重组人色素上皮衍生因子显著抑制血管内皮细胞增殖

目的通过原核表达,获得具有生物活性的人重组色素上皮衍生因子(PEDF)。方法将PEDF基因构建到GST原核表达系统中,经过表达纯化,获得重组蛋白,采用Westernblot和质谱分析确证该重组蛋白,采用MTT法检测所获得的重组蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制活性。结果获得了相对分子质量为46000的重组人PEDF重组蛋白,该蛋白可显著抑制血管内皮细胞增殖。结论成功地经过原核表达获得了具有血管生成抑制活性的重组人色素上皮衍生因子。

重组人色素上皮衍生因子/壳聚糖纳米粒的制备及其对兔角膜新生血管的影响

目的应用离子交联法制备色素上皮衍生因子壳聚糖(PEDF/CS)纳米粒,考察其体外性质及其在兔角膜碱烧伤中对角膜新生血管的影响,探讨其作用机制。方法通过离子交联法制备PEDF/CS纳米粒,考察纳米粒粒径、包封率、zeta电位及体外释放量,建立兔角膜碱烧伤模型,右眼作为实验眼。单纯随机抽样法,分为生理盐水对照组(A组)、PEDF滴眼液组(B组)、PEDF/CS纳米粒组(C组),每组20只。用药后7、14、21、28d大体观察及HE染色角膜新生血管情况,并使用RT-PCR方法检测各组角膜组织中VEGF的表达。结果 PEDF/CS纳米粒大部分呈规则的球型,粒径为(354±1.6)nm,zeta电位为(22.5±0.7)m V,包封率为(76.15±2.80)%,体系较为稳定,具有缓释功能。明显下调兔创伤角膜中的VEGF的表达促进角膜修复,各时间点各组间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论色素上皮衍生因子壳聚糖纳米粒滴眼液通过下调兔创伤角膜中的VEGF的表达,可以减少角膜新生血管的生成。

色素上皮衍生因子在结直肠癌组织中的表达

目的探讨结直肠癌组织中色素上皮衍生因子(PEDF)的表达及其与临床病理参数及预后的关系。方法采用实时荧光定量PCR和免疫组化染色技术检测结直肠癌、淋巴结转移癌和正常肠黏膜组织中PEDF mRNA和蛋白的表达,分析PEDF的表达与临床病理参数及预后的关系。结果结直肠癌组织PEDF mRNA的相对表达量为0.115±0.023,淋巴结转移癌组织为0.201±0.063,正常肠黏膜组织为0.821±0.076(F=9.324,P=0.025),而且结直肠癌组织和淋巴结转移癌组织中PEDF mRNA相对表达量均低于正常肠黏膜组织,结直肠癌组织PEDF mRNA相对表达量低于淋巴结转移癌组织(P均<0.001)。结直肠癌患者中,PEDF蛋白低表达组患者占比为68.33%(82/120),高表达组患者占比为31.67%(38/120)。结直肠癌组织中PEDF蛋白表达与TNM分期、淋巴结转移有关(χ^(2)=57.449,P<0.001;χ^(2)=50.612,P<0.001)。PEDF低表达组患者中位生存期为30.82个月,低于高表达患者的46.89个月(Log-rankχ^(2)=18.140,P<0.001)。结论PEDF表达与结直肠癌患者的TNM分期和淋巴结转移密切相关,结直肠癌组织中PEDF低表达为结直肠癌患者预后差的风险因素。

重组色素上皮细胞衍生因子抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管及兔角膜新生血管

目的:观察制备的重组色素上皮细胞衍生因子(rPEDF)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管及兔角膜新生血管的抑制作用。方法:制备rPEDF,采用鸡胚绒毛尿囊膜分析,观察rPEDF抑制新生血管生长情况。利用碱烧伤制作兔角膜新生血管模型,观察rPEDF抑制角膜新生血管生长状况。结果:rPEDF能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长。rPEDF治疗组兔角膜新生血管长度及生长面积明显少于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。结论:制备的rPEDF抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生长,抑制兔角膜新生血管的形成。

