重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌中的表达

目的:提高重组人成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌工程菌表达体系E.coliBL21(DE3)/pET3c-haFGF中的表达水平。方法:从菌种和培养基筛选做起,选择了全合成的YH培养基做大肠杆菌表达体系E.coliBL21(DE3)/pET3c-haFGF的发酵培养基,并从多角度研究了其质粒的稳定性,设计了生长期不添加抗生素、诱导前离心去除β-内酰胺酶同时添加氨苄青霉素的方法,通过密码子偏爱性和定点PCR突变技术改变β-内酰胺酶的表达强度。结果:经50代传代试验,质粒分配稳定性在90%以上,PstI酶切图谱显示结构稳定性达100%,表达水平维持在25%～28%。LBAmp平板揭示了诱导过程中工程菌丧失表达能力的部分原因,诱导前离心的实验使表达水平提高13.68%,在IPTG浓度0.3mmol/L、氨苄青霉素添加量50μg/ml时,表达效率提高了25%。结论:本研究建立的工艺操作较为简便易行,易于放大,具有较大的经济意义。

重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子对帕金森病大鼠中脑腹侧被盖区酪氨酸羟化酶神经元的保护

目的：探讨重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子（Mrh-aFGF）对帕金森病（PD）大鼠旋转行为和中脑腹侧被盖区酪氨酸羟化酶（TH）免疫阳性神经元的影响.方法：6-羟基多巴胺（6-OHDA）分别注入黑质和腹侧被盖区后建立PD大鼠模型,侧脑室内注射Mrh-aFGF,用阿扑吗啡诱导旋转行为,免疫组织化学显色观察TH免疫阳性神经元和纤维,并进行定量分析.结果：PD组术后旋转启动时间缩短,持续时间延长,速度加快;Mrh-aFGF处理组旋转行为有改善.各组大鼠组内健侧和损毁侧阳性神经元比较,对照组损毁侧无明显改变;PD组、NS处理组和Mrh-aFGF处理组损毁侧阳性神经元与健侧比较均减少.Mrh-aFGF处理组损毁侧中脑腹侧被盖区阳性神经元数量较PD组及对照组增加.结论：Mrh-aFGF能减少PD大鼠中脑腹侧被盖区TH免疫阳性神经元的丢失,并改善其旋转行为.

重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子减少帕金森病大鼠黑质酪氨酸羟化酶免疫阳性神经元丢失

目的探讨重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子(Mrh-aFGF)对帕金森病(PD)大鼠旋转行为和酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性神经元的影响。方法6-OHDA分别注入黑质和腹侧被盖区后建立PD大鼠模型,侧脑室内注射Mrh-aFGF,用阿扑吗啡诱导旋转行为,免疫细胞化学染色观察TH免疫阳性神经元和纤维,并进行定量分析。结果对照组均未引出旋转行为;PD组术后旋转启动时间缩短,持续时间延长,速度加快;生理盐水(NS)处理组旋转行为未见明显改善;Mrh-aFGF处理组旋转启动时间延长,持续时间缩短,速度减慢(P<0.01)。各组大鼠健侧黑质TH阳性神经元的数量维持在相近的水平。同组内健侧和损毁侧阳性神经元比较,对照组损毁侧无明显改变;PD组、NS处理组和Mrh-aFGF处理组损毁侧阳性神经元与健侧比较均明显减少(P<0.01)。其中PD组损毁侧黑质TH免疫阳性神经元数量随时间延长逐渐减少(P<0.01)。NS处理组损毁侧黑质TH免疫阳性神经元的变化与PD组相似;Mrh-aFGF处理组损毁侧黑质阳性神经元较PD组及NS处理组有明显改善,阳性神经元的数量明显增加(P<0.01)。结论Mrh-aFGF能减少PD大鼠黑质TH免疫阳性神经元的丢失,并改善其旋转行为。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对紫杉醇诱导体外大鼠肝细胞损伤保护作用的体外实验研究

