第三代重组免疫印迹试验（RIBA）检测HCV抗体的意义

第三代重组免疫印迹试验（ＲＩＢＡ）检测ＨＣＶ抗体的意义上海市输血研究所输血传染病研究室（２０００５１）吴昌烈，冯恭文，周文伟，吴为民，郑岚，高跃明应用第三代免疫印迹试验（ＲＩＢＡ３．０）对６８例酶免疫试验（ＥＬＡ）抗ＨＣＶ抗体阳性、２例可疑和１４例阴...

重组免疫印迹试验对3种进口抗-HCV ELISA试剂组合应用的探讨

目的探讨3种进口抗-HCV ELISA试剂两两组合的应用价值。方法采用3种进口抗-HCV ELISA试剂同时筛查51例抗-HCV结果不一致的弱阳性标本,并用抗-HCV分段确证试剂进行确证。结果 51例抗-HCVELISA弱阳性标本,抗-HCV分段确证试剂阳性35例,可疑16例,16例可疑标本经NAT检测分析：HCV RNA阳性7例,确认为阳性;9例为阴性,判定为抗-HCV可疑。单一ELISA试剂假阴性率19.24%~72.41%,试剂组合后假阴性率4.76%~30.95%。结论选择抗-HCV检测试剂的最佳组合对保证输血安全意义重大。

ORTHO抗-HCV酶联免疫试剂2种孵育试验程序在血液筛查中的比较研究

目的确定1种3代抗-HCV酶免试剂(ORTHO HCV 3.0 ELISA试剂)2种孵育试验过程在血液筛查中是否存在差异。方法随机留取常规献血者血液筛查中检出的抗-HCV反应性的血液标本180(人)份作HCVRNA检测,并用RIBA和不同于血站常规抗-HCV筛查的酶免试剂作抗-HCV复测;依据ORTHO HCV 3.0 ELISA检测试剂说明书中的长、短2种孵育检测程序,同时作对比检测。结果 180份初筛抗-HCV阳性标本中,有16份ORTHO HCV 3.0 ELISA 2种检测程序的检测结果不一致,其中5份为短孵育试验反应性、11份为长孵育试验反应性,短孵育试验漏检2份被确证抗-HCV阳性标本。ORTHO HCV 3.0 ELISA试剂的长孵育检测程序灵敏度高于短孵育试验程序,2种试验程序的S/CO值分布没有差别,但RIBA不确定标本其S/CO值分布在一定的灰区范围内。结论在献血人群血液筛查中,采用具有更高灵敏度的长孵育酶免程序和设定合理的结果判定灰区,有助于预防输血传播HCV,提高血液的安全。

丙型肝炎病毒抗体化学发光免疫分析法≥95%阳性预测值最佳吸光度/临界值建立方法学和重要性探讨

目的确定丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体阳性预测值≥95%的最佳吸光度/临界值(signal-to-cutoff,S/CO),确定首都医科大学附属北京地坛医院实验室医学决定水平,为探索不同系统丙型肝炎病毒抗体检测试剂95%阳性置信区间建立方法学。方法收集2021年7月至2022年2月门诊及住院患者进行化学发光免疫分析法(chemiluminescence analysis,CLIA)初筛检测同时进行HCV RNA检测的血浆样本共282例,其中抗体初筛有反应性(S/CO≥1)样本252例,阴性样本30例,进行重组免疫印记试验(recombinant immunoblot assay,RIBA)并查阅其HCV RNA检测结果,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线得到预测本实验室阳性预测值≥95%时HCV感染的抗体S/CO值。结果初筛为阴性的30例样本双重确证试验结果均为阴性;排除16例HCV感染史不明确的样本,丙型肝炎病毒抗体S/CO≥1的236例样本经双重确证试验得到真阳性样本188例,阴性样本48例,经ROC曲线分析,本实验室阳性预测值≥95%时,本实验室抗体S/CO值为7.83,灵敏度为93.09%,特异度为95.83%,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.98(P<0.0001)。结论为临床提供本实验室阳性预测值≥95%时HCV感染抗体的S/CO值以协助临床诊疗。