色素上皮细胞衍生因子原核表达重组体的构建

目的构建色素上皮细胞衍生因子(PEDF)原核表达重组体。方法从胚胎绒毛中提取总RNA,经RTPCR扩增,获得编码人PEDF的全基因序列,采用TA克隆法,将PEDF基因克隆入pMD18T载体中并转化入E.coliJM109,经DNA测序正确后构建原核表达重组体pET28aPEDF,转化E.coliDH5a。结果经酶切及DNA测序鉴定,获得了PEDF原核表达重组体pET28aPEDF。结论构建了PEDF原核表达重组体pET28aPEDF,为获得重组PEDF奠定了基础。

重组腺相关病毒载体介导的人色素上皮衍生因子对糖尿病大鼠血-视网膜屏障的影响

目的以重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体介导的人色素上皮衍生因子(human pigmentepithelium-derived factor,hPEDF)转染糖尿病大鼠视网膜,观察其对血-视网膜屏障的影响。方法雄性Wistar大鼠75只应用链脲佐菌素诱导形成糖尿病模型后,随机分为1个月组、3个月组和6个月组,每组各25只。所有大鼠右眼玻璃体内注射rAAV2-CMV-hPEDF作为治疗组,左眼注射rAAV2-CMV-GFP做自身对照。正常大鼠20只右眼假注射,左眼不注射。应用Evans-Blue测定血-视网膜屏障的渗漏变化,应用Western-blotting测定ICAM-1和Occludin蛋白的表达情况。结果随着糖尿病病程进展,视网膜渗漏不断增强,视网膜中Evans-Blue含量不断增加,一直持续到6个月达到高峰。各治疗眼组与自身对照眼组相比视网膜渗漏减轻,其中1个月治疗眼组Evans-Blue含量(68.673±24.083)ng.mg-1低于自身对照眼组(93.850±24.969)ng.mg-1,二者比较,差异无统计学意义(P>0.05);3个月Evans-Blue含量(46.021±16.091)ng.mg-1及6个月(55.198±25.060)ng.mg-1治疗眼组均显著低于自身对照眼组Evans-Blue含量(102.528±39.421)ng.mg-1、(128.225±34.603)ng.mg-1(P<0.05)。但各治疗眼组与正常眼注射组相比Evans-Blue含量仍显著增加(均为P<0.05)。随糖尿病病程进展,视网膜中ICAM-1蛋白含量不断增加,Occludin蛋白含量不断降低。治疗眼组与自身对照眼组相比,ICAM-1蛋白含量均显著下降(均为P<0.01)。3个月及6个月治疗眼组与自身对照眼组相比,Occludin蛋白含量均显著升高(均为P<0.01)。糖尿病大鼠视网膜ICAM-1与Occludin蛋白表达呈显著负相关(r=-0.754,P<0.01)。结论 rAAV2-CMV-hPEDF玻璃体内注射可增加糖尿病大鼠视网膜Occludin的表达,抑制ICAM-1表达,从而减轻糖尿病大鼠视网膜血管的渗漏。

色素上皮衍生因子在糖尿病视网膜病变中的作用机制研究进展

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)是糖尿病常见的微血管并发症之一,其发病率逐年升高,1980年到2018年发病率为2.2%~12.7%。我国DR发病率为18.45%,全球DR患病率达22.27%。目前,DR已成为全世界成人失明的主要原因,严重影响了糖尿病患者的视网膜正常功能和生活质量。视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)是视网膜的最外层,对于维持视觉功能至关重要。RPE细胞可分泌色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor, PEDF)。PEDF是一种相对分子质量为50 000的天然糖蛋白,属于丝氨酸蛋白酶超家族的一员。现有研究表明,PEDF具有抑制血管生成、抗氧化、抗炎、营养神经等多种生物学活性,对包括DR在内的多种疾病具有保护作用。DR的发病机制较复杂,与氧化应激、炎症反应、线粒体功能障碍、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、小胶质细胞异常活化、晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end-product, AGE)蓄积等有关,其中涉及了Wnt/β-cantenin信号通路、线粒体解偶联蛋白(mitochondrial uncoupling protein,UCP)、核因子κB (nuclear factor-κB, NF-κB)通路、过氧化物酶体增殖物激活受体γ、AGE等。PEDF可以通过这些靶点和通路结合发挥作用,从而阻止DR的发生和进展。本文从PEDF抑制新生血管形成、抗氧化应激、抗炎这3个方面着手,阐述PEDF的不同作用靶点和通路在抑制DR发生、发展中的作用机制,为后期开发可广泛应用于临床的DR治疗新药提供理论依据。

