加。结论首次成功构建并包装了含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组腺病毒载体,目的蛋白在VSMCs中呈现独立高表达。

贝那普利和厄贝沙坦对糖尿病肾病肾组织表达KLK1的影响

目的探讨贝那普利和厄贝沙坦阻断肾素-血管紧张肽系统(RAS)对糖尿病肾病(DN)肾组织表达激肽释放酶1(KLK1)的影响。方法将10只雄性SD大鼠以普通饲料喂养,作为正常对照组(A组)。将雄性SD大鼠以高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素诱导DN模型,造模成功后随机分为4组,每组10只:DN组(B组)、贝那普利干预组(C组)、厄贝沙坦干预组(D组)、贝那普利联用厄贝沙坦干预组(E组)。干预8周后测定肾质量/体质量、24 h尿蛋白与血肌酐、尿素氮等评估肾功能情况,免疫组化半定量测定肾组织KLK1蛋白表达水平。结果 B、C、D、E组大鼠肾组织表达KLK1蛋白水平显著高于A组(P<0.01);C、D、E组大鼠肾组织表达KLK1蛋白水平显著高于B组(P<0.05);E组表达KLK1高于C组和D组(P<0.01);C组和D组差异无统计学意义。结论 DN大鼠肾组织表达KLK1蛋白高于正常大鼠,贝那普利和厄贝沙坦通过阻断RAS上调肾脏KLK1蛋白表达。

激肽释放酶神经保护作用的机制探索

脑血管病发病率高,严重危害人类健康。探索缺血性脑损害的机制与阻断相应分子与细胞损害的环节是目前全世界神经科学工作者研究的焦点和热点。激肽释放酶-激肽系统(kallikrein-kinin system,KKS)是体内重要的炎性调节系统。综合探索KKS系统在脑缺血不同时期的作用,对缺血再灌注脑组织中激肽释放酶的动态变化进行系统的研究,从细胞内信号转导水平来探索B1和B2受体作用的深层机制,并进一步研究组织型激肽释放酶作用通路上新的相关蛋白分子及发现新的信号通路,这一系列的工作将对脑缺血的试验性治疗提供崭新的思路。

生长激素以外的促生长疗法研究进展

重组人生长激素是身材矮小症儿童的经典治疗药物。近年来随着儿童生长机制的进一步探明,生长激素以外的促生长疗法的研究取得较大进展。重组人胰岛素样生长因子1是治疗原发性胰岛素样生长因子1缺乏的主要药物。C型钠尿肽为因软骨发育不全导致身材矮小症儿童提供了治疗选择。生长激素释放肽类似物能刺激生长激素释放,用于促生长治疗。此外,促性腺激素释放激素激动剂、芳香化酶抑制剂等可延缓患儿骨龄进展,对改善终身高有一定益处。现就这些除生长激素以外的促生长疗法研究进展进行综述,以期为临床身材矮小症患儿的治疗提供更多选择。

PLOD1、NFE2L3、KLKB1蛋白在结直肠癌组织中的表达水平及与其临床病理特征的相关性

目的 探讨前胶原赖氨酸2-氧代戊二酸5-双加氧酶1(PLOD1)、核因子E2相关因子3(NFE2L3)、血浆激肽释放酶B1(KLKB1)蛋白在结直肠癌组织中的表达水平及与其临床病理特征的相关性。方法 回顾性选取2020年1月至2023年12月安康市中心医院收治的120例结直肠癌患者作为研究对象。分别取患者的结直肠癌组织及癌旁组织进行免疫组织化学检测,检测PLOD1、NFE2L3、KLKB1蛋白表达水平。并对比不同TNF分期、组织分化程度、淋巴结转移患者PLOD1、NFE2L3、KLKB1蛋白表达水平,并采用Spearman相关性分析法分析PLOD1、NFE2L3、KLKB1蛋白表达水平与临床病理特征的相关性。结果 结直肠癌组织PLOD1、NFE2L3蛋白阳性率分别为70.00%、60.00%,均高于癌旁组织(22.50%、17.50%),结直肠癌组织KLKB1蛋白阳性率为43.33%,低于癌旁组织(71.67%),差异均有统计学意义(P<0.05)。TNF分期Ⅳ期患者PLOD1与NFE2L3蛋白阳性率分别为100.00%与95.24%,均明显高于Ⅲ期(83.33%与73.33%)、Ⅱ期(59.09%与45.45%)、Ⅰ期(48.00%与32.00%),Ⅳ期患者KLKB1蛋白阳性率为14.29%,明显低于Ⅲ期(36.67%)、Ⅱ期(34.09%)、Ⅰ期(92.00%),差异均有统计学意义(P<0.05)。低分化患者PLOD1与NFE2L3蛋白阳性率分别为100.00%与90.00%,明显高于中分化(81.13%与50.94%)、高分化(44.68%与23.40%),低分化患者KLKB1蛋白阳性率为20.00%,明显低于中分化(30.19%)、高分化(68.09%),差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析显示:PLOD1、NFE2L3与TNF分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度具有相关性,KLKB1与TNF分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度具有相关性(P<0.05)。结论 结直肠癌患者肿瘤组织中PLOD1、NFE2L3蛋白呈现低表达状态,KLKB1蛋白呈现高表达状态,且PLOD1、NFE2L3、KLKB1蛋白表达水平与结直肠癌的TNF分期、组织分化程度及淋巴结转移情况密切相关。