热休克蛋白60及重组热休克蛋白60对U937细胞IL-6分泌量的影响

目的观察重组热休克蛋白60(hsp60)对U937细胞分泌细胞因子IL-6的影响。方法对幽门螺杆菌标准株26695的基因进行定点突变,利用重叠延伸PCR法使1398和1399位点的AG突变为GC,获得重组hsp60基因片段并构建原核表达质粒pEASY-E1-rhsp60,经IPTG诱导在大肠杆菌表达突变型rhsp60,将50、100、200μg/mL的rhsp60(rhsp60组)、hsp60(hsp60组)分别与U937细胞共培养,于12、18、24 h收集上清液,ELISA法检测上清中细胞因子IL-6水平,设PBS对照组。结果 rhsp60组、hsp60组IL-6分泌水平均明显高于对照组(P均<0.05),且同时点同浓度下rhsp60组IL-6分泌水平明显高于hsp60组(P均<0.05),IL-6的分泌随着蛋白刺激浓度的升高而增高。结论 rhsp60与hsp60皆可促进U937细胞分泌IL-6,胃癌来源的rhsp60使IL-6分泌量更多。

热休克蛋白60在激活的少突胶质前体细胞的表达

目的研究热休克蛋白60(HSP60)在重组人干扰素-γ(IFN-γ)和重组人热休克蛋白60(rhHSP60)激活的少突胶质前体细胞中的表达情况。方法分离SD大鼠的少突胶质细胞前体细胞(OPC),经IFN-γ和rhHSP60激活后,应用western blot方法检测细胞中的HSP60蛋白的表达;采用ELISA方法检测细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-6的释放量。结果经IFN-γ和rhHSP60分别激活后,OPC胞体内的HSP60蛋白表达均显著升高,胞外TNF-α及IL-6的释放量也明显增加。结论在激活状态下,OPC中的HSP60蛋白表达显著增高,刺激细胞产生大量炎症因子,从而参与细胞的应激反应。

热休克蛋白27,60和90在胃癌中表达及其临床价值

目的:探讨HSP-27、-60和-90在胃癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学检测66例胃癌组织中HSP-27、-60和-90的表达情况,并结合临床病理特征、肿瘤增殖能力和患者生存期分析三种热休克蛋白表达的临床意义。结果:HSP-27、-60和-90在胃癌组织中异常高表达。HSP-27表达与肿瘤大小(p T,P=0.026)、器官转移(p M,P=0.046)及病理分期(P=0.041)相关,而HSP-27染色强度与淋巴腺状态明显相关(p N,P=0.042)。HSP-60表达与患者性别相关(P=0.011),而HSP-60染色强度与患者年龄(P=0.027)和肿瘤病理组织学分级(P=0.031)相关。HSP-90表达与本研究分析的临床病理参数无相关性;但是,HSP-90染色强度与肿瘤大小存在着显著关系(p T,P=0.020)。单因素分析表明HSP-90高表达与生存期更长显著相关(P=0.033),多因素分析证实HSP-90高表达是胃癌独立预后因素(P=0.026)。结论:HSP-27、-60和-90与某些临床病理参数有关,这些参数对于胃腺癌患者的治疗至关重要。胃腺癌患者HSP-90高表达是独立预后指标。

噪声作业工人血浆热休克蛋白60、70抗体滴度分析

目的 探讨噪声作业工人血浆热休克蛋白 (HSPs) 6 0、 70抗体滴度及其与累积噪声暴露量 (CNE)的关系。方法 用Westernblot免疫印迹法对 391名工人 (噪声暴露 2 0 7名 ,对照 184名 )的血浆HSP 6 0、 70抗体水平进行测定 ,用趋势 χ2 检验和多因素Logistic回归模型分析HSP 6 0、 70抗体水平与噪声暴露的关系。结果 除HSP 6 0抗体滴度 1∶80外 ,其他滴度观察组HSP 6 0、 70抗体阳性率与对照组间差别均有显著性意义 ;HSP 70抗体滴度为 1∶10阳性率随累积噪声暴露量 (CNE)增大而升高 ;用Logistic回归分析控制了混杂因素的作用后 ,血浆HSP 6 0、HSP 70抗体检出率与CNE呈正相关关系。结论 血浆HSP 6 0、