无偿献血者抗-HCV筛查与RIBA补充实验情况的综合分析

目的评估献血人群抗-HCV ELISA试剂的初筛效果、重组免疫印迹试验(RIBA补充实验)和HCV RNA核酸检测的情况,以探索无偿献血人群抗-HCV的筛查效果。方法收集2013年5月31日-2015年1月20日118 350例标本,采用2个不同厂家抗-HCV ELISA初筛试剂检测,初筛有反应性的标本(S/CO≥0.75)采用RIBA的方法进行补充实验,RIBA补充实验不确定结果的标本进行核酸检测。结果 2种初筛酶免试剂检测结果的阳性符合率为64.6%,阴性符合率为99.9%,总符合率为99.9%。北京万泰抗-HCV抗体诊断试剂盒检测阳性标本93.3%分布于S/CO≥10.0以上,上海科华抗-HCV抗体诊断试剂盒检测阳性标本91.3%分布于S/CO≥7.0以上。2种初筛试剂单边阳性的结果中,RIBA补充实验总阳性结果的比例为2.7%,不确定结果的比例为18.4%,阴性结果的比例为78.9%,北京万泰试剂单边阳性对应有2例RIBA阳性结果,上海科华试剂单边阳性对应有1例RIBA阳性结果,2种试剂检测性能具有一定的互补性。初筛单边阳性及RIBA补充实验结果为不确定的标本核酸检测均为阴性。RIBA阳性标本条带分析结果中,Core、NS3、NS4.1、NS4.2、NS5条带所占的比例分别为35.4%、33.9%、14.9%、2.4%、13.4%;RIBA不确定结果中,仅有Core、NS3 2种条带,比例为49.2%、50.8%。结论在献血人群中抗-HCV ELISA试剂检测存在生物学上的假阳性,一定程度上造成血液资源的浪费,选择灵敏度高、特异性好的初筛试剂,辅以RIBA补充实验,对于保证输血安全具有非常重要的意义。

旋毛虫抗原基因Ts88原核表达及重组蛋白鉴定

目的 原核表达旋毛虫抗原基因Ts88,并对重组蛋白的抗原性进行鉴定。 方法 免疫筛选cDNA文库得到旋毛虫抗原新基因Ts88,克隆入原核表达载体pET 2 8c(+ ) ,异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达。重组蛋白免疫小鼠制备免疫血清 ,ELISA检测抗体滴度。蛋白质印迹法检测重组蛋白的抗原性。免疫荧光试验确定Ts88蛋白在虫体的分布。 结果 经原核表达的Ts88重组蛋白 ,用其免疫小鼠可得到高滴度的抗体血清。蛋白质印迹法结果表明该重组蛋白能与旋毛虫病患者血清、旋毛虫病猪血清、人工感染及人工免疫兔血清反应 ,不与其他蠕虫病患者血清发生交叉反应 ,并能识别旋毛虫虫体天然抗原成分。免疫荧光试验显示Ts88蛋白主要分布于虫体体壁。 结论 成功制备Ts88基因的重组蛋白 。

马传贫驴白细胞弱毒疫苗株跨膜蛋白主要免疫决定区基因的克隆与表达

从感染驴白细胞的马传贫驴白细胞弱毒疫苗株前病毒DNA中克隆了编码跨膜蛋白主要免疫决定区 (TMIR)的基因 ,并在大肠杆菌中进行了表达。所表达的融合蛋白有一部分是可溶的 ,其氨基端带有 6个组氨酸的标签 ,因此可以用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下进行纯化。在间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)和免疫印迹试验中 ,重组的TMIR蛋白可与马传贫阳性血清样品发生反应 ,而与健康马血清无任何反应。这表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性 ,可用于马传贫弱毒疫苗株在体内外复制、接种马体内免疫应答及马传贫诊断的研究。

深圳地区抗-HCVRIBA结果不确定献血者的随访研究

目的追踪随访深圳地区抗-HCV ELISA结果呈反应性、RIBA结果为不确定的献血者,研究分析其HCV转归情况,为抗-HCV ELISA呈反应性结果的无偿献血者召回提供理论基础和科学依据。方法追踪随访2年前32名抗-HCV RIBA结果为不确定的献血者,对其血液标本进行抗-HCV ELISA、HCV-RNA(NAT)、ALT以及HCV病毒载量检测,若HCV-RNA阴性则加做RIBA确证试验。结果 32例随访者血液标本中6例抗-HCV ELISA呈反应性,包含1例ALT升高同时HCV-RNA和病毒载量测定阳性;3例RIBA确证阳性。结论抗-HCV RIBA结果为不确定的献血者仍属于献血高危人群,存在一定的HCV输血传播风险。