重组人色素上皮衍生因子对 HaCaT 细胞体外增殖和白细胞介素6、8及血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨重组人色素上皮衍生因子（rhPEDF）对 HaCaT 细胞体外增殖和白细胞介素6（IL-6）、IL-8及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法 HaCaT 细胞分4组进行不同处理，分别为100μg/L rhPEDF 组、50μg/L rhPEDF 组、25μg/L rhPEDF 组及对照组（只加 RPMI 1640培养液）。采用 CCK8法检测不同浓度 rhPEDF 作用于 HaCaT 细胞24、48、72 h 后对细胞体外增殖的影响。RT-PCR 和 Western 印迹法检测rhPEDF 对 HaCaT 细胞 IL-6、IL-8、VEGF mRNA 及其蛋白表达的影响。统计分析方法采用两因素方差分析、单因素方差分析、SNK-q 检验以及 Pearson 相关分析。结果25、50、100μg/L 的 rhPEDF 作用24、48、72 h 后对HaCaT 细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用。随时间延长和 rhPEDF 浓度的增加，rhPEDF 对 HaCaT 细胞体外增殖的抑制作用均逐渐增强（F =1115、329.9，均 P 〈0.001）。与对照组相比，不同浓度（100、50、25μg/L） rhPEDF 作用于 HaCaT 细胞48 h 后，VEGF、IL-6、IL-8 mRNA 及蛋白的表达均下降，差异均有统计学意义（P 〈0.05）。随 rhPEDF 浓度的增加，各浓度 rhPEDF 组 VEGF mRNA、IL-6和 IL-8蛋白表达均出现下调，与对照组比较，差异均有统计学意义（P 〈0.05）；100μg/L rhPEDF 组的 IL-6、IL-8 mRNA 表达明显低于25μg/L rhPEDF 组（P 〈0.05）；100μg/L rhPEDF 组 VEGF 蛋白表达分别低于50、25μg/L rhPEDF 组（P 〈0.05），而50与25μg/L rhPEDF 组间差异无统计学意义（P 〉0.05）。结论 rhPEDF 可抑制 HaCaT 细胞体外增殖，并可在mRNA 及蛋白水平下调 IL-6、IL-8、VEGF 的表达。

不同培养基中重组人色素上皮衍生因子融合蛋白的表达

目的观察不同种培养基中重组人色素上皮衍生因子(rPEDF)融合蛋白的表达。方法将前期研究已构建的pET28a-PEDF原核表达重组体转化E.coli BL21大肠杆菌表达宿主菌,酶切鉴定阳性菌落后,分别在M9和LB培养基中用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG,Isopropyl-beta-D-thiogalactoside)诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达的PEDF蛋白,美国I mage-Pro Plus分析系统进行蛋白定量分析。结果 LB和M9培养基中均获得相对分子质量约54×103的rPEDF融合蛋白。但LB培养基获得的是rPEDF融合蛋白的包涵体,目的蛋白占总蛋白含量为21.046%,M9培养基获得的是可溶性的rPEDF的融合蛋白,目的蛋白占总蛋白含量的12.31%。结论不同种培养基中均有rPEDF融合蛋白的表达。

血管内皮生长因子与色素上皮衍生因子在糖尿病猕猴视网膜病变早变早期的表达

目的检测糖尿病视网膜病变早期猕猴视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生因子(PEDF)的表达,探讨其意义。方法通过空腹血糖值糖化血红蛋白水平、眼底彩照情况及糖尿病病程,确定入选3只利用高脂饲料诱导成功且处于糖尿病视网膜病变早期的猕猴及3只年龄相当的健康猕猴。行实时荧光定量PCR及免疫组织化学检测,观察猕猴视网膜内VEGF和PEDF表达情况。结果处于糖尿病视网膜病变早期的猕猴视网膜内VEGF在mRNA表达水平(P<0.05)及蛋白表达水平(P<0.05)均明显高于对照组猕猴,糖尿病组猕猴视网膜内PEDF mRNA表达量相比对照组显著减少(P<0.01),PEDF蛋白表达与其mRNA表达趋势一致(P<0.05)。结论猕猴糖尿病视网膜早期,出现VEGF的上调和PEDF的下调,对糖尿病视网膜病变的发生具有一定的提示意义,可为早期糖尿病视网膜病变提供辅助诊断。

