重组分泌型内皮抑素抑制兔角膜新生血管形成的实验研究

目的:研究重组分泌型内皮抑素(endostatin)对兔角膜新生血管的抑制作用。方法:利用角膜缝线法诱导兔角膜新生血管形成。在缝线后第1天,将重组内皮抑素和生理盐水分别注射于兔球结膜下,观察角膜新生血管生长状况及组织病理学改变。结果:重组内皮抑素治疗组新生血管长度及生长面积明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);光镜下,治疗组与对照组比较,基质层新生血管少,管腔小,浆细胞及成纤维细胞少。结论:球结膜下注射重组内皮抑素可有效抑制兔角膜新生血管的形成,为临床上角膜新生血管的防治提供新的方法。

重组分泌型内皮抑素腺相关病毒的包装及在膀胱癌EJ细胞系中的表达

目的:包装重组分泌型内皮抑素腺相关病毒(rAAV-Endostatin)制备内皮抑素原位基因治疗膀胱癌的基因载体药物。方法:采用分子生物学方法构建腺相关病毒质粒载体(pAAV-IgG-Endostatin),酶切、测序鉴定;经质粒共转染方法包装rAAV-Endostatin,测定病毒颗粒滴度并电镜下鉴定;转染膀胱癌EJ细胞后,ELISA法测定重组内皮抑素的浓度。结果:pAAV-IgG-Endostatin的构建和rAAV-Endostatin的包装均获成功,病毒滴度达1.0×1012v.p/ml。感染EJ细胞后内皮抑素成功表达并分泌,上清液中浓度达54.09ng/ml。结论:rAAV-Endostatin载体的构建、包装与表达的成功为rAAV-Endostatin原位基因治疗膀胱癌的实验研究奠定了基础。

重组人分泌型血管内皮抑素对鼠移植性肝癌抑制作用的实验研究

目的 :在毕赤酵母菌 (GS115 )中表达有活性的重组人分泌型血管内皮抑素蛋白 ,探讨其对鼠移植性肝癌的抑制作用。方法 :成功构建的分泌型酵母表达载体 ,经电转化法转入酵母菌中 ,SDS PAGE电泳筛选阳性重组子 ,经Heparin亲和层析柱进行初步纯化。MTT法测定重组人血管内皮抑素对脐静脉血管内皮细胞 (ECV 30 4 )增殖的抑制作用 ;HepG2 .2 .15细胞注射裸鼠成瘤后 ,体内验证重组蛋白的抑瘤活性。结果 :构建的酵母表达载体经PCR、测序鉴定完全正确。SDS PAGE电泳证实重组菌较空白菌多一明显条带 ,Heparin亲和层析后 ,1MNaCl洗脱的蛋白峰在体外可特异性抑制血管内皮细胞的增殖 ,体内可明显抑制鼠移植性肝癌的生长 ,并诱导肿瘤细胞凋亡。结论 :在毕赤酵母菌中成功表达了有活性的重组血管内皮抑素蛋白 ,对肿瘤治疗具有很好的开发前景。

内皮抑素基因联合重组干扰素-α蛋白对卵巢癌抑制作用的研究

目的:探讨联合应用内皮抑素基因和重组干扰素-α(IFN-α)蛋白对鼠卵巢癌移植瘤的抑制作用。方法:利用人卵巢上皮癌细胞株(3AO细胞)制备卵巢癌移植瘤动物模型,以重组IFN-α和脂质体介导分泌型内皮抑素重组载体基因(pVAX-sEn)瘤内及瘤周注射,每周2次,测量瘤体大小,流式细胞仪检测pVAX-sEn基因转染对肿瘤细胞细胞周期的影响,免疫组化法检测肿瘤微血管密度。结果:联合注射组瘤体体积显著小于pVAX-sEn单用组(P<0.01);联合治疗组肿瘤细胞凋亡率为18.5%,高于pVAX-sEn单用组;联合治疗组肿瘤细胞坏死明显,血管较少,肿瘤微血管密度为3.16±1.12,明显少于pVAX-sEn单用组(P<0.01)。结论:脂质体介导pVAX-sEn瘤内注射可有效抑制卵巢癌移植瘤的生长,联合应用重组IFN-α效果更显著。

膀胱

膀胱移行细胞癌患者血浆p14基因异常甲基化检测的意义;女性压力性尿失禁经耻骨上膀胱尿道悬吊术后并发症的防治;经尿道膀胱颈电切术治疗女性膀胱颈增生（附26例报告）;表浅性与浸润性膀胱癌基因表达谱的比较;