不确定RIBA结果在HCV感染诊断中的预测意义

目的:评价诊断丙肝病毒(HCV)感染时不确定的重组免疫印迹试验(R IBA)结果的预测意义。方法:从1550份血清结果中筛选出142份不确定结果进行回顾性分析,分别分析4个条带出现单反应的几率及其预测意义。结果:142份不确定结果中单条带反应率分别为:c33c 51%,c-22(p)36%,N S5 11%,C 100(p)2%。各单反应条带中酶免法(E IA)结果呈高滴度同时多聚酶链反应(PCR)结果呈阳性的率分别为:c33c 60%,c-22(p)26%,N S5 8%,c100(p)0%。4个单反应条带中E IA与PCR同时呈阴性的率相同。结论:R IBA4个条带出现单条带反应的几率不同;4个条带中c33c的阳性预测值最高,为60%,提示c33c单阳性预示很可能感染HCV,其它三个条带的阳性预测值较低且无差异;4个条带的假阳性预测值低且无差异,提示单条带阳性者未感染HCV的可能性小。

化学发光微粒子免疫测定技术对低风险人群HCV感染确证的应用价值

目的应用化学发光微粒子免疫测定(CMIA)技术检测一种酶联免疫吸附试验(ELISA1)反应性样本,通过HCV核酸和蛋白检测参考标准分析CMIA在献血者HCV感染确证中的应用价值。方法 102例ELISA1反应性献血者血液样本补充核酸3项联检、另一种酶联免疫吸附试验(ELISA2)、丙型肝炎病毒抗体补充试验(Western Blot法)和CMIA试验。结果 102例抗-HCV阳性献血者中,32例(31.37%,32/102)HCV RNA反应性样本,50例(49.02%,50/102)ELISA2及Western Blot均为反应性。以HCV核酸检测结果为参考标准,CMIA与之低度相关(Spearman相关系数rs=0.395,P<0.01),Kappa检验两者一致性弱(Kappa=0.270,P<0.01)。以ELISA2及Western Blot蛋白检测结果为参考标准,CMIA与之结果高度相关(Spearman相关系数rs=0.713,P<0.01),Kappa检验两者高度一致性(Kappa=0.674,P<0.01)。结论 CMIA作为HCV感染后蛋白标记物的检测方法,对低风险人群HCV病毒感染的确证有较大的应用价值。

M2抗体重组人源靶抗原二联体在原发性胆汁性肝硬化患者中的检测及应用

目的利用重组抗原BCOADA-E2和PDC-E2的二联体(BP),检测PBC患者血清中的M2抗体并探讨其临床意义。方法经Ni-NTA亲和柱纯化重组表达的BP融合蛋白,分别建立免疫印迹法(IBT)和酶链免疫吸附(ELISA)法检测60份PBC患者血清,以60份其他肝病患者6、0份自身免疫病患者8、0例正常人血清为对照组。结果经常规试剂盒检测为M2(+)的60份患者血清,利用重组抗原检测阳性53例,阴性7例,阳性率为88.3%;经常规试剂盒检测为M2(-)的60份自身免疫病患者血清、60份其他肝病患者和80例正常人血清,利用重组抗原检测为M2(-)。结论利用重组抗原BP检测M2抗体敏感性较高。对临床辅助诊断PBC提供一定的手段。

重组人孕激素受体单克隆抗体的鉴定和初步应用

重组人孕激素受体单克隆抗体的鉴定和初步应用巩平张蕾孙素莲（北京医科大学临床肿瘤学院免疫室）乳腺癌组织中孕激素受体（ＰＲ）水平的检测对乳腺癌的治疗和预后具有重要的指导意义。探索ＰＲ的检测方法，使之达到简便、灵敏、特异，易于推广普及，是当前乳腺癌研究的热...

