重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)对化学致糖尿病模型动物的降血糖作用

目的 本文研究了重组人胰高血糖素类多肽 1(7 36 )[rhGLP 1(7 36 ) ]对化学所致糖尿病模型动物的降血糖和促胰岛素分泌作用。方法 对四氧嘧啶型糖尿病小鼠及链脲霉素型糖尿病大鼠皮下注射不同剂量的rhGLP 1,分别于给药 4天后采血 ,收取血清 ,测定血糖及胰岛素值。结果 四氧嘧啶型糖尿病小鼠皮下注射 4 0、80 μg·kg-1rhGLP 1后 ,血糖值显著下降 (P <0 0 1) ,而 2 0 μg·kg-1剂量组则无显著性改变 ;链脲霉素型糖尿病大鼠皮下注射 2 8、5 6 μg·kg-1rhGLP 1后 ,血糖值显著下降 (P <0 0 5、P <0 0 1) ,而 14 μg·kg-1剂量组则无显著性改变。结论 rhGLP 1对实验动物部分

健康志愿者单次皮下注射重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)[rhGLP-1(7-36)]耐受性研究

目的：在中国健康成年志愿者中评价单次皮下注射重组人胰高血糖素类多肽-1（7-36）[rhGLP-1（7-36）]的安全性、耐受性。方法：根据GCP设计试验方案，并获得伦理委员会批准。受试者须自愿签署知情同意书。选择42名18～50岁健康成人，将受试者随机分至0．10～0．45mg7个剂量组，每组6名，男女各半，分别接受单次皮下注射rhGLP-1（7-36），进行临床和实验室检查，考察药物耐受性。结果：单次皮下注射rhGLP-1（7-36）耐受性试验中，各组受试者各项指标测定值均在正常范围内，条件均衡，具较好可比性。因剂量至0．30mg时，不良事件（恶心、呕吐）在该组发生率超过50％，故于该剂量组试验完成后终止了下一剂量组试验，仅有4个剂量组共24名健康受试者完成了本试验。24例受试者完成的4个剂量组耐受性试验中，给药后实验室检查未见有临床意义的改变。试验中出现10例（共15例次）可能与药物有关的不良反应，如头晕、恶心、呕吐等，但均可耐受，且为一过性反应，于给药后1h内自行消失。其中，不良反应主要发生在0.25、0．30mg组（共7例12例次），而低剂量组（0．10、0．20mg）仅有3例发生轻度不良反应。15例次不良反应中，头晕、恶心有10例次，呕吐有5例次；整个试验过程未见严重不良事件。结论：24名中国健康成年受试者分别单次皮下注射rhGLP-1（7-36），最大剂量至0．20mg，比较安全、耐受性较好，为最大耐受剂量。而单次给药剂量至0．25mg或0．30mg则不良反应发生率较高，最大耐受剂量为0．20mg。建议单次用药剂量不宜超过0．20mg。在Ⅱ期临床试验中需严密观察恶心、呕吐这些与药物可能有关的不良反应及其发生机制。

ELISA试剂盒方法测定重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)浓度

目的:定量检测血浆样本中重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)[rhGLP-1(7-36)]的含量。方法:用LINCO公司生产的试剂盒对rhGLP-1(7-36)的标准品和血浆样本进行定量检测。结果:测定的特异性、灵敏度、测量范围、重现性和回收率满足生物制品药代动力学研究的要求。结论:用LINCO公司生产的试剂盒定量血浆样品中的rhGLP-1(7-36),该检测方法符合生物制品检测方法,可以作为其药代动力学研究血药浓度的检测方法。

重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)免疫原性的实验研究

目的:观察重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)[rhGLP-1(7-36)]对小猎兔犬的免疫原性。方法:健康小猎兔犬随机分为rhGLP-1(7-36)高、中、低剂量组(200、100、50μg/kg)和生理盐水对照组,每组6只,雌雄各半。皮下注射给药,每天1次,每周6次,连续9个月。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和碱性磷酸酶免疫斑点试验检测犬血清中的抗体。结果:连续给药3、9个月及恢复期血清均未发现抗rhGLP-1(7-36)抗体。结论:长期给予rhGLP-1(7-36)对小猎兔犬无免疫原性。

