注射用重组人胸腺肽α1人体耐受性临床研究

目的观察健康人体对注射用重组人胸腺肽α1皮下注射的耐受性与安全性,采用剂量递增方案,确定单次及连续给药的安全剂量范围。方法单次给药48例健康受试者入组试验,其中36例分别皮下注射0.3 mg/m^2、0.6 mg/m^2、0.9 mg/m^2、1.4 mg/m^2、2.0 mg/m^2、2.7 mg/m^2注射用重组人胸腺肽α1,12例注射相应剂量的注射用水作为安慰剂;连续给药12例健康受试者分别皮下注射2.0 mg/m^2、2.7 mg/m^2注射用重组人胸腺肽α1,每周给药2次,连续4周。用药后对受试者进行临床观察和实验室检查,评价试验药物在人体的安全性。结果单次给药48例健康受试者入组并完成试验,所有受试者均未出现不良事件。连续给药12例健康受试者入组并完成试验,其中,有5名受试者出现不良事件,其中3例出现大便潜血阳性,1例出现血红蛋白尿,1例受试者出现大便潜血阳性和血红蛋白尿。停药后于随访期复查恢复正常,均无特殊处理,自行好转。结论单次应用注射用重组人胸腺肽α1 0.3~2.7 mg/m^2是安全的,耐受性良好;连续使用4周,每周2次,剂量在2.7 mg/m^2内是基本安全的。

重组人胸腺肽α1在大鼠体内的药物动力学研究

研究了重组人胸腺肽α1(rh-Tα1)在大鼠体内的药物动力学,采用125I标记的rh-Tα1同位素法,观察单次皮下注射后的体内过程。125I-rh-Tα1单次皮下注射后在大鼠体内的动力学过程符合一室模型,消除半衰期(t1/2ke)为5.42～7.07h,绝对生物利用度为91.28%。125I-rh-Tα1在大鼠体内组织器官中分布广泛并能较快地消除,其在肾、胃、肺和卵巢等组织器官中有较高的积聚,而脑中则较小。125I-rh-Tα1主要经肾由尿排泄,给药后120h内,药物的82.4%由尿排出,7.6%由粪排出。

重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化与鉴定

采用大肠杆菌作为宿主表达重组人胸腺肽α1(rhTα1)融合蛋白,纯化获得rhTα1并对其鉴定.于300L发酵罐进行中试发酵表达rhTα1融合蛋白;经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导,离心发酵液收集菌体,菌体经破碎、离心、亲和层析捕获,获得融合蛋白;每升发酵液可获得约170 mg硫氧环蛋白-胸腺肽α1融合蛋白.融合蛋白经肠激酶酶切后,再经亲和层析、反相层析、体积排阻层析等纯化步骤,获得高纯度rhTα1;通过本纯化工艺获得的rhTα1原液经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和高效液相色谱-排阻法(HPLC-SEC)的检测纯度均大于99%;采用玫瑰花环形成率测定rhTα1活性与市售化学合成标准品一致;质谱分析分子质量为3 066.59u,与去乙酰化的rhTα1理论分子质量(3 066u)一致;N端测序结果与理论值一致.综上结果,说明本工艺可实现工业化规模生产.

一种简便快速工艺制备重组人胸腺肽α_1

将构建的含有胸腺肽α1融合蛋白的编码基因插入表达质粒pET28a(+)中,并在大肠杆菌BL21中进行表达,该菌经IPTG诱导融合蛋白高表达后,离心收集菌体,超声波破碎,包含体裂解,目标蛋白质的体外变性复性后,经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化,每升菌液中可获得260 mg融合蛋白。经重组肠激酶酶切反应、Ni-Sepharose亲和层析,Sephadex G-25柱纯化后,得到了纯度达97%的重组人胸腺肽α1,该纯化工艺简单快速,经三步层析即可得到纯度达97%的重组人胸腺肽α1,且产量达82 mg/L,为大批量用细菌表达重组人胸腺肽α1及纯化提供了参考。

酶联免疫法研究注射用重组人胸腺肽α1的猕猴药动学

目的:研究猕猴单次sc重组人胸腺肽α1(rh-Tα1)的药动学。方法:6只猕猴单次scrh-Tα1350μg/kg,采用酶联免疫分析检测(ELISA)法测定动物的血药浓度,实验数据用3P97药代软件拟合并计算药动学参数。结果:rh-Tα1在猕猴体内的消除符合一房室模型,6只动物的达峰时间(tmax)均为1.5h,平均消除半衰期(t1/2ke)为(2.9±0.8)h;峰浓度(Cmax)均值为(297.0±43.3)ng/mL;平均清除率(CL)为(0.373±0.116)mL/(h·kg);药时曲线下面积(AUC0～24h)均值为(1165±333)ng·h/mL。结论:血清样品经5倍稀释后用ELISA方法能较准确测定猕猴血清中rh-Tα1的量。6只猕猴scrh-Tα1后达峰时间一致且较短,主要药动学参数显示一定个体差异,但无明显性别差异。

重组人胸腺肽α_1对大鼠肝组织细胞色素P450基因表达的影响

目的评价重组人胸腺肽α_1(rh-Tα_1)对大鼠肝组织细胞色素P450(CYP450)基因表达的影响。方法SD大鼠经腹腔注射不同剂量的rh-Tα_1(150、300和600μg/kg),14 d后从肝组织中提取总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CYP3A1、CYP1A2和CYP2E1 mRNA的表达。结果与空白对照组相比,rh-Tα_1可显著诱导CYP3A1、CYP 1A2和CYP 2E1的基因表达。结论rh-Tα_1通过诱导CYP450酶系的mRNA表达影响其活性。