目的：探究改构型酸性成纤维细胞生长因子（MaFGF）对紫杉醇（Taxol）诱导体外培养的大鼠肝细胞损伤的保护作用.方法：选用新生SD大鼠培养原代肝细胞,将原代肝细胞种于96孔培养板：培养7d后加入各种不同浓度的紫杉醇,作用24h,采用四唑盐（MTT）比色法检测细胞抑制率;建立紫杉醇损伤肝细胞的模型,与此同时加入系列质量浓度的MaFGF,观察MaFGF对肝细胞的保护作用.结果：紫杉醇对体外培养的肝细胞具有一定的抑制作用,并呈质量浓度依赖型;在质量浓度为3.25×10^-3~8.20×10^-3mg/L范围内,MaFGF降低了紫杉醇对肝细胞的抑制率,增高了肝细胞的活性;Taxol组与对照组比较,各生化和酶学指标差异均有显著性（P〈0.05）;Taxol＋MaFGF（3.25×10-3~8.20×10-3mg/L）组和Taxol组比较,各生化和酶学指标差异均有统计学意义（P〈0.01）,Taxol＋MaFGF组中超氧化物歧化酶（SOD）活性升高,一氧化氮（NO）、谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）水平降低.结论：MaFGF对紫杉醇损伤的肝细胞具有一定的保护作用.

白花丹素致体外培养肝细胞的损伤及改构型酸性成纤维细胞生长因子对肝细胞的保护作用

目的研究白花丹素(plumbagin)对肝细胞的抑制作用及改构型酸性成纤维细胞生长因子(MaFGF)是否对白花丹素引起的肝细胞损伤有保护作用。方法将原代培养的肝细胞接种于96孔培养板:①72 h后加入一系列浓度的白花丹素,实验组在白花丹素作用24 h后加入不同浓度MaF-GF,再培养24 h后用MTT法检测细胞存活率。②以白花丹素建立损伤模型,并在加药后24 h加入一定量的MaFGF,观察MaFGF对白花丹素诱导的肝细胞损伤保护作用。③采用倒置相差显微镜对细胞进行连续的观察并照相,记录对照组、致伤组、细胞生长因子组细胞形态的变化。结果①成功建立白花丹素致肝细胞损伤的模型:白花丹素能明显抑制肝细胞的增殖,抑制效应与白花丹素的浓度相关。②白花丹素+不同浓度的MaFGF对肝细胞的抑制率随MaFGF浓度的增大而减小;IC50随着MaFGF浓度的增大而明显增高,并呈现比较明显的剂量-效应特点。③白花丹素组与对照组比较,各生化和酶学指标差异均有显著性(P<0.01或P<0.05);白花丹素+MaFGF组与白花丹素组比较,SOD活性升高、NO、MDA、LDH、GPT、GOT下降,差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。而白花丹素+MaFGF组与对照组比较,各生化和酶学指标活性或含量均未回落至正常水平,差异仍有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论白花丹素对肝细胞有毒性作用;MaFGF对白花丹素损伤的原代培养肝细胞有一定的保护作用。

酸性成纤维细胞生长因子及其改构体对培养大鼠RGCs存活与生长的影响

目的观察不同质量浓度aFGF、MaFGF对培养的大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)生长的影响,及aFGF的神经保护活性是否依赖促有丝分裂活性。方法用不同质量浓度的aFGF和MaFGF培养RGCs。免疫细胞化学染色,计数免疫阳性细胞,计算轴突生长细胞百分率,MTT法进行检测。结果培养第3d,大部分存活细胞为Thy-1免疫细胞化学反应阳性,5d、7d后逐渐减少。实验组存活时间3～4d;培养第3d,MTT法见各组A值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),培养第5d、7d,差异有统计学意义(P<0.01);培养相同天数不同质量浓度的aFGF及MaFGF比较,差异均有统计学意义(P<0.05);相同质量浓度的aFGF各组与MaFGF各组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论aFGF、MaFGF均能促进培养大鼠RGCs的存活,并延长其存活时间;aFGF保护及促进RGCs存活的作用不依赖其有丝分裂活性。