RIBA在慢性丙型病毒性肝炎中的应用价值

采用含ＨＣＶ三种抗原（Ｃ_（２２），Ｃ_（３３），Ｃ_（１００））的重组免疫印迹试验（ＲＩＢＡ）检测了７１例抗－ＨＣＶ阳性（ＲＩＡ－２法）的慢性非甲非乙型肝炎患者血清并与ＨＣＶＲＮＡ结果进行了比较。ＲＩＢＡ阳性５６例，可疑８例，对应ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９４．６４％（５３／５６）和３７．５％（３／８），ＲＩＢＡ阴性的７例均未检出ＨＣＶ ＲＮＡ。ＨＣＶＲＮＡ阳性病例中ＲＩＢＡ多为阳性，可疑仅占５．３６％（３／５６），无１例阴性。可见，ＲＩＢＡ阳性即表示ＨＣＶ感染且存在病毒血症，ＲＩＢＡ可作为第二代ＲＩＡ或ＥＬＩＳＡ查抗－ＨＣＶ的确证实验。

应用梅毒螺旋体明胶凝集试验等检测诊断梅毒的效果比较

目的:比较梅毒诊断中应用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、快速血浆反应素环状卡片实验(RPR)、梅毒螺旋体抗体检测(TP-Ab)的价值。方法:选取2021年1月—2022年9月泗洪县第一人民医院检验科检验的104例疑似梅毒患者。以重组免疫印迹技术(recombinant immunoblot assay,RIBA)检验作为“金标准”,比较所有疑似患者检测TPPA、RPR、TP-Ab在梅毒诊断中的价值,通过受试者工作特征曲线(ROC)分析其诊断效能。结果:金标准诊断结果为阳性79例、阴性25例,TP-Ab检测阳性79例、阴性25例,RPR检测阳性78例、阴性26例,TPPA检测阳性80例、阴性24例;TPPA的特异度(96.00%)、准确率(98.08%)高于TP-Ab特异度(76.00%)、准确率(88.46%)、也高于RPR的特异度(72.00%)、准确率(85.58%),差异有统计学意义(P<0.05);TPPA检测的ROC曲线下面积最大,曲线下面积(AUC)=0.974,RPR与TP-Ab、RPR与TPPA、TP-Ab与TPPA的AUC值两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:在梅毒诊断中,应用TPPA、RPR、TP-Ab检测诊断,TPPA检测的诊断效能最高,可为梅毒早期诊断治疗提供依据,具有一定应用价值。

丙型肝炎病毒抗体筛查阳性结果确证方案的探讨

目的明确抗-HCV酶免检测结果与确证阳性结果之间的相互关系,以期建立简便、经济的血液筛查实验室抗-HCV确证试验方案。方法使用重组免疫印迹试验结合核酸检测方法对134份酶免抗-HCV阳性样本确证,初步探讨2或3种抗-HCV酶免试剂(Ortho、Murex和科华联合复检的S/Co值与阳性预期值的关系及不同试剂组合检测的阳性预期值。结果134份样本中,92份真阳性,5份可疑,其余均为阴性。Ortho和Murex试剂的S/Co与阳性预期值呈正相关,当S/Co≥3.8时,阳性预期值分别可达98.33%和97.78%。Murex联合科华、Ortho联合科华以及3种试剂同时检测为阳性时的阳性预期值为100%;Ortho联合Murex的阳性预期值为98.48%,与上述其它2或3种试剂组合比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论2种或3种酶免试剂联合复检的确证方案优于美国CDC推荐的S/Co≥3.8方案。在常规血液筛查实验室,可以选择3种抗-HCV试剂中的任2种同时复检,先行对抗-HCV阳性标本确证,对无法确证的样本再作重组免疫印迹试验分析。

现行血液筛查策略下HCV反应性结果分析及利用

目的分析抗-HCV反应性献血者检测结果,甄别献血者HCV感染情况,讨论对反应性献血者分类管理的可行性。方法按照献血者HCV检测结果(2遍ELISA、1遍NAT),将HCV检测反应性献血者标本分为3组(抗-HCV和HCV RNA均为反应性的标本组、单独HCV RNA反应性标本组、单独抗-HCV反应性标本组)。分析2017年5月-12月期间HCV检测反应性献血者标本检测结果,以重组免疫印记试验(RIBA)结果作为确证结果,比较不同组别阳性预期值(PPV)差异;分析不同屏蔽界值(常规检测屏蔽界值、最佳屏蔽界值、最高PPV对应屏蔽界值)下每种试剂灵敏度、特异性、阳性预测值。对于PPV低的分组标本进行ELISA S/CO值分层分析并比较不同屏蔽界值下PPV。结果检测期间不合格标本939例(0.49%,937/191627),经RIBA确证,抗-HCV阳性率为10.67%(100/937);单独HCV RNA反应性组标本2例(0.001%,2/939);抗-HCV和HCV RNA均为反应性组标本63例(6.71%,63/939),PPV为96.83%(61/63);单独抗-HCV反应性组标本874例(93.08%,874/939),PPV为4.46%(39/874),其ELISA双试剂均为反应性标本和单试剂反应性标本的PPV分别为18.72%、0.15%,两者PPV差异有统计学意义(P<0.05),比较不同S/CO值分层的PPV差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线获得试剂抗HCV最佳屏蔽界值分别为9.29、3.97,不同屏蔽界值下PPV差异有统计学意义(P<0.05)。单独抗-HCV反应性标本组PPV由常规检测屏蔽界值下的4.46%提高到最佳屏蔽界值下49.35%,差异有统计学意义(χ^(2)=191.62,P<0.05)。结论抗-HCV和HCV RNA均为反应性献血者可判断为HCV感染者,可永久性屏蔽;单独抗-HCV反应性标本的S/CO值与RIBA确证结果呈正相关,S/CO值越高,确证阳性率越高。实验室可在现行血液检测策略下,通过建立具有高阳性预期值的屏蔽界限值或者增加确证试验,判断单独抗-HCV反应性献血者的HCV感染状态。