RP-HPLC法测定重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)原料及其制剂的肽含量和有关物质

目的:建立重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)[rhGIP-1(7-36)]原料及制剂的肽含量和有关物质的RP-HPLC测定方法。方法:采用ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.2 mol·L-1硫酸钠缓冲液(用乙醇胺调节pH至2.3)-乙腈(82:18)为流动相A,50%乙腈为流动相B,调整流动相的比例[A-B(55:45)]使主峰的保留时间在20-25 min,流速为1.0 mL·min-1,检测波长214 nm,柱温为45℃。结果:线性范围为0.6-18.6μg,制剂平均回收率为96.01%,原料和制剂精密度试验RSD分别为0.15%和0.25%,最低检测限6.25 ng。结论:本方法可用于rhGLP-1(7-36)原料及其制剂的肽含量和有关物质的测定,具有准确、简便、快速、灵敏的特点。

重组人胰高血糖素样多肽-1(7-36)在健康人体的药代动力学

目的研究重组人胰高血糖素类多肽-1（7-36）[rhGLP-1（7-36）]（促胰岛素生成药）在健康志愿者的药代动力学.方法选择12,9名健康志愿者,分别单次（0.1,0.15,0.2 mg）和多次（0.2 mg）皮下注射rhGLP-1（7-36）,连续5日,用荧光酶联免疫分析法测定其血药浓度,用DAS软件计算其药代动力学参数.结果单次：药-时曲线符合一房室模型,Cmax、AUC0-t随剂量增加而增加,tmax约为19～21 min,ti/2为10～14min.多次：首次与末次给药后的Cmax分别为（726.76±94.07）,（737.15±72.12）ng·L-1;tmax为18min左右;t1/2为15～17 min.结论在0.1～0.2 mg内,过程呈一级线性动力学特征,体内无蓄积,耐受性较好.

气相色谱法测定重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)注射液中丙二醇含量

目的建立气相色谱（GC）法测定重组人胰高血糖素类多肽-1（rh GLP-1）（7-36）注射液中丙二醇的含量。方法采用石英毛细管柱（30 m×320μm,0.5μm）,载气为N2,流速：1ml/min,进样口温度为230℃,检测温度为250℃,进样量为1μl;结果丙二醇的浓度在0.5~1.5 mg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系（r=0.9991）,平均回收率（n=9）为100.2%;不同色谱条件下,耐用性良好,RSD均〈2.0%。结论该方法快速、简便、重复性好,适用于rh GLP-1（7-36）注射液中丙二醇含量的测定。

重组人胰高糖素样多肽-1(7-36)对胰岛β细胞分泌功能影响的实验研究

目的观察重组人胰高糖素样多肽-1(7-36)(促胰岛素生成药)对大鼠血糖和胰岛β细胞功能的影响。方法12周龄OLETF大鼠随机分为给药组和模型组(n=10),并以同种系非糖尿病LETO大鼠作为对照组;干预2,8周后,处死;于12,14及20周龄时,行口服葡萄糖耐量试验,测定血糖及血清胰岛素。结果经该药治疗,能降低2型糖尿病OLETF大鼠的进食量和体质量,增加血清胰岛素水平,部分改善葡萄糖耐量。结论重组人胰高糖素样多肽-1(7-36)能够改善OLETF大鼠分泌胰岛素的功能,降低血糖。

胰高血糖素样肽1(GLP-1)对心血管疾病治疗的研究进展

胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是肠道L细胞分泌的一种由30个氨基酸组成的多肽,具有促进胰岛素分泌,抑制胰高血糖素分泌和刺激胰岛β细胞增殖等生物学作用。GLP-1在体内主要以GLP-1(7-36a)的形式存在。GLP-1(7-36a)的半衰期很短(1～2 min),可被二肽基肽酶4(diaminopeptidyl peptidase-4,DPP4)迅速降解为GLP-1(9-36a),因此GLP-1(9-36a)是GLP-1在循环中的主要存在形式。GLP-1不仅具有调控血糖和能量代谢的作用,还有保护心肌细胞、改善心脏功能和舒张血管等作用,直接或间接发挥心血管保护效应。心血管疾病是2型糖尿病的常见并发症和首要死因。目前基于GLP-1的2型糖尿病药物研发主要有两个方向:可以抵抗DPP4降解的GLP-1受体(GLP-1R)激动剂和DPP4抑制剂。虽然,这两种方法均可延长内源性GLP-1的作用,但显然未兼顾GLP-1(9-36a)对心脏的保护效应。本文通过总结GLP-1(7-36a)及GLP-1(9-36a)在心血管效应方面的异同及其生理学研究进展,探讨GLP-1应用于心血管疾病治疗的新策略。