改构体酸性成纤维细胞生长因子对肠缺血再灌注损伤中AP-1表达的影响

目的:观察外源性给予改构体酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)后,肠缺血-再灌注损伤中转录因子AP-1(fos/jun复合物)表达规律。方法:以大鼠肠系膜上动脉(SMA)夹闭造成肠缺血-再灌注损伤模型,并将动物随机分为假手术组(C)、生理盐水对照组(R)、改构体治疗组(F)。除假手术组外,其余各组动物均于缺血45 min后2、6、12、24h活杀,取小肠组织标本,免疫组化检测原癌基因c-fos、c-jun表达规律。结果:在正常大鼠,原癌基因c-fos、c-jun分布在小肠绒毛上皮细胞的肠腔侧、侧壁和小肠隐窝朝向隐窝腔的一侧的细胞膜上。缺血和再灌注的初期,原癌基因c-fos、c-jun的表达未发生明显变化,随着再灌注时间的延长逐渐增强。改构体aFGF使原癌基因c-fos、c-jun的表达有明显的增强。缺血和再灌注使PCNA的表达增加,在再灌注后6 h达到高峰。F组PCNA的表达较R组相应时间点显著增加(P<0.05)。结论:转录因子AP-1与PCNA表达一致,在缺血-再灌注损伤的修复中起积极作用;改构体aFGF对此有促进作用。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对大鼠肾缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨改构型酸性成纤维细胞生长因子(modified aFGF,MaFGF)对大鼠肾缺血/再灌注损伤的影响。方法Wistar大鼠32只,随机分为4组,即假手术组、模型组、MaF-GF1组(8μg.kg-1)和MaFGF2组(16μg.kg-1),每组8只。以肾缺血/再灌注损伤为模型,通过光、电镜观察肾组织病理变化。结果MaFGF能明显减轻肾组织水肿、间质浸润以及肾小管扩张与破坏,电镜下见肾小管上皮细胞内细胞器(微绒毛、线粒体、溶酶体等)损伤较轻或基本正常。结论MaFGF对大鼠肾缺血/再灌注损伤有一定的保护作用。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对顺铂肾损害保护作用的研究

目的:研究改构型酸性成纤维细胞生长因子(MaFGF)对顺铂(DDP)引起的体外培养的肾小管上皮细胞损害的保护作用。方法:将原代培养的肾小管上皮细胞接种于96孔培养板:(1)培养72h后加入一系列浓度的DDP,实验组在DDP作用12h后加入不同浓度MaFGF,再培养36h后用WST-8法检测细胞存活率。(2)以DDP建立损伤模型,并在加药后12h加入一定量的MaFGF,观察MaFGF对肾小管上皮细胞的保护作用。结果:(1)MaFGF能使DDP对肾小管上皮细胞的半数抑制浓度(IC50)升高。(2)DDP组与对照组比较,各生化和酶学指标差异均有统计学意义;而MaFGF+DDP组与对照组比较,SOD、GSH-Px酶活性差异无统计学意义,MDA、NO升高差异仍有统计学意义。结论:MaFGF对DDP损伤的肾小管上皮细胞有明显的保护作用。