ROC曲线对ELISA检测丙型肝炎抗体阳性判断值的确定和分析

目的采用受试者工作特征（ROC）曲线确定和分析2种不同酶免分析系统酶联免疫吸附试验（ELISA）检测丙型肝炎抗体（抗HCV）的阳性判断值（Cut-off）。方法收集202份血清,用重组免疫印迹法（RIBA）确认抗HCV,同时采用国产addcare ELISA 1100全自动酶免分析系统（简称addcare ELISA 1100）和进口TECAN＋FAME组合的酶免分析系统（简称TECAN＋FAME酶免系统）检测抗HCV,对吸光度（A）值绘制ROC曲线,得出ELISA检测抗HCV在本实验室的最佳Cut-off值。结果以RIBA结果为金标准,ROC曲线分析结果显示,addcare ELISA 1100检测抗HCV的最佳Cut-off值为0.448,敏感性为99.3%,特异性为96.7%,约登指数为0.960,ROC曲线下面积为0.998,TECAN＋FAME酶免系统检测抗HCV的最佳Cut-off值为0.406,敏感性为99.3%,特异性为96.7%,约登指数为0.960,ROC曲线下面积为0.998。结论采用ROC曲线分析得到两种不同酶免分析系统ELISA检测抗HCV的Cut-off值分别为0.448和0.406,检测抗HCV的＂灰区＂分别设定为0.140-0.448和0.140-0.406,均可优化检测性能。

血液筛查中丙型肝炎病毒检测方法的应用评价

目的比较血液筛查中丙型肝炎病毒的检测方法,并探讨其应用价值。方法收集2011年8～12月血液筛查中酶联免疫吸附试验(ELISA)、丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)阳性标本共41例,使用重组免疫印迹试验进行确证;同时用新创、Ortho两种抗-HCV ELISA试剂以及Architect Anti-HCV Reagent化学发光试剂进行检测,比较三者结果的差异。结果统计学分析显示,3种检测方法的检测结果差异有统计学意义。重组免疫印迹试验检测HCV阳性35例,阴性6例,与Architect化学发光法结果相符,新创ELISA法检测41例全为阳性,Ortho ELISA法检测阳性33例,阴性8例。结论 Ortho试剂对HCV检测的特异性高于新创试剂,化学发光法对HCV检测的特异性高于ELISA法,化学发光法与ELISA法联合检测能提高血液筛查中HCV的阳性检出率,对可疑标本再做重组免疫印迹试验分析。

深圳市无偿献血血液筛查结果分析

目的 :了解深圳无偿献血输血感染性疾病真实感染情况。方法 :采用血清学实验 EL ISA (酶联免疫吸附试验 )、 RIBA (重组免疫印迹试验 )、 WB (免疫印迹试验 )、 TRU ST (甲苯胺红不加热血清试验 )、 TPHA (梅毒螺旋体血凝试验 )和中和实验及分子生物学实验 PCR (聚合酶链反应 )进行血液初筛和对阳性结果进行确证分析。结果 :深圳市无偿献血输血感染性疾病 HBV、抗 - HCV、抗 - HIV和梅毒流行率分别为 0 .79%、 0 .0 92 %、 4 .4 5 / 10万和 0 .6 3%。结论 :应提高目前试剂的特异性和灵敏度 ,进一步确保输血安全。