表达幽门螺杆菌热休克蛋白60克隆的构建

目的:构建含Hp热休克蛋白60(Hsp60)基因的重组载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,为进一步研究Hsp60的佐剂功能和免疫原性奠定基础.方法:提取Hp染色体基因,用PCR方法扩增Hsp60基因,将其克隆至表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达并通过免疫印迹实验研究其免疫原性.结果:分离得到了1.6kb的Hsp60基因片段,并在大肠杆菌中实现了该基因的高效表达,在37℃诱导表达3h后,表达产物占细菌总蛋白的27.2%.表达以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,其中主要是包涵体的形式,目的蛋白占不溶性蛋白的76.6%.经免疫印迹证实该重组蛋白可以被Hp感染患者血清所识别.结论:成功地克隆并表达HpHsp60基因,为Hp疫苗的研制打下了基础.

血清抗幽门螺杆菌热休克蛋白60抗体与消化性溃疡的关系

目的 :探讨幽门螺杆菌 (Hp)感染患者血清抗幽门螺杆菌热休克蛋白60(Hsp60)抗体与消化性溃疡的关系。方法 :检测胃溃疡、十二指肠球部溃疡、慢性浅表性胃炎患者Hp感染及血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体表达情况。结果 :(1)血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体阳性表达仅见于Hp阳性患者。Hp阳性胃溃疡、十二指肠球部溃疡患者血清抗幽门螺杆菌Hsp抗体阳性率明显高于慢性浅表性胃炎患者 (均P<0.05)。(2)26例血清抗幽门螺杆菌Hsp抗体阳性的消化性溃疡患者在Hp根除及洛赛克疗程结束后4周 ,其中7例抗体转为阴性。结论 :血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体可能与Hp感染所致消化性溃疡的发生有关 ;血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体不能作为近期判断Hp根除与否的标准。

重组人热休克蛋白70-抗原肽复合物对肿瘤的免疫治疗作用研究

目的:使用以毕赤酵母X-33为宿主菌,重组表达制备的rhHSP70与合成的HER2/neu抗原肽体外结合形成复合物,探讨其在肿瘤免疫治疗中的有效性。方法:在ADP存在的条件下,将rhHSP70与纯化的HER2/neu抗原肽体外非共价结合形成复合物,并分次免疫BALB/c小鼠,通过ELISPOT和颗粒酶释放法,检测该复合物诱导特异性CTL的能力。通过检测小鼠体内肿瘤的生长情况和肿瘤的组织切片,来观测该复合物对小鼠乳腺癌的免疫治疗作用。结果:rhHSP70-HER2/neu抗原肽复合物免疫小鼠后,可以增加T细胞分泌IFN-γ的能力,诱导出肿瘤特异性CTL,并对小鼠的乳腺癌有明显的治疗作用。结论:在毕赤酵母中重组表达的rhHSP70可以在体外与一定的抗原肽非共价结合形成复合物,该复合物具有较强的诱导特异性CTL的能力,可对实验鼠的乳腺癌起到明显的治疗作用。

幽门螺杆菌热休克蛋白60基因的克隆、表达及免疫原性研究

目的构建表达幽门螺杆菌热休克蛋白60(Hsp60)的候选菌株并研究其免疫原性。方法利用PCR技术扩增Hsp60基因,将其定向插入pET-22b(+)载体,在BL21(DE3)大肠杆菌中表达并通过动物实验研究其免疫原性。结果克隆的Hsp60基因序列与Genbank公布的一致,Hsp60重组蛋白表达量占菌体总蛋白的27.2%,并可被幽门螺杆菌感染者血清所识别,用其免疫小鼠可产生抗该重组蛋白的抗体。结论Hsp60有可能成为一种有效的疫苗用于幽门螺杆菌感染的预防和治疗。

热休克蛋白10和热休克蛋白的60表达、纯化及与线粒体DNA转录因子A相互结合

目的:表达、纯化热休克蛋白10(Hsp10)和热休克蛋白60(Hsp60),研究人类线粒体DNA转录因子A(TFAM)在体外与Hsp10,Hsp60间的相互交联作用。方法:使用Escherichia.Coli(E.coli)诱导表达含有6个组氨酸标记的Hsp10和Hsp60,镍离子鳌合树脂分离纯化后,体外分别与纯化TFAM共育,抗-TFAM抗体免疫沉淀,SDS-PAGE分离蛋白,CBB探测分析。结果:Hsp10可在体外与TFAM发生免疫共沉淀,Hsp60不能。结论:Hsp10可能为TFAM-复合体组分。