改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子对肠缺血-再灌注损伤的保护作用及剂量-效应关系研究

目的 评价改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子 (a FGF)对肠缺血再灌注损伤后肠道保护作用的机制及剂量效应关系。方法 以夹闭大鼠肠系膜上动脉 (SMA)制备肠缺血再灌注损伤模型 ,并将动物随机分为假手术组、生理盐水对照组、不同剂量 (2、4和 8μg)改构型 a FGF治疗组和 4 μg野生型 a FGF治疗组。除假手术组外 ,其余各组动物均于缺血 4 5 m in后再灌注 2、6、12和 2 4 h活杀 ,取血及小肠组织标本 ,检测血浆中 D乳酸含量及组织中增殖细胞核抗原 (PCNA )的表达特性 ,并检测肝、肾功能指标 ,观察不同剂量a FGF对肠缺血再灌注损伤的影响。结果 血浆 D乳酸变化及病理组织学观察显示 ,再灌注后 12 h肠屏障功能及肝、肾组织损伤最严重 ,而改构型 a FGF 4μg治疗组在伤后 2 4 h损伤较生理盐水对照组和野生型 a FGF治疗组有所减轻。PCNA的表达趋势与 D 乳酸类似。结论 改构型 a FGF对肠缺血再灌注损伤具有一定保护与促修复作用 ,其抗损伤修复作用呈剂量依赖性。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对细胞增殖活性的影响

目的:研究aFGF和MaFGF对正常的肾小管上皮细胞及胃癌细胞增殖的影响。方法:用不同浓度的aFGF和MaFGF分别作用于肾小管上皮细胞及胃癌细胞,48h后采用WST-8法测定aFGF和MaFGF对两种细胞的促增殖活性。结果:在各浓度下,MaFGF组对肾小管上皮细胞和胃癌细胞的促增殖作用都显著低于aFGF组。结论:MaFGF对肾小管上皮细胞及胃癌细胞的促分裂活性较aFGF明显下降。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对衰老模型大鼠自由基与脂质过氧化物的影响

背景:有研究表明改构型酸性成纤维细胞生长因子是多功能生长因子,但其抗衰老作用至今尚未见报道。目的:观察改构型酸性成纤维细胞生长因子对D-半乳糖致衰老大鼠脑组织、肝组织及血清中超氧化物歧化酶活力、丙二醛含量和抑制羟自由基能力的影响。方法:选择成年Wistar大鼠皮下注射D-半乳糖建立衰老模型,建模成功后随机分为模型组、生理盐水对照组和改构型酸性成纤维细胞生长因子治疗组,另设正常对照组。改构型酸性成纤维细胞生长因子组按12μg/kg剂量肌肉注射改构型酸性成纤维细胞生长因子,生理盐水对照组肌肉注射等量的生理盐水,模型组不作干预。结果与结论:与模型组和生理盐水对照组相比,改构型酸性成纤维细胞生长因子治疗组脑组织、肝组织及血清中超氧化物歧化酶活力和抑制羟自由基能力均显著升高(P<0.01或P<0.05),丙二醛含量均显著降低(P<0.01或P<0.05)。结果证实,改构型酸性成纤维细胞生长因子可通过降低自由基,提高机体的抗氧化能力来发挥延缓衰老的作用。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对大鼠动脉血栓形成的影响

目的探讨改构型酸性成纤维细胞生长因子(modified acidic fibroblast growth factor,MaFGF)对大鼠颈总动脉血栓形成的影响。方法Wistar大鼠50只,随机分成生理盐水组、肝素组、MaFGF组(又分MaFGF1组、MaFGF组、MaFGF组),每组10只。于大鼠的股静脉分别注射生理盐水(0.5ml/100g)、肝素钠(0.1U/10023g),MaFGF1组(10U/100g)、MaFGF2组(100U/100g)、MaFGF3组(1000U/100g),给药后5min,用保护电极刺激颈总动脉,直至血压曲线逐渐消失,记录刺激开始至压力曲线消失的时间,即血栓堵塞时间。结果肝素组、MaFGF2组、MaFGF3组与生理盐水组比较,平均堵塞时间延长(P<0.05或P<0.01);肝素组与各MaFGF组之间比较,肝素的平均堵塞时间明显较长(P<0.001)。结论MaFGF可以延长大鼠动脉血栓形成的时间,并呈现一定的量效关系。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对紫杉醇诱导的人胚肝细胞L-O2及人胚肾细胞293损伤的保护作用