高度近视对糖尿病豚鼠视网膜血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子表达的影响

背景 研究发现糖尿病合并高度近视患者较少发生糖尿病视网膜病变（DR）,高度近视对DR的发生和发展可能具有保护作用.DR的主要病理基础是新生血管的形成,而血管内皮生长因子（VEGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）在DR的发生和发展过程中具有重要作用. 目的 观察高度近视合并糖尿病豚鼠视网膜中VEGF和PEDF表达的变化,探讨高度近视对DR的影响.方法 将出生3d的豚鼠48只采用随机数字表法随机分为正常对照组、高度近视组、糖尿病组和糖尿病合并高度近视组,每组12只.高度近视组豚鼠用半透明眼罩行右眼遮盖,构建高度近视动物模型;采用60 mg/kg的链脲佐菌素（STZ）腹腔内注射4次,每3天1次,制作糖尿病豚鼠模型;糖尿病合并高度近视组豚鼠采用半透明眼罩联合STZ制作糖尿病合并高度近视模型.造模成功后行常规苏木精-伊红染色观察视网膜结构,免疫组织化学染色检测视网膜中VEGF和PEDF的表达情况,应用Biosens数字成像分析系统分析阳性反应部位的平均吸光度（A）值. 结果 正常对照组、高度近视组、糖尿病组和糖尿病合并高度近视组的屈光度分别为（＋0.25±177;0.07）、（-7.50±177;0.04）、（＋0.25±177;0.03）和（-7.50±177;0.02）D;空腹血糖分别为（5.3±177;0.1）、（5.1±177;0.2）、（19.7±177;0.4）和（18.5±177;0.3）mmol/L.各组豚鼠均造模成功.与正常对照组相比,高度近视组视网膜组织变薄,神经节细胞数目减少;糖尿病组视网膜组织结构疏松、肿胀;糖尿病合并高度近视组视网膜组织变薄,结构肿胀.正常对照组、高度近视组、糖尿病组和糖尿病合并高度近视组VEGF阳性反应部位平均A值分别为128.61 ±177;5.57、118.24±177;2.59、155.60±177;9.70和135.15±177;5.22,各组间总体比较差异有统计学意义（F=17.365,P=0.032）,其中糖尿病合并高度近视组豚鼠视网膜中VEGF表达水平（A值）明显低于糖尿病组,差异有统计学意义（t=5.210,P＜0.05）;PEDF阳性反应部位平均A值分别为145.57±177;8.35、149.54±177;6.20、127.71 ±177;2.45和1 37.53±177;7.38,各组间总体比较差异有统计学意义（F=19.210,P=0.019）,其中糖尿病合并高度近视组豚鼠视网膜中PEDF水平明显高于糖尿病组,差异有统计学意义（t=4.521,P＜0.05）.结论 高度近视合并糖尿病的豚鼠视网膜中VEGF表达量下调,而PEDF表达上调,这可能是高度近视眼不易发生DR的主要机制.