注射用重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)与二甲双胍合用治疗2型糖尿病的临床研究

目的探讨注射用重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)〔rhGLP-1(7-36)〕与二甲双胍合用治疗2型糖尿病(T2DM)的临床效果。方法采取随机、双盲、安慰剂对照的试验设计,36例T2DM患者在应用二甲双胍治疗的基础上随机分入用药组与安慰剂组,分别给予皮下注射rhGLP-1(7-36)(0.2 mg)及安慰剂(甘露醇,2.5 mg)治疗12周;观察基线及12周后用药组与安慰剂组的糖化血红蛋白(HbA1C)、空腹血糖(FPG)及胰岛素水平(FINS)、餐后2 h静脉血糖(2 h PG)及胰岛素水平(2 h INS)、血脂、血压、体质量指数(BMI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛素分泌指数(HOMA-IS)等指标的变化,同时记录低血糖事件及不良反应的发生情况。结果在应用二甲双胍治疗的基础上,用药组的T2DM患者在给予rhGLP-1(7-36)治疗12周后,HbA1C、FPG、2 h PG值以及体质量、BMI均比基线时有所降低,其差异具有统计学意义(P<0.05),低血糖发生率为2.8%。结论 rhGLP-1(7-36)联合二甲双胍治疗T2DM有效并且低血糖发生率低,可成为治疗新的选择。

重组人胰高血糖素类多肽1(7-36)在2型糖尿病患者中的药动学研究

目的:研究重组胰高血糖素类多肽1(7-36)[rhGLP-1(7-36)]在2型糖尿病患者单次和多次给药的药动学特征。方法:将轻型2型糖尿病患者16例,随机分为0.1、0.2mg剂量组,每组8例,试验前1天给予同体积生理盐水,第1～5天每日3餐前5min腹部皮下注射rhGLP-1(7-36)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别测定给药前1天及给药第1、5天各时间点(给药前0min及给药后5、10、20、30、40、50、60、70、90、120min)rhGLP-1(7-36)的血药浓度以及第2～4天谷峰浓度。应用DAS2.1.1软件计算药动学参数,SPSS13.0软件进行统计分析。结果:两组首次给药药动学参数分别为:tmax(22.5±11.65)、(17.50±7.07)min,t1/2z(15.78±6.82)、(12.12±5.52)min,cmax(142.69±96.64)、(407.29±287.48)ng/L,AUC0-120min(3783.64±2177.03)、(9034.88±4262.92)ng.min/L,MRT0-120min(30.69±6.32)、(26.44±6.02)min;2组末次给药药动学参数分别为:tmax(26.25±7.44)、(16.25±5.18)min,t1/2z(20.72±13.44)、(12.97±6.46)min,cmax(118.05±38.39)、(361.11±217.81)ng/L,AUC0-120min(3321.91±993.47)、(9514.97±5077.89)ng.min/L,MRT0-120min(30.34±4.81)、(24.29±4.52)min;多次给药的蓄积指数分别为(0.96±0.32)、(0.88±0.43)。两组间首次给药的药动学参数AUC0-120min、AUC0-∞、cmax比较差异有统计学意义,在0.1～0.2mg剂量范围内呈剂量依赖性;两组间末次给药各药动学参数比较,差异均无统计学意义;两组内首末次给药的药动学参数比较差异均无统计学意义。结论:2型糖尿病患者腹部皮下单剂量注射rhGLP-1(7-36)后,在0.1～0.2mg剂量范围内符合线性药动学过程;多次给药不会引起药动学参数的改变,体内无蓄积。