目的观察紫杉醇对人胚肝细胞L-O2及人胚肾细胞293的毒性作用,及加入改构型酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)后对紫杉醇引起的肝肾细胞损害的保护,并探讨其可能机制。方法用紫杉醇诱导人胚肝细胞L-O2及人胚肾细胞293损伤,同时加入aFGF对肝、肾细胞进行保护,并测定培养上清液中的SOD,MDA,LDH值,MTT法测定肝、肾细胞活性。结果紫杉醇在体外对人胚肝细胞L-O2、人胚肾细胞293有一定的毒性作用,使用aFGF对肝、肾细胞进行保护后,IC50值有明显的提高,SOD值与未加aFGF组相比明显升高,而MDA,LDH值明显降低(P<0.05)。结论 aFGF可有效对抗紫杉醇引起的肝、肾细胞损伤。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对衰老大鼠血钙的影响

目的:观察改构型酸性成纤维细胞生长因子(maFGF)对D-半乳糖致衰老大鼠的血清Ca2+含量的影响,探讨maFGF抗衰老的机制。方法:选择成年Wistar大鼠30只,采用皮下注射D-半乳糖建立衰老模型,衰老模型成功后随机分为衰老对照组、NS对照组和maFGF治疗组,maFGF治疗组按12μg/kg剂量肌内注射,1次/d,共14d,NS对照组肌内注射与maFGF治疗组相同容量的0.9%NaCl溶液,1次/d;衰老对照组不作任何干预。各组大鼠到相对应的时间点取血测定血清Ca2+含量。结果:与衰老对照组和NS对照组相比,maFGF治疗组血清Ca2+含量均明显降低(P<0.01)。结论:maFGF能降低衰老大鼠血清Ca2+含量。

改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子对大鼠皮肤生长促进作用的比较

目的 比较改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子 ( a FGF)促进大鼠皮肤生长的作用。方法 将 2 mm× 2 mm的新生大鼠皮肤分别接种在含有 1、10和 10 0 μg/ L 3种不同浓度的改构型 a FGF和野生型 a FGF与体积分数为 10 %小牛血清的 Dulbecco改良 Eagle培养基中培养 4 d,然后测定生长后皮肤的面积。结果 空白对照组的皮肤面积为 ( 2 .96± 1.12 ) mm2 ,浓度为 1、10和 10 0 μg/ L 改构型 a FGF组的皮肤面积分别是空白对照组的 1.4、1.5和 1.3倍 ,而 3种不同浓度的野生型 a FGF组的皮肤面积分别是空白对照组的 1.5、3.2和 1.6倍。与其他组相比 ,只有浓度为 10μg/ L野生型 a FGF组的皮肤面积显著升高 ( P<0 .0 5 )。结论 改构型 a FGF对皮肤生长无显著刺激 ,其作用效果明显低于野生型 a FGF。

改构型酸性成纤维细胞生长因子干预慢性衰老模型大鼠脑及肝组织和血液ATP酶的活力

背景:有研究表明改构型酸性成纤维细胞生长因子是多功能生长因子,但其抗衰老作用至今尚未有报道。目的:观察改构型酸性成纤维细胞生长因子对D-半乳糖致衰老大鼠脑组织、肝组织及红细胞膜Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力的影响。方法:将Wistar大鼠采用皮下注射D-半乳糖建立衰老模型,建模成功后随机分为模型组、生理盐水对照组和改构型酸性成纤维细胞生长因子组,另设正常对照组。改构型酸性成纤维细胞生长因子组按12μg/kg剂量肌肉注射改构型酸性成纤维细胞生长因子,生理盐水对照组肌肉注射等量的生理盐水,模型组不干预。结果与结论:与正常对照组相比,模型组大鼠脑组织、肝组织及红细胞膜Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力均明显著降低(P<0.01)。改构型酸性成纤维细胞生长因子组脑组织、肝组织及红细胞膜Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力均明显高于模型组和生理盐水对照组(P<0.05)。结果提示,改构型酸性成纤维细胞生长因子能提高衰老大鼠脑组织、肝组织及红细胞膜Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力,具有延缓衰老作用。