幽门螺杆菌热休克蛋白60脂质体疫苗的制备及其免疫预防作用

目的探讨制备脂质体包裹重组幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白60(Hsp60)口服疫苗的方法,并用Hp感染的小鼠模型评价其在预防Hp感染中的作用。方法将PET-22(+)/Hsp60在BL21(DE3)大肠杆菌表达,Ni-NTA琼脂糖树脂纯化Hsp60重组蛋白,用薄膜分散法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的Hsp60重组蛋白口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径。75只BALB/C小鼠分为5组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、Hsp60重组蛋白+霍乱霉素(CT)、脂质体包裹Hsp60重组蛋白、脂质体包裹Hsp60重组蛋白+CT,每周1次共4次,末次攻击2周再用活Hp攻击3次,3周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、Hp的定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分。结果可溶性表达产物占全菌总蛋白的27%,经纯化获得纯度为95%的重组蛋白,制备的脂质体粒径为(0.7±0.4)μm。PBS组和空白脂质体组保护率均为0,而Hsp60重组蛋白+CT组、脂质体包裹Hsp60重组蛋白组、脂质体包裹Hsp60重组蛋白+CT组的保护率分别为73.3%、66.7%和86.7%,且均能使免疫小鼠胃粘膜Hp感染数目明显减少,炎症反应减轻。结论口服脂质体能分地代替免疫佐剂,作为Hp疫苗的免疫佐剂,将具有广泛的应用前景。

热休克蛋白60基因多态性与噪声性听力损失易感性的关系

目的探讨热休克蛋白60(HSP60)基因多态性与噪声性听力损失的关系。方法采用横断面流行病学研究方法,对194名噪声暴露作业工人进行调查和听力测试,按听力学评价的结果将其分为听力损失组和听力正常组;用等位基因特异扩增法(ASA)和多聚酶链反应-限制性片断长度多态性法(PCR-RFLP)检测其HSP60基因上rs11551350和rs2340690两个单核苷酸位点的多态性。结果rs11551350位点在93名噪声性听力损失的工人中GG、AA和AG基因型的频率分别为1.1%、9.7%和89.2%,等位基因G和A的频率为45.7%和54.3%;在101名听力正常的工人中,基因型频率分别为5.9%(GG)、5.9%(AA)和88.1%(AG),等位基因频率为50.0%(G)和50.0%(A)。rs2340690位点在噪声性听力损失组CC、TT和CT基因型的频率分别为51.6%、7.5%和40.9%,等位基因C和T的频率为72.0%和28.0%;在听力正常组的基因型频率分别为45.5%(CC)、4.0%(TT)和50.5%(CT);等位基因频率为70.8%(C)和29.2%(T)。两位点的基因型分布及其等位基因频率在噪声性听力损失组与听力正常组之间差异均无显著性(P>0.05)。采用多元Logistic回归对两组间年龄、性别、吸烟状况、爆震史和累积噪声暴露量等因素进行校正后,未发现两位点中任一基因型的噪声性听力损失的危险度有显著性升高(P>0.05)。结论HSP60基因的rs11551350和rs2340690两个单核苷酸位点的多态性可能不是噪声性听力损失的遗传易感性因素。

热休克蛋白60对小鼠树突状细胞成熟及免疫功能的影响

目的探讨动脉粥样硬化中重要炎性物质———热休克蛋白60(HSP60)体外对小鼠树突状细胞(mDC)功能的影响。方法从近交系C57BL/6J小鼠骨髓中提取mDC,体外培养成熟后分别与3、10μg/ml mHSP60或PBS孵育24 h,观察其形态改变;流式细胞仪检测mDC表面标志;混合淋巴细胞反应(MLR)测定mDC刺激功能;ELISA法测定MLR上清液中细胞因子浓度。结果mHSP60处理组较对照组,mDC突起增加明显;CD80及CD86表型显著增加;淋巴细胞刺激功能明显增强;上清液细胞因子IL-12、IFN-γ增加(P<0.01)而IL-4增加不明显(P>0.05),IFN-γ/IL-4比值升高。以上变化mHSP60高剂量处理组较低剂量处理组更明显。结论mHSP60体外可以促进mDC功能,且作用呈剂量依赖性。

