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表达PEDV S蛋白重组仙台病毒的构建及其免疫原性研究
被引量:
1
1
作者
邹静娴
孟慧
+2 位作者
潘朔楠
陈振海
牟春晓
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
北大核心
2023年第4期43-50,67,共9页
为构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的重组仙台病毒(SeV),并评价其诱导的特异性免疫应答反应,利用PCR扩增得到PEDV中国流行株的全长S基因,构建含S基因的重组仙台病毒感染性克隆质粒(pBeloBAC-SeV-PEDV-S),并拯救重组病毒SeV-PEDV-S...
为构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的重组仙台病毒(SeV),并评价其诱导的特异性免疫应答反应,利用PCR扩增得到PEDV中国流行株的全长S基因,构建含S基因的重组仙台病毒感染性克隆质粒(pBeloBAC-SeV-PEDV-S),并拯救重组病毒SeV-PEDV-S。对重组病毒进行鉴定并测定其生长曲线以确定成功获得表达PEDV S蛋白的重组仙台病毒。将表达S蛋白的仙台病毒免疫小鼠;间接免疫荧光和Western blot试验检测血清中特异性抗体的产生;利用脾脏淋巴细胞分离和流式细胞技术检测特异性T淋巴细胞增殖反应;对血清中的中和抗体效价进行评价。结果表明:重组仙台病毒能特异性表达PEDV S蛋白,且与野生型仙台病毒有一致的生长曲线;免疫小鼠后,重组仙台病毒能有效刺激小鼠产生特异性抗体,诱导较高的中和抗体水平,且能显著促进PEDV特异性T淋巴细胞增殖。综上,该试验为进一步研究重组仙台病毒在猪体上的免疫反应奠定了基础,也为新一代安全有效的PEDV活载体疫苗的研发提供了策略。
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关键词
猪流行性腹泻
S蛋白
重组仙台病毒
免疫原性
下载PDF
职称材料
重组F基因缺失型仙台病毒hFGF2基因治疗制剂质控方法及质量标准的建立
被引量:
1
2
作者
付志浩
李永红
+7 位作者
饶春明
高凯
王兰
毕华
李响
陶磊
郭莹
王军志
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2016年第4期378-383,共6页
目的建立搭载2型人成纤维细胞生长因子(human fibroblast growth factor 2,h FGF2)重组F基因缺失型仙台病毒(Sendai virus,Se V)制剂(Se V-h FGF2/d F)的质控方法与质量标准。方法采用RT-PCR法对Se V载体中插入的目的基因h FGF2和缺失的...
目的建立搭载2型人成纤维细胞生长因子(human fibroblast growth factor 2,h FGF2)重组F基因缺失型仙台病毒(Sendai virus,Se V)制剂(Se V-h FGF2/d F)的质控方法与质量标准。方法采用RT-PCR法对Se V载体中插入的目的基因h FGF2和缺失的F基因进行鉴别,同时扩增两个基因片段M-HN和h FGF2-NP,以鉴别该病毒;鸡红细胞凝集试验检测制品的血凝效价,并计算病毒颗粒数;免疫荧光法测定Se V-h FGF2/d F的感染滴度,结合病毒颗粒数计算其比滴度;Se V-h FGF2/d F体外感染COS7细胞后,ELISA法测定感染上清中h FGF2的表达量;将感染上清体外作用于BALB/c 3T3细胞,3T3细胞增殖法检测h FGF2的生物学活性;酚-氯仿法抽提样品的DNA,Pico-Green法测定制品中DNA残留量;PCR法检测腺病毒残留。结果重组Se V-h FGF2/d F基因组中h FGF2基因、F基因、M-HN片段和h FGF2-NP片段的RT-PCR鉴定结果与理论值相符;血凝效价为1∶512,病毒颗粒数为4.12×1010 VP/ml;感染滴度为2.06×109 CIU/ml,比滴度为5.0%;Se V-h FGF2/d F以MOI 10感染COS7细胞72 h后,ELISA检测上清中h FGF2的表达量为117.1 ng/ml;表达上清中h FGF2的生物学活性为437 IU/ml;DNA残留量为2.24 ng/ml;制品中腺病毒的PCR检测结果为阴性;其他各项指标均符合《人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则》及《中国药典》三部(2010版)要求。结论初步建立了Se V-h FGF2/d F的质控方法和质量标准,为保证该制品的安全、有效、质量可控奠定了基础,同时也为其他Se V载体基因治疗药物的质量控制提供了参考。
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关键词
重组
F基因缺失型
仙台病毒
2型人成纤维细胞生长因子
基因治疗
质量控制
原文传递
题名
表达PEDV S蛋白重组仙台病毒的构建及其免疫原性研究
被引量:
1
1
作者
邹静娴
孟慧
潘朔楠
陈振海
牟春晓
机构
扬州大学兽医学院
扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
出处