色素上皮衍生因子抑制碱烧伤角膜新生血管的机制研究

目的:探讨外源性色素上皮衍生因子(pigment epitheliumderived factor,PEDF)抑制大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)形成的作用机制,检测外源性PEDF对CNV模型中内源性血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及PEDF、细胞凋亡受体/配体(Fas/FasL)表达的影响,以及对CNV内皮细胞凋亡的影响(脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法——TUNEL法测定)。方法:大鼠随机分为3组:PEDF治疗组(A组)、生理盐水对照组(B组)、正常组(C组)。建立碱烧伤诱导的大鼠CNV模型,A组和B组分别给予PEDF+氯霉素滴眼液和生理盐水+氯霉素滴眼液点眼,采用裂隙灯观察CNV的生长情况,用免疫组化方法检测并半定量分析VEGF,PEDF,Fas及FasL在正常角膜组织和碱烧伤后4,7,10,14d角膜组织中的表达,用TUNEL法检测CNV内皮细胞的凋亡情况。结果:正常角膜组织中可以检测到高PEDF表达和低VEGF表达,也可以检测到一定的低Fas和FasL表达。各时间点角膜新生血管的面积,A组均低于B组(P<0.05)免疫组化显示,碱烧伤后4,7,10,14d A组VEGF的表达均低于B组(P<0.05),PEDF的表达均高于B组(P<0.05),A组Fas/FasL的表达明显高于B组(P<0.05),A组TUNEL法测到的角膜新生血管内皮细胞凋亡计数和凋亡指数AI明显高于对照组(P<0.05)。两组检测到的VEGF均在第7d达到峰值,随后下降;而PEDF和Fas及FasL在第10d达到峰值,随后下降。碱烧伤后第4～10dVEGF/PEDF>1,CNV逐渐生长并达到峰值;第10d后VEGF/PEDF<1,CNV开始逐渐退化。结论:PEDF抑制碱烧伤后CNV的作用机制可以归结为两点:(1)下调VEGF的表达,控制PEDF/VEGF的动态比值,抑制CNV生长;(2)上调Fas/FasL等凋亡受体的表达,诱导角膜新生血管内皮细胞的凋亡,促进CNV的退化。

不同氧环境下新生大鼠视网膜血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子间的关系

目的研究不同氧浓度环境对新生大鼠氧视网膜病变新生血管的影响及血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)在视网膜血管形成中的作用。方法新生大鼠生后即置于50%和45%～12.5%的氧环境下14d。计数每张切片上突破内界膜且与内界膜有联系的内皮细胞核数,免疫组织化学检测VEGF、PEDF在大鼠视网膜的表达。结果在暴露于45/12.5%氧环境下的大鼠,视网膜新生血管密度为92.62±23.45,持续50%氧组为14.23±12.86,对照组为12.96±10.58;VEGF阳性细胞率在45%～12.5%氧环境组、持续50%氧组分别为57.89%、4.98%,而对照组为13.20%,差异有统计学意义(F=479.461,P=0.000)。离开暴露环境后0、2d的VEGF阳性细胞率在45%～12.5%氧和持续50%氧组分别为(57.89±2.84)%、(39.38±1.10)%和(34.98±4.80)%、(27.80±4.05)%(P均=0.000)。PEDF在三组的表达差异无统计学意义(F=0.271～0.765,P均>0.05)。因此,两实验组病理形态方面差异与视网膜的总VEGF水平相关,而总的PEDF水平在各组间差异无统计学意义。结论在鼠早产儿视网膜病(ROP)模型中,血氧小的波动就可触发随后不成比例的血管增长,后者伴随比PEDF更强烈的VEGF的变化。如果这种变化同样存在,即可解释胎龄、体重、临床相似的早产儿,在相同给氧条件下的部分发生ROP,而部分不发生ROP的现象。

加减驻景方对病理性近视脉络膜新生血管动物模型血管内皮生长因子及色素上皮衍生因子表达的影响

目的观察加减驻景方对病理性近视脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)表达的影响,探讨中药驻景方对病理性近视CNV的干预作用。方法将3周龄雌性三色豚鼠75只随机选取15只为空白对照组,剩余豚鼠均戴头套右眼形觉剥夺诱导病理性近视,并随机分为模型组、中药组,每组各30只,右眼行氪激光光凝。于光凝后第1天开始连续灌胃21 d,中药组予驻景方3.285 g·kg-1·d-1(1.5 m L·d-1),模型组予等量的生理盐水。造模后7 d、14 d、21 d分别行免疫组织化学及RTPCR检测。结果免疫组织化学结果显示,造模完成后14 d、21 d时中药组VEGF表达的光密度值(0.130 1±0.019 6、0.055 6±0.011 9)较模型组(0.165 9±0.054 3、0.096 1±0.025 9)减少,差异均有统计学意义(P=0.006,P<0.001)。造模完成后14d及21 d时中药组PEDF表达的光密度值(0.038 9±0.004 0、0.054 3±0.008 5)较模型组(0.030 5±0.007 7、0.029 3±0.0059)增高,差异有统计学意义(P=0.026,P<0.001)。RT-PCR结果显示,VEGF mRNA、PEDF mRNA在各组中均有表达,中药组VEGF mRNA表达水平较模型组明显减弱,而PEDF mRNA的表达较模型组增强。结论中药驻景方可抑制氪激光诱导的病理性近视CNV模型中VEGF的表达,促进PEDF的表达,从而抑制CNV的形成。