唐鱼热休克蛋白60基因cDNA克隆及表达

采用RT-PCR和RACE技术,成功克隆了唐鱼(Tanichthys albonubes)热休克蛋白60基因cDNA全长序列,命名为TaHSP60(GenBank登录号:HM234132)。研究表明:该基因序列全长为2 486bp,5'端非翻译区(URT)102bp,3'URT 656bp,开放阅读框(ORF)1 728bp,编码575个氨基酸。序列比对分析表明唐鱼HSP60与斑马鱼(Danio rerio)的相似性高达96.2%,与鲫(Carassius auratus)、褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)、大西洋鲑(Salmo salar)以及非洲爪蟾(Xenopus tropicalis)的相似性分别为93.2%、89.7%、88.3%和83.8%。Clustal X比对结果表明:该序列含有典型的mt-HSP60特征序列、ATP结合位点,以及C末端保守的重复区域GGM。进化分析结果表明,唐鱼HSP60与斑马鱼HSP60聚为一支,二者亲缘关系较近。荧光定量PCR显示唐鱼HSP60的mRNA在肝脏、肌肉、鳃、鳍条、眼睛、卵巢、肠道和脑等8种组织中均有表达,其中肝脏中表达量最高,而在鳃和鳍条呈微量表达。统计分析表明,其他各组织与肝脏相比均有显著差异。铜暴露后,唐鱼肝脏HSP70mRNA表达水平分别在48h和96h出现上调,均显著高于对照组。

热休克蛋白60口服耐受诱导特异性调节T细胞对动脉粥样硬化斑块的影响

目的探讨热休克蛋白60口服耐受诱导特异性调节T细胞对载脂蛋白E-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法8周龄载脂蛋白E-/-小鼠分别口服重组鼠热休克蛋白60-PBS溶液和单纯PBS溶液(对照组),连续5天后高脂饲养12周。比较两组斑块面积;分析脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞百分比和功能;酶联免疫吸附法检测上清液细胞因子浓度。结果与对照组比较,口服热休克蛋白60组斑块面积显著减小,脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞百分比显著升高,CD4+CD25+调节性T细胞增殖反应下降,上清液中转化生长因子β和白细胞介素10浓度显著升高,而γ干扰素浓度显著下降。结论热休克蛋白60口服耐受能诱导CD4+CD25+调节性T细胞介导抗原特异性免疫耐受;口服热休克蛋白60可能会抑制小鼠动脉粥样硬化斑块的形成。

从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位

目的 建立一种有效的从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位HspA的方法。方法 重组基因工程大肠杆菌发酵后 ,表达的Hp的HspA包涵体经洗涤、变性、复性 ,采用QSepharoseHighPerformance阴离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析分离纯化。使用SDS PAGE和HPLC检测纯度 ,选用ELISA和动物实验对纯化蛋白的免疫学活性和生物学活性进行鉴定。结果 Hp的HspA包涵体经洗涤和溶解后 ,Hp的HspA的纯度 >60 %。包涵体溶解液经阴离子交换层析和凝胶过滤层析后纯度超过 95 %。Hp的HspA纯品经检测具有良好的免疫学活性和生物学活性。结论 本研究建立的分离纯化方法可从包涵体中获得高纯度的重组HspA蛋白 。

