重组人Dll4真核载体的构建及其在CHO细胞中的表达

PCR法扩增rh Dll4基因片段,用EcoR I和Not I双酶切后克隆到真核载体p CA中,并对其进行双酶切和测序鉴定;用电转法将真核载体导入CHO细胞中,并利用Western blot法检测rh Dll4在CHO细胞中的表达水平。经双酶切和测序验证,成功构建p CA-rh Dll4真核表达载体。Western bolt验证表明,rh Dll4基因在CHO细胞中正常表达。经镍柱亲和层析纯化后,rh Dll4蛋白纯度达95%以上。MTT法检测,rh Dll4可以有效地抑制HUVEC增殖;同时可以促进Notch1受体的切割,表明所表达的rh Dll4蛋白具有生物学功能,为本实验下一步抗rh Dll4单克隆抗体的筛选奠定了基础。