胰岛素治疗对糖尿病大鼠肝脏色素上皮衍生因子表达的影响

【目的】探讨胰岛素治疗改善2型糖尿病大鼠肝脏中色素上皮衍生因子(PEDF)的表达及其内在机制。【方法】8周龄雄性Spraque-Dawley大鼠高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素诱导糖尿病模型(12只),按随机数字表法分3组为:糖尿病模型组(DM,6只)、胰岛素治疗组(INS,6只);另设正常对照组(N,6只)。通过Western blotting法检测大鼠肝脏PEDF、基质金属蛋白酶(MMP2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白表达。【结果】胰岛素治疗后降低了糖尿病大鼠空腹血糖及血清甘油三酯的含量,改善糖尿病大鼠肝脏脂质沉积的状态;糖尿病大鼠肝脏中TNF-α及MMP2的蛋白表达高于正常组(P<0.05),PEDF的蛋白表达低于正常组(P<0.05),胰岛素治疗后降低了糖尿病大鼠肝脏TNF-α及MMP2的表达,上调PEDF的表达。【结论】胰岛素对糖尿病大鼠肝脏PEDF的上调作用可能与胰岛素的抗炎作用有关,这也可能是胰岛素改善肝脏脂质沉积的机制之一。

高糖和SB203580对大鼠肾系膜细胞色素上皮细胞衍生因子表达的影响

目的探究高糖以及SB203580对大鼠肾系膜细胞的色素上皮细胞衍生因子(PEDF)表达的影响。方法将大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞分为7组,将高糖作为刺激因子,SB203580作为干预因素。分别设正常对照组、高糖组(包括3种浓度的葡萄糖)、甘露醇组、治疗组以及溶剂对照组。用RealtimeQuantitativePCR法测定各组系膜细胞PEDFmRNA表达。结果(1)正常组系膜细胞PEDF在mRNA的水平上有表达,高糖组系膜细胞PEDFmRNA的表达较正常对照组明显降低。(2)治疗组的系膜细胞PEDFmRNA表达较高糖组明显增加。结论高糖可抑制大鼠肾系膜细胞PEDF的表达,并与P38MAPK信号通路有关。

丝胶对糖尿病肾病大鼠肾血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子表达的影响

目的：观察彩色蚕茧提取物-丝胶对糖尿病肾病大鼠肾血管内皮生长因子（VEGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）表达的影响.方法：雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病模型组、丝胶治疗组、二甲双胍治疗组和丝胶预防组.建立链脲佐菌素致动物模型,以血糖≥16.7mmol/L作为成模标准;丝胶治疗组和二甲双胍组大鼠分别给予丝胶（2.4g·kg-1·d-1,35d）和二甲双胍（55.33mg·kg-1·d-1,35d）灌胃;丝胶预防组大鼠于注射链脲佐菌素前给予丝胶（2.4g·kg-1·d-1）灌胃35d.分别检测各组大鼠的血糖和24h尿蛋白;免疫组织化学显色和免疫印迹法观察肾VEGF和PEDF蛋白的表达.结果：与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠的血糖、24h尿蛋白定量和肾VEGF蛋白的表达升高,肾PEDF蛋白的表达降低;丝胶治疗组、丝胶预防组和二甲双胍组大鼠的血糖、24h尿蛋白定量和肾VEGF蛋白的表达低于模型组,肾PEDF蛋白的表达高于模型组,且丝胶治疗组、丝胶预防组与二甲双胍组比较无差别.结论：丝胶可通过上调肾PEDF蛋白、下调肾VEGF蛋白改善糖尿病肾病时肾血管生成的不平衡,发挥对糖尿病肾病大鼠肾的保护和预防作用.