rhGLP-1(7-36)联合他克莫司对人肝细胞Akt的作用研究

目的观察重组人胰高血糖素样肽-1(7-36)[rh GLP-1(7-36)]联合他克莫司作用于人肝细胞系HL7702细胞系后对Akt表达的影响。方法选用处于对数生长期的人肝细胞系HL7702,分为4组:对照组、G组、F组及GF组。对照组用等量的培养基处理90 min;G组用含100 nmol/L的rhGLP-1(7-36)培养基处理90 min;F组用含5 mg/L的他克莫司处理90 min;GF组用含100 nmol/L的rh GLP-1(7-36)及5 mg/L的他克莫司处理90 min。Western blotting检测各组Akt蛋白表达水平。结果各组p-AktThr308相对表达水平差异有统计学意义(P<0.05);G组、F组及GF组p-AktThr308相对表达水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),G组、F组及GF组均升高;各组p-AktSer473相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05);G组、F组及GF组p-AktSer473相对表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论rGLP-1(7-36)联合他克莫司能使Akt蛋白活化,提示GLP-1可能不依赖Akt蛋白改善他克莫司引起的肝脏脂质代谢紊乱。

rhGLP-1(7-36)对人肝HL-7702细胞系Akt、P70S6K蛋白的影响

目的观察重组人胰高血糖素样肽-1(7-36)[recombinant human glucagon like peptide-1(7-36),rhGLP-1(7-36)]对人肝HL-7702细胞系蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、核糖体蛋白S6激酶(ribosomal protein S6 kinase,P70S6K)表达的影响,探讨其作用机制。方法选用处于对数生长期的人肝HL-7702细胞系,实验组用含100 nM浓度rhGLP-1(7-36)的培养基分别处理0 min、10 min、60 min、90 min;对照组用不含100 nM浓度rhGLP-1(7-36)的培养基分别处理相同的时间。用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)分别检测各组Akt蛋白、P70S6K蛋白的表达水平。结果与对照组相比,实验组10 min、60 min、90 min时Akt蛋白、P70S6K蛋白的表达水平无明显变化;10 min、60 min、90 min时p-AktThr308蛋白、p-AktSer473蛋白及磷酸化P70S6K蛋白表达水平均升高,其中,10 min、60 min时差异无统计学意义(P>0.05),90 min时差异有统计学意义(t=-5.596,P=0.011;t=-5.405,P=0.012;t=-5.597,P=0.011)。结论 rhGLP-1(7-36)促进肝脏细胞中Akt蛋白和P70S6K蛋白的磷酸化与时间有关,该结果为研究GLP-1对肝细胞的直接作用提供依据。

注射用重组人胰高血糖素类多肽-1在中国2型糖尿病患者中的药效动力学研究

目的在中国2型糖尿病患者中进行注射用重组人胰高血糖素类多肽-1（GLP-1）单独应用以及与盐酸二甲双胍片联合应用的多次给药的药效动力学试验研究。方法24名中国2型糖尿病受试者，随机分至3组，每组8人，进行GLP-1单独应用、GLP-1与盐酸二甲双胍片联合应用的多次给药，测定受试者用药后不同时间的静脉血糖浓度及胰岛素水平，对血糖及胰岛素水平进行分析。结果受试者用药后的2h内血糖水平较基线有显著下降。对血糖下降幅度进行组间比较，可见0．2mg合并二甲双胍组〉0．2mg组〉0．1mg组。在用药后10～30min观察到胰岛素水平较基线日升高，有效降低了餐后血糖水平。结论该药在给药后短时间内升高胰岛素水平、降低餐后血糖。

CGRP对GLP-1和胰岛素分泌的影响

目的 :进一步探讨类胰高血糖素肽 1(GLP 1)的分泌机制和生理意义。方法 :应用三种不同浓度的降钙素基因相关肽 (CGRP)进行实验 ,通过放射免疫分析方法检测CGRP对GLP 1和胰岛素分泌的影响。结果 :无论外源性葡萄糖是否存在 ,低浓度组和中浓度组CGRP于各实验时间对GLP 1、胰岛素分泌均无影响 ,P >0 .0 5;而高浓度组CGRP均刺激GLP 1、胰岛素的分泌 ,并随CGRP处理时间的延长 ,GLP 1(7～ 3 6)酰胺、胰岛素血浆水平呈逐渐增加趋势 ,并以 90min水平最高 ,与对照组相比差异存在显著性 ,P <0 .0 1。结论 :CGRP对胰岛素刺激可能是全部或部分通过GLP 1途径发挥作用 ;低、中浓度的CGRP不能影响GLP 1和胰岛素分泌 ,高浓度的CGRP能刺激GLP