基质金属蛋白酶9及热休克蛋白60检测对早期胃癌的诊断价值

目的探讨血浆基质金属蛋白酶9(MMP-9)与热休克蛋白60(HSP-60)联合检测对早期胃癌患者的诊断价值。方法选取我院收治的临床疑诊早期胃癌136例患者,根据患者确诊诊断分为:对照组(70例,排除胃癌诊断)和研究组(66例,确诊胃癌诊断)。检测并比较两组患者MMP-9、HSP-60、CA19-9、CA72-4以及CEA水平差异。采用Logistic回归分析影响早期胃癌发生的临床因素。运用ROC曲线评估MMP-9与HSP-60对诊断早期胃癌患者的最佳值。结果研究组血浆MMP-9、HSP-60、CA19-9、CA72-4与CEA水平均高于对照组(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血浆MMP-9与HSP-60是早期胃癌发生的危险因素(P<0.05)。血浆MMP-9与HSP-60诊断早期胃癌的ROC曲线下面积分别为0.781和0.667(P=0.024,0.011)。当MMP-9≥364.5μg/L和HSP60≥2.84μg/L为cut-off值,对判断早期胃癌发生的灵敏度为53.0%,特异性为81.4%,准确度为67.6%,ROC曲线下面积为0.862。结论血浆MMP-9与HSP-60联合检测对早期胃癌发生具有较好的诊断价值。

结直肠癌患者血清及粪便中热休克蛋白60检测的意义

目的探讨粪便总热休克蛋白60检测的临床初筛诊断价值和意义。方法采用hHSP60蛋白ELISA试剂盒对40例结直肠癌患者、20例肠镜检查结果阴性健康人群的粪便和血清作人热休克蛋白(hHSP60)测定。所有患者术前未接受过任何放疗或化疗,术后均经常规组织病理证实。结果hHSP60浓度在结直肠癌患者血清中明显增高;hHSP60浓度在结直肠癌患者粪便中增高,并高于血清中人hHSP60浓度。结论检测粪便中hHSP60有望作为一种新的结直肠癌诊断或筛检方法。

热休克蛋白60表达和一氧化氮在鼻咽癌中的意义

目的 探讨鼻咽癌患者癌组织中热休克蛋白 60 (heatshockprotein 60 ,HSP60 )及血浆中一氧化氮 (nitricox ide ,NO)在鼻咽癌发生、发展和转移中的作用。方法 应用免疫组织化学方法检测鼻咽癌癌组织中HSP60的表达 ,采用硝酸还原酶法检测鼻咽癌患者血浆中NO的水平。结果 ① 18例慢性鼻咽炎和 40例鼻咽癌患者鼻咽粘膜组织中HSP60表达的阳性率分别为 3 3 3 %、 85 0 % ,过表达率分别为 11 1%、 67 5% ,两者间的差异有显著性意义 (P <0 0 5)。② 2 6例角化性鳞状细胞癌 ,8例未分化癌和 6例非角化性癌的鼻咽癌组织中HSP60表达的阳性率分别为80 8%、 87 5%、 83 3 % ,过表达率分别为 69 2 %、 62 5%、 66 7% ,三者间的差异无显著性意义 (P >0 0 5)。③鼻咽癌患者血浆中NO水平 [(117 871± 3 1 92 0 ) μmol/L]高于慢性鼻咽炎患者 [(57 162± 2 2 0 3 7) μmol/L]及正常对照组[(40 93 8± 13 474) μmol/L] ,差异均有显著性意义 (均为P <0 0 5)。 结论 鼻咽癌患者癌组织中HSP60表达和血浆中NO水平均增高 ,可能与鼻咽癌的发生。

沙眼衣原体热休克蛋白60抗体的测定

为了了解泌尿生殖道沙眼衣原体感染者对沙眼衣原体热休克蛋白６０（ＨＳＰ６０）的血清学反应，应用细胞培养、免疫印迹试验和微量免疫荧光试验（ＭＩＦ）对１７５例非淋菌性尿道炎（宫颈炎）（ＮＧＵ）、７３例盆腔炎（ＰＩＤ）、５２例不育症及３６例健康对照者进行检查。３组患者的沙眼衣原体感染率有显著差异（Ｐ＜０．０１）。１７．８％的ＰＩＤ、１３．５％的不育症和１．７％的ＮＧＵ患者出现ＨＳＰ６０抗体，而健康对照组则未检出此抗体（Ｐ＜０．０１）。ＭＩＦ高滴度者（≥１∶１６０）出现ＨＳＰ６０抗体的机率（３１．３％）明显高于低滴度者（＜１∶１６０）（２．８％）（Ｐ＜０．０１）。提示在有并发症的患者中ＨＳＰ６０抗体常见。检测ＨＳＰ６０抗体对预测沙眼衣原体感染慢性发展及并发症的发生有一定意义。