腺病毒介导色素上皮衍生因子基因转移治疗早产儿视网膜病变的实验研究

目的探讨腺病毒介导的色素上皮衍生因子(ADV-PEDF)对视网膜病变(ROP)早产儿视网膜新生血管形成的抑制作用。方法7日龄C57BL/6J正常新生鼠60只置氧体积分数为(750±5)mL/L的环境中连续生活5d,再回到正常空气中建立氧诱导的ROP模型。随机分为实验组和对照组,每组各30只。实验组在鼠龄第12天玻璃体腔内注射1μLADV-PEDF,对照组注射相同体积腺病毒空载体。在鼠龄第17天处死所有新生鼠。视网膜铺片,ADP酶染色,观察视网膜血管改变;组织切片观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞细胞核数目;Western blotting检测视网膜PEDF的表达。结果对照组视网膜铺片ADP酶染色可见自视盘发出的视网膜血管较细、迂曲,在视盘周围及中周部深层毛细血管广泛闭锁,有大片无灌注区形成,无灌注区边缘有致密的新生血管团形成。实验组视网膜血管分布规则、未见明显的无灌注区形成,突破内界膜的内皮细胞细胞核数目明显减少(P<0.01);二组组织切片均未见明显视网膜毒性及炎性反应;Western blotting检测到实验组视网膜PEDF的高表达。结论ADV-PEDF可有效抑制ROP动物模型视网膜新生血管形成,为ROP的基因治疗奠定基础。

胰岛素强化治疗对糖尿病肾病患者色素上皮衍生因子及血管内皮生长因子水平的影响

目的：观察不同时期糖尿病肾病患者血清色素上皮衍生因子（PEDF）、血管内皮生长因子（VEGF）水平的差异，并探讨胰岛素强化治疗对其血清PEDF及VEGF水平的影响。方法选取2012年12月～2013年12月在北京军区总医院住院的2型糖尿病患者（符合1999年WHO糖尿病诊断标准）85例，根据尿白蛋白/肌酐比值（UACR）分为三组院正常白蛋白尿组（A组）30例（UACR约30 mg/g）；微量白蛋白尿组（B组）28例（30 mg/g≤UACR约300 mg/g）；大量白蛋白尿组（C组）27例（UACR≥300 mg/g）。分别给予14 d的胰岛素强化治疗，于治疗前后测定空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2hPBG）、糖化血清蛋白（GSP）、PEDF、VEGF、UACR，并对各指标进行分析。结果①治疗前B、C组PEDF、VEGF明显高于A组（P〈0.01），且C组明显高于B组（P〈0.01）。②胰岛素强化治疗后，三组FPG、2hPBG、GSP、PEDF和VEGF均较治疗前明显下降（P〈0.05或P〈0.01）。结论①糖尿病肾病患者的PEDF、VEGF水平明显高于正常蛋白尿的糖尿病患者，随着白蛋白尿的增加，PEDF、VEGF水平明显升高。②无论是否合并糖尿病肾病，胰岛素强化治疗均可以在降血糖的同时，改善其PEDF、VEGF水平。

卵巢过度刺激综合征与卵泡液血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子水平的关系

目的通过对卵泡液中血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)水平的测定,探讨二者与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中卵巢过度刺激综合征(OHSS)的关系及其对OHSS的预测价值。方法本研究为单中心的前瞻性病例对照研究。71例IVF-ET患者在接受控制性超排卵(COH)过程中呈OHSS高危者43例,其中发生中重度OHSS的13例为OHSS组,未发生OHSS的30例为高危组;同期在COH中卵巢反应正常的28例患者为对照组。采用酶联免疫吸附法分别检测三组患者取卵日卵泡液中VEGF和PEDF水平。结果 (1)OHSS组的卵泡液VEGF水平明显高于高危组和对照组(P<0.05),高危组和对照组间比较无显著性差异(P>0.05)。(2)OHSS组的卵泡液PEDF水平明显低于高危组和对照组(P<0.05),高危组和对照组间比较无显著性差异(P>0.05)。(3)卵泡液VEGF水平与注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)日血清雌激素水平呈正相关(r=0.391,P<0.01),与卵泡液PEDF水平呈负相关(r=-0.280,P<0.05)。结论卵泡液中VEGF和PEDF与OHSS的发病密切相关,局部VEGF和PEDF的失衡可能在OHSS的发病中起一定作用。卵泡液VEGF/PEDF的升高可用于预测OHSS的发生。