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
北大核心
2023年第4期43-50,67,共9页
基金
江苏省农业科技自主创新资金项目[CX(21)2014]
广西重点研发计划项目(桂科AB21238003)
江苏省高校优势学科建设工程项目(PAPD)。
文摘
为构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的重组仙台病毒(SeV),并评价其诱导的特异性免疫应答反应,利用PCR扩增得到PEDV中国流行株的全长S基因,构建含S基因的重组仙台病毒感染性克隆质粒(pBeloBAC-SeV-PEDV-S),并拯救重组病毒SeV-PEDV-S。对重组病毒进行鉴定并测定其生长曲线以确定成功获得表达PEDV S蛋白的重组仙台病毒。将表达S蛋白的仙台病毒免疫小鼠;间接免疫荧光和Western blot试验检测血清中特异性抗体的产生;利用脾脏淋巴细胞分离和流式细胞技术检测特异性T淋巴细胞增殖反应;对血清中的中和抗体效价进行评价。结果表明:重组仙台病毒能特异性表达PEDV S蛋白,且与野生型仙台病毒有一致的生长曲线;免疫小鼠后,重组仙台病毒能有效刺激小鼠产生特异性抗体,诱导较高的中和抗体水平,且能显著促进PEDV特异性T淋巴细胞增殖。综上,该试验为进一步研究重组仙台病毒在猪体上的免疫反应奠定了基础,也为新一代安全有效的PEDV活载体疫苗的研发提供了策略。
关键词
猪流行性腹泻
S蛋白
重组仙台病毒
免疫原性
Keywords
porcine epidemic diarrhea
S protein
recombinant Sendai virus
immunogenicity
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
重组F基因缺失型仙台病毒hFGF2基因治疗制剂质控方法及质量标准的建立
被引量:
1
2
作者
付志浩
李永红
饶春明
高凯
王兰
毕华
李响
陶磊
郭莹
王军志
机构
中国食品药品检定研究院
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2016年第4期378-383,共6页
基金
十二五科技重大专项"生物技术药物质量标准和质量控制技术平台"(2012ZX09304010)
文摘
目的建立搭载2型人成纤维细胞生长因子(human fibroblast growth factor 2,h FGF2)重组F基因缺失型仙台病毒(Sendai virus,Se V)制剂(Se V-h FGF2/d F)的质控方法与质量标准。方法采用RT-PCR法对Se V载体中插入的目的基因h FGF2和缺失的F基因进行鉴别,同时扩增两个基因片段M-HN和h FGF2-NP,以鉴别该病毒;鸡红细胞凝集试验检测制品的血凝效价,并计算病毒颗粒数;免疫荧光法测定Se V-h FGF2/d F的感染滴度,结合病毒颗粒数计算其比滴度;Se V-h FGF2/d F体外感染COS7细胞后,ELISA法测定感染上清中h FGF2的表达量;将感染上清体外作用于BALB/c 3T3细胞,3T3细胞增殖法检测h FGF2的生物学活性;酚-氯仿法抽提样品的DNA,Pico-Green法测定制品中DNA残留量;PCR法检测腺病毒残留。结果重组Se V-h FGF2/d F基因组中h FGF2基因、F基因、M-HN片段和h FGF2-NP片段的RT-PCR鉴定结果与理论值相符;血凝效价为1∶512,病毒颗粒数为4.12×1010 VP/ml;感染滴度为2.06×109 CIU/ml,比滴度为5.0%;Se V-h FGF2/d F以MOI 10感染COS7细胞72 h后,ELISA检测上清中h FGF2的表达量为117.1 ng/ml;表达上清中h FGF2的生物学活性为437 IU/ml;DNA残留量为2.24 ng/ml;制品中腺病毒的PCR检测结果为阴性;其他各项指标均符合《人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则》及《中国药典》三部(2010版)要求。结论初步建立了Se V-h FGF2/d F的质控方法和质量标准,为保证该制品的安全、有效、质量可控奠定了基础,同时也为其他Se V载体基因治疗药物的质量控制提供了参考。
关键词
重组
F基因缺失型
仙台病毒
2型人成纤维细胞生长因子
基因治疗
质量控制
Keywords
F gene-deleted Sendai virus
Human fibroblast growth factor(FGF)2
Gene therapy
Quality control
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达PEDV S蛋白重组仙台病毒的构建及其免疫原性研究
邹静娴
孟慧
潘朔楠
陈振海
牟春晓
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
北大核心
2023
1
下载PDF
职称材料
2
重组F基因缺失型仙台病毒hFGF2基因治疗制剂质控方法及质量标准的建立
付志浩
李永红
饶春明
高凯
王兰
毕华
李响
陶磊
郭莹
王军志
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2016
1
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