改构型酸性成纤维细胞生长因子对体外培养肝细胞增殖活性的影响

目的探讨改构型酸性成纤维细胞生长因子(MaFGF)对体外培养大鼠肝细胞增殖的影响。方法采用"0.25%胰酶+0.1%胶原酶"消化法分离培养大鼠肝细胞并传代纯化扩增,取第3代细胞鉴定后实验:(1)形态学法观察在不同浓度MaFGF组中细胞的形态变化;(2)将实验随机分为对照组和MaFGF组,MaFGF组加入一系列浓度的MaFGF,MTT法测定不同浓度MaFGF组作用于肝细胞24、48、72h的促增殖活性;(3)MTT法筛选出最适的MaFGF浓度,用此浓度和不加生长因子2种方式培养细胞,并绘制细胞生长曲线。结果(1)MaFGF对体外培养的肝细胞有一定的促增殖作用,但是与浓度不成正比;且实验表明24h的增殖率较其它时间点显著增高(P<0.05);比较对照组和各组(4.68×10^(-3)~7.80×10^(-3)mg/LMaFGF组)均差异有统计学意义(P<0.05),但各组间对肝细胞的促增殖作用的差异无统计学意义;(2)最适浓度(6.24×10^(-3)mg/L)MaFGF的第4天细胞数量较对照组明显增加(P<0.05);MaFGF组的第10天细胞数(12.4×10~4)是对照组(6×10~4)的2.1倍(P<0.05)。结论在适宜浓度和时间内,MaFGF对肝细胞具有一定的促增殖作用且不具有浓度依赖性。

酸性成纤维细胞因子的研究进展

酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)是一种重要的生长因子,其生理功能和生物学效应广泛,具有潜在的临床应用价值。文章概述了aFGF及其受体的结构与功能关系的研究进展,概述了aFGF的生物学效应及其在临床使用的用途,讨论了aFGF的改构体可能存在的问题。

侧脑室注射改构体酸性成纤维细胞生长因子对帕金森病大鼠旋转行为的影响

目的观察改构体酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）对帕金森病大鼠模型行为学的影响。方法采用SD雄性大鼠72只，随机分为假手术组，PD模型组，PD模型加生理盐水组（PD＋NS组），PD模型加改构体aFGF组（PD＋aFGF组），每组18只。通过脑内立体定向术，将6-OHDA注人后3组大鼠左侧黑质致密部（substantia nigra pars compacta，SNC）和中脑被盖腹侧区（ventral tegmental area，VTA）以建立帕金森病模型，PD＋NS组于术后第1天起每隔2d于右侧侧脑室注射10μl NS，PD＋aFGF组于术后第1天起每隔2d于右侧侧脑室注射10μl改构体aFGF（0．2μg／μl），假手术组只进行假手术处理，分别于术后4d，1，2，3，4周用阿扑吗啡（apomorphine，APO）给大鼠腹腔注射（0．5mg／kg），观察并记录大鼠行为学变化情况。结果假手术组均未出现旋转行为，PD模型组和PD＋NS组大鼠旋转启动时间逐渐缩短，持续时间逐渐延长，旋转速度逐渐加快，至术后2周旋转行为趋于稳定；在术后2周，PD＋aFGF组旋转启动时间[（5．50±1．18）min]，较PD模型组[（3．60±1．17）min，P〈0．05]和PD＋NS组[（3．10±1．02）min，P〈0．05]明显延长；PD＋aFGF组旋转持续时间[（25．90±8．80）min]，较PD模型组[（55．404-10．1,I）min，P〈0．05]和PD＋NS组[（53．904-12．27）min，P〈0．05]明显缩短；PD＋aFGF组旋转平均速度[（6．52±1．34）r／min]，较PD模型组[（12．90±2．21）r／min，P〈0．05]和PD＋NS组[（11．80±3．65）r／min，P〈0．05]明显减慢。术后3周、4周，大鼠旋转行为各项指标统计学分析结果与术后2周相同。结论PD模型大鼠具有明显得行为学改变，改构体aFGF能明显改善大鼠的旋转行为。