白细胞介素-37通过重组人PDZ区域含1蛋白影响痛风发病的作用机制研究

目的探讨痛风发病的分子病理机制,通过初步研究验证并揭示IL-37通过NF-KB通路影响痛风发病中重组人PDZ区域含1蛋白(PDZK1)的作用机制。方法使用炎症信号IL-37刺激HK-2细胞,分别对IL-37(A组)、PDTC+IL-37(B组)、Wortmannin(PI3K通路抑制剂)+IL-37(C组)0、5、10、20、40 ng/ml浓度处理条件下通过实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)检测PDZK1 mRNA表达水平,检测PDZK1蛋白表达水平,用细胞免疫荧光检测PDZK1表达情况及其亚细胞定位。加入抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)(NF-κB通路抑制剂)或者Wortmannin再加入炎症信号刺激蛋白印迹法检测HK-2细胞PDZK1蛋白表达量的变化,组间均采用t检验进行统计学分析。结果PDZK1 mRNA水平分别为[A组(28.71±0.35,28.57±0.31,28.78±0.28,28.63±0.29,28.62±0.19);B组(28.71±0.31,28.83±0.27,28.58±0.26,28.73±0.36,28.68±0.35);C组(28.81±0.32,28.91±0.29,28.72±0.24,28.59±0.18,28.58±0.22)],A组与B组(t=5.73,4.72,4.69,5.86,6.79),A组与C组(t=6.78,7.13,7.47,6.38,5.98)相比差异均无统计学意义(P>0.05)。3组通过蛋白质印迹法分析PDZK1蛋白水平分别为[A组(0.200±0.082,0.412±0.032,0.723±0.063,1.202±0.021,1.222±0.023);B组(0.124±0.064,0.303±0.081,0.325±0.062,0.223±0.071,0.343±0.052);C组(0.017±0.022,0.204±0.015,0.187±0.053,0.302±0.051,0.404±0.051)],A组用不同浓度的IL-37处理后PDZK1蛋白水平随着IL-37浓度的增加而增加;B组的PDZK1蛋白水平随着IL-37浓度的增加而增加,但其蛋白的水平比仅用IL-37处理的组别要低,在IL-37浓度为40 ng/ml时出现了下降的趋势;C组PDZK1蛋白水平随着IL-37浓度的增加而增加,但其蛋白的水平比仅用IL-37处理的组别要低,A、B2组差异无统计学意义(t值分别为1.83,1.37,1.64,1.57,1.49,P>0.05);A、C 2组差异无统计学意义(t值分别为1.28,1.37,1.26,1.42,1.39,P>0.05)。免疫荧光结果分析:3组结果与蛋白质印迹法结果的趋势基本吻合。结论IL-37通过PDZK1蛋白导致痛风发病作用机制可能不是发生在转录水平,很可能发生在蛋白质翻译水平。

化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠Hippo信号通路相关蛋白RASSF1A、SAV1、MST2表达的影响

目的观察化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠Hippo信号通路哺乳动物不育系20样激酶2(MST2)、RAS相关区域家族亚型A(RASSF1A)、含WW结构域的人同源重组蛋白1(SAV1)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用联合造模法制备CAG大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组、维酶素组和化浊解毒方高、中、低剂量组,每组10只,同时设正常组10只。正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,维酶素组给予维酶素混悬液灌胃,化浊解毒方高、中、低剂量组给予相应剂量药液灌胃,连续12周。HE染色观察大鼠胃黏膜组织病理变化,RT-qPCR和Western blot分别检测大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2 mRNA和蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,化浊解毒方高、中剂量组和维酶素组大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05),其中化浊解毒方高剂量组升高最明显。结论化浊解毒方具有干预CAG大鼠和延缓癌变进展的作用,其机制可能与上调模型大鼠抑癌基因RASSF1A、SAV1、MST2的表达相关。

Hippo信号通路与相关疾病的研究进展

Hippo信号通路是在果蝇中发现的一条在进化上高度保守,参与调控器官大小及细胞增殖、凋亡的重要信号转导通路,通过一系列激酶级联反应发挥作用。目前已证实Hippo信号通路在肿瘤的发生发展中起关键作用,并且随着对Hippo信号通路的深入研究,发现其与心血管系统、神经系统、免疫系统及其他系统也有重要关系。本研究综述Hippo信号通路及其在肿瘤和各器官系统疾病中的研究进展,并展望Hippo信号通路的研究前景。

过表达SOD_1 G41S和G41D的重组腺相关病毒载体构建及其在体外N2a细胞中的作用研究

目的研究家族性肌萎缩侧索硬化(fALS)超氧化物歧化酶1(SOD_1)上G41S和G41D两种突变型所致神经元电压门控性钠通道(Na_v)电生理特性的差异及其可能的分子机制。方法构建过表达SOD_1野生型(WT)、SOD_1G41S及SOD_1G41D重组腺相关病毒(rAAV)载体后,体外感染小鼠神经瘤母细胞(N2a),并分为3个实验组:SOD_1WT组、SOD_1G41S和SOD_1G41D组,并以无目的基因rAAV感染的N2a细胞为阴性对照组。利用全细胞膜片钳技术分别记录4组细胞Na_v电流,绘制通道快速激活和稳态失活曲线后分析相关参数。比较各组细胞凋亡分子cleaved caspase-3在感染后24、48和72 h不同时间点的表达情况。结果与对照组和SOD_1WT组比较,感染过表达SOD_1G41S组、SOD_1G41D组rAAV的细胞峰值电流显著增加(P<0.05),且SOD_1G41S组显著高于SOD_1G41D组(P<0.01)。SOD_1G41S组和SOD_1G41D组细胞半数激活电压和半数失活电压显著高于对照组和SOD_1WT组(P<0.05);但SOD_1G41S组半数激活电压高于SOD_1G41D组(P<0.05);SOD_1G41S与SOD_1G41D组半数失活电压比较差异无显著性(P>0.05);各组激活、失活曲线斜率差异无显著性(P>0.05)。虽然24和48h,SOD_1WT、SOD_1G41 S、SOD_1G41D组cleaved caspase-3表达量差异无显著性;但转染72 h后,SOD_1G41S组和SOD_1G41D组cleaved caspase-3表达量高于SOD1WT组,且SOD_1G41S组高于SOD_1G41D组。结论SOD_1G41S和SOD_1G41D突变通过加快Na_v快速激活和抑制失活过程提高神经元活性,SOD_1G41S突变Na_v活性显著高于SOD_1G41D。SOD_1G41S突变导致cleaved caspase-3表达水平高于SOD_1G41D突变。