重组人瘦素的分离纯化

目的 :探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法 :采用强阴离子交换柱 (SepharoseQfastflow)和疏水层析柱 (PhenylSepharose 6fastflow)在 pH 7.5的条件下进行纯化。结果 :经Q柱一步纯化后 ,产物纯度由 4 2 .3%到达89 .6 % ,随后通过疏水层析纯化后 ,产物纯度达到 96 .2 %。经SDS -PAGE证实为单一蛋白条带。结论 :通过上述手段已成功分离纯化得到纯度较高的由毕赤酵母表达的重组人瘦素。

比卡鲁胺联合重组人瘦素拮抗剂对前列腺癌DU-145细胞增殖及凋亡的影响

目的为比卡鲁胺联合重组人瘦素拮抗剂治疗对前列腺癌提供理论依据。方法重组人瘦素诱导体外培养DU-145细胞后,分别采用1、2、5、10μmol/L浓度的比卡鲁胺,5、10、20、50 ng/mL浓度的重组人瘦素拮抗剂及二者联合应用(浓度分别为5μmol/L、20 ng/mL)干预24 h。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果各浓度比卡鲁胺、重组人瘦素拮抗剂及二者联合应用均能显著抑制DU-145细胞增殖,诱导其凋亡;二者联合应用的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均明显高于相同浓度的比卡鲁胺和重组人瘦素拮抗剂单用;P均<0.05。结论比卡鲁胺和重组人瘦素拮抗剂均可抑制DU-145细胞增殖,诱导其凋亡;二者联合应用有协同作用。

重组人leptin的复性、纯化和免疫学及生物学活性鉴定

对重组人leptin(rh-leptin)蛋白进行复性及纯化,并鉴定其免疫学及生物学活性。将由大肠杆菌(E.coli)重组表达获得的rh-leptin,复性、纯化后进行SDS-PAGE电泳和Western印迹杂交鉴定其特异性,并通过Km小鼠减肥实验及胃肠推进率测定实验检验其生物学活性。结果表明通过对rh-leptin进行复性和纯化,获得了高纯度的具有免疫学和生物学活性的rh-leptin蛋白,可供进一步研究应用。