重组人bFGF的原核表达及功能分析

为研究重组人碱性成纤维细胞生长因子(human basic fibroblast growth factor, bFGF)的原核表达及纯化条件,并分析其功能,该研究根据bFGF基因序列,优化密码子,构建pE T-28a原核表达载体,经IPTG诱导, SDS-PAGE电泳分析验证,采用Ni柱进行分离纯化目的蛋白bFGF。培养NIH3T3细胞、HEK293细胞及CHO细胞,并进行CCK-8实验检测蛋白活性。结果显示,成功构建原核表达载体。经电泳分析,在1 mmol/L IPTG诱导条件下,成功表达目的蛋白bFGF,表达量约占菌体蛋白量32%,蛋白纯度约为96%。活性检测结果显示, ED50分别为5.97 ng/mL、4.21 ng/mL、6.71 ng/mL,可以有效促进NIH3T3细胞、HEK293细胞及CHO细胞增殖。该研究得出,经原核表达系统成功表达人bFGF蛋白且其活性较高。

3T3成纤维细胞和巨噬细胞在含rhbFGF培养基血纤维上的共培养

采用四甲基偶氮唑盐 ( MTT)比色法等方法研究了 3T3成纤维细胞和巨噬细胞在含重组人碱性细胞生长因子 ( rhb FGF)培养基血纤维上的生长行为。结果显示 :在低血清含 rhb FGF的培养条件下 ,两种细胞在血纤维能够良好生长。本研究揭示 ,血纤维不仅可以作为生物支持材料用于三维组织培养 ,而且